AM-AM-FS-Ac-20027 水果与水果制品中的左旋苹果酸

AMAMFSAc20027  水果  水果制品  左旋苹果酸  旋光法

AM-AM-FS-Ac-20027

水果与水果制品中的左旋苹果酸

1.仪器和试剂

1.1 仪器

旋光仪——准确至0.1°，具钠灯。

1.2 试剂

(a)活性炭——酸洗过的。

(b)左旋苹果酸——A级或相当A级。需通过下述纯度检验:将0.5g左旋苹果酸溶于约5Oml水，用1M NaOH调pH至5.5，用水稀释至1OOml。取约35ml溶液加1.5g二水合醋酸铀酰，暗处放置30min，过滤。在200mm管中测旋光度，旋光度а应在-4.88°至-4.84°之间。

(c)左旋苹果酸标准溶液——(1)储备溶液——1Omg/ml。在15Oml烧杯中，取1.Og左旋苹果酸和4.0g柠檬酸，加50ml H₂O。在pH计上电磁搅拌下，用50% NaOH溶液调节pH至5.5。定量转移至1OOml容量瓶中，用H₂O稀释至刻度。(2)工作溶液——1，2，3mg/ml。分别吸取10,20和30ml贮备液至100ml容量瓶，用H₂O稀释至刻度。

2.试验过程

2.1.标准曲线的绘制

在2OOmm旋光管中测定每种标准溶液的旋光度(α₁)。取每种标准溶液约35ml至5Oml锥形瓶中，各加1.5g二水合醋酸铀酰，暗处放置3Omin不时搅拌。过滤，在2OOmm旋光管中测定每种澄清的苹果酸铀络合物的旋光度(α_u)，以每1OOml溶液中含左旋苹果酸的mg数对旋光差(α=α_u-α₁)作图。

2.2.样品制备

(a)果汁——称取62.5g样品至250ml容量瓶中，加0.1g KOAc和1OOml乙醇，用乙醇稀释至刻度，混匀，静置1h，快速滤纸过滤。

(b)蜜饯和含水果块的高糖制品——粉碎，称62.5g置于25ml烧杯中。加0.1g KOAc,30ml H₂O和100ml乙醇，混匀，用乙醇定量转移至250ml容量瓶中，井稀释至刻度，混匀，静置1h，快速滤纸过滤。

(c)水果——粉碎，称62.5g至250ml烧杯中，方法同(b)，但不要加30mlH₂O。

(d)葡萄汁——称125g至5OOml容量瓶中，加1.Oml饱和KOAc溶液和2OOml乙醇，混匀。用乙醇稀释至刻度，混匀，静置过夜。用WhatmanNo.40或相当的滤纸过滤。

(e)葡萄蜜饯或其他高糖葡萄制品——粉碎，称125g至5OOml烧杯中，加1.Oml饱和KOAc溶液，5Oml H₂O和2OOml乙醇，混匀，用乙醇将混合物定量转移至5OOml容量瓶中，并稀释至刻度，混匀，放置过夜，用Whatman40号滤纸或相当的滤纸过滤。

(f)葡萄——粉碎，称125g入5OOml烧杯，步骤同(e)，但不要加5Oml H₂O。

2.3.测定

转移2OOml整份滤液至250ml，5.7cm外径×13cm高的广口瓶中。加磁棒，并加入30ml无水乙醇。吸取1Oml滤液用0.1M NaOH电位滴定至pH8.4，计算出中和2OOml滤液所需的NaOH毫升数。按每毫升NaOH溶液相当于0.6ml饱和Pb(OAc)₂溶液，计算向广口瓶中加入多少Pb(OAc₎₂溶液中和2OOml滤液。磁性搅拌1Omin，以15OOrpm离心6min。用几滴Pb(OAc)₂溶液试验上层清液是否还有沉淀.用2OOml乙醇搅拌洗涤5min,和倾泻沉淀。(葡萄和葡萄制品，使用85%乙醇)。离心5min，弃去清液，加25ml水于沉淀中，混匀至呈浆状。用H₂S0₄(1+9)和pH计调pH至1.5,在60ml粗孔含石棉垫的玻璃砂漏斗上抽吸过滤去除PbSO₄。一次1Oml H₂O洗沉淀，合并滤液和洗液入15Oml有刻度的烧杯，总体积应小于9Oml。用pH计及50% NaOH调pH至5.5。定量转移至1OOml容量瓶中，用H₂O稀释至刻度。加6g活性碳，混匀，静置3Omin，用精细滤纸过滤，滤液应无色。用2OOmm旋光管测定该溶液的旋光度(a₁)。在5Oml锥形瓶中放35ml滤液，加1.5g二水醋酸铀酰,于暗处放置3Omin,不时振摇,过滤后测苹果酸铀酰络合物清液的旋光度(α_u)。用下列之一公式计算1OOg试样中所含左旋苹果酸的毫克数。

(a)(α_x×C×1O0)/(α_s×W)。其中α_x=样品的旋光差=α_ux-α_lx；α_s=标准溶液中的旋光差=α_u-α_ls；C=1OOml标准溶液中左旋苹果酸的毫升数；W=1OOml最终溶液中所含样品克数。

(b)a_x×2×(标准曲线溶液中所含左旋苹果酸的总毫克数)/(标准曲线溶液中旋光度之和)。

(c)(左旋苹果酸的毫克数/1OOml标准曲线溶液)×2。

3.来源

AOAC官方方法968.19（第17版）