AM-AM-FS-Is-0209 奶、奶粉中黄曲霉毒素M1的含量测定-通过immunoaffinity色谱清除及高效液相色谱检测

AMAMFSIs0209  奶  奶粉  黄曲霉毒素M₁  高效液相色谱法

AM-AM-FS-Is-0209

奶、奶粉中黄曲霉毒素M₁的含量测定

——通过immunoaffinity色谱清除及高效液相色谱检测

1. 适应范围：

本法适用于奶及奶粉中黄曲霉毒素M₁的含量测定。最低可测定的含量为0.08µg/ kg全奶粉，再生液体奶为0.008µg/L。

本法还适用于低脂奶、脱脂奶、低脂奶粉、脱脂奶粉。

2. 原理概要：

通过免疫亲和色谱将黄曲霉毒素M₁的从样品中分离出来，再用高效液相色谱检测含量。

3. 仪器和试剂
   1. 仪器

注射器（10ml，50ml），真空系统，离心分离机，移液管（1.0ml，2.0ml，50ml），烧杯（250ml），容量瓶（100ml），水浴，滤纸（Whatman No.4），锥形玻璃量筒（5ml，10ml，20ml），高效液相色谱，分光光度计，天平（0.01g）(带荧光检测器5倍噪声0.02ng黄曲霉素可检测反相分析柱)

1. 试剂

免疫亲和柱，对黄曲霉素M₁ 的容量为不小于100ng，含4ng毒物时回收率不低于80%，柱子使用前进行容量及回收率检查。

乙腈（高效液相色谱纯），

25%、10%（v/v）乙腈水溶液，

氮气，

氯仿，

黄曲霉毒素M₁标准溶液：校准液（10ng/ml）、储备液(0.1ng/ml)、工作液(5ng/ml)

4. 方法概述

4.1 采样：

参照ISO707[1]

4.2 制备测试样品：

（1）奶：水浴35~37℃加热，过滤或离心分离。

（2）奶粉：称取样品10g溶于50ml50℃热水，搅拌至得均匀混合物，冷至室温，转移到容量瓶，过滤或离心。

4.3 immunoaffinity柱的准备

将注射器接到I免疫亲和柱的顶部，再将柱与真空系统相连。

4.4 提取和纯化样品：

先将50ml样品通过柱子(2~3ml/min)，再用10ml水洗涤，将柱子吹干，断开真空系统，用4ml乙腈洗提黄曲霉毒素M₁。整个过程1min.氮气30℃吹收集物至50~500 μl

4.5 用高效液相色谱检测样品中黄曲霉毒素M₁含量

   选择合适的柱子和流动相流速，连续2次进样峰高或峰面积相差不超过5%，如超过需将样品定量稀释，连续5次进样后应注射1次标准样。

5．精确度

   下表为国际合作测试统计数据，参加实验室有16个，低脂（1%）和高脂（28%）奶粉样各一种，黄曲霉素水平在0.08至0.06μg/kg之间，统计分析按ISO5725-1和ISO5725-2进行。

表A.1—精确度数据

6．来源

国际标准化组织ISO 14501-1998（E）