MM_FS_CNJ_0006 出口粮谷中草丙磷残留量检验方法

MM_FS_CNJ_0006出口 粮谷 草丙磷 残留量 气相色谱法 外标法定量

MM_FS_CNJ_0006

     出口粮谷中草丙磷残留量检验方法

1.适用范围

    本方法适用于出口糙米中草丙磷(铵盐)残留量的检验。

2.原理概要

    糙米中残留的草丙磷及其代谢物3-甲基膦丙酸，用水、三氯甲烷混合提取，抽滤，收集水相与三氯甲烷相。振摇，进行液-液分配。离心，收集水相提取液。经强碱性阴离子交换树脂柱净化。然后用原乙酸三甲酯进行衍生化。再过PT-中性氧化铝柱净化后，用配有火焰光度检测器的气相色谱仪测定，外标法定量。分别测定草丙磷铵盐和3-甲基膦丙酸后再计算为以草丙磷铵盐计的总量。

3.主要试剂和仪器

3.1.主要试剂

    三氯甲烷；

    二氯甲烷；

    甲醇；

    丙酮；

    正己烷；

    冰乙酸；

    原乙酸三甲酯〔CH₃C(OCH₃)₃〕；

    强碱性阴离子交换树脂：AGI-X8，200～400目；

    PT-中性氧化铝柱：层析用(2g)；

    助滤剂：Celite 5，使用前用水、三氯甲烷洗涤；

    草丙磷铵盐(C₅H₁₅N₂O₄P)标准品：纯度≥99%；

    3-甲基膦丙酸(C₄H₉O₄P)标准品：纯度≥99%；

    标准溶液：分别准确称取适量的草丙磷铵盐和3-甲基膦丙酸标准品，用水配制成浓度为1.00mg/mL的标准储备液。根据需要再用水稀释成适用浓度的标准工作溶液。

3.2.仪器

    气相色谱仪：配有火焰光度检测器，磷滤光片526nm；

    振荡器；

    离心机；

    旋转蒸发器；

    超声波发生器；

    玻璃层析柱：25cm×1.5cm(内径)；

    玻璃注射器：10mL；

    微量注射器：10μL。

4.试样的抽取与制备

4.1.检验批

    以不超过4000袋(200t)为一检验批。

    同一检验批的商品应具有相同特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。

4.2.抽样数量

    按一批总袋数的平方根式(1)抽取：

a＝……………………………(1)

式中：N——全批袋数；

      a——抽样袋数。

注：a值取整数，小数部分向前进位为整数。

4.3.抽样工具

    金属单管取样器：全长55cm(包括手柄)，直径1.5cm，沟槽长度应超过袋对角线长度的一半。

    取样铲；

    分样板；

    样品筒(袋)：可密封；

    分样布或适用铺垫物。

4.4.抽样方法

4.4.1.倒包抽样：从堆垛的各部位随机抽取规定的应抽样袋数的10%(每批一般不少于3袋)，将袋口缝线全部拆开，平置于分样布或其他洁净的铺垫物上，双手紧握袋底两角，提起约成45°倾角，倒拖约1m，使袋内货物全部倒出。查看袋内和袋间品质是否均匀。确认情况正常后，用取样铲随机在各部位抽取样品，立即将样品倒入盛样容器内。每袋抽取样品数量应基本一致。

4.4.2.袋内抽样：按规定的应抽样袋数的90%，在堆垛四周的上、中、下各层以曲线形走向随机抽取。将取样器管槽朝下，从每袋一角依斜对角方向插入袋内，然后将管槽旋转朝上，抽出取样器，立即将样品倒入盛样容器内。每袋抽取样品数量应与倒包抽样基本一致。

    每批样品总量应不少于4kg。

4.4.3.大样缩分

    集中袋内和倒包抽样所取全部样品，倒于分样布上，用分样板按四分法缩分出样品不少于2kg，加封后标明标记并及时送交实验室。

4.5.试样制备

    将样品按四分法缩分至1kg，全部磨碎并通过20目筛，混匀，均分成两份，作为试样，装入洁净的容器内，密封，标明标记。

4.6.试样保存

    将试样于－5℃以下避光保存。

注：在抽样及制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

5.过程简述

5.1.提取

    称取试样约20g(精确至0.1g)于250mL具塞锥形瓶中，加入50mL三氯甲烷及50mL水，振荡提取30min。在平底漏斗内铺上5g助滤剂，抽滤提取液。残渣再用40mL水及50mL三氯甲烷重复提取一次，并抽滤。合并滤液，充分振摇后，于3000r/min下离心5min。将上层水相转移至100mL容量瓶中，用水稀释定容。

5.2.净化

    称取5g AGI-X8强碱性阴离子树脂伴以去离子水装入玻璃层析柱中。加入30mL水预淋洗后，准确移取25mL上述提取液，注入玻璃层析柱中，控制流速为1.5mL/min，用30mL水洗涤，弃去流出液。然后用100mL乙酸水溶液(50%，V/V)进行洗脱，收集全部洗脱液。在低于60℃水浴中旋转浓缩至近干，最后用氮气流吹干。加入1mL冰乙酸，超声波溶解10min，并将溶液定量转移至10mL旋盖试管中。

5.3.衍生化

    用4mL原乙酸三甲酯分两次各超声波3min以洗涤容器，并将洗涤液移入上述试管中，加塞混匀后，置于100℃水浴中加热2 h，冷却后用氮气流吹干。加入5mL正己烷-二氯甲烷(1＋1)混合液，用超声波溶解5min。

    用10mL丙酮预洗PT-中性氧化铝柱，将甲酯化溶液注入到接有PT-中性氧化铝柱的玻璃注射器中过柱。用10mL正己烷-二氯甲烷(1＋1)混合液淋洗后，弃去流出液。再以10mL甲醇-二氯甲烷(5＋95)混合液洗脱，收集洗脱液。在低于40℃水浴中旋转浓缩至干，准确加入2.00mL丙酮，超声波溶解3min，溶液供气相色谱测定。

5.4.标准物衍生化

    分别取2.00mL适用浓度的草丙磷铵盐和3-甲基膦丙酸标准工作溶液于10mL旋盖试管中，用氮气流吹干后。加入1mL冰乙酸和4mL原乙酸三甲酯，加塞混匀后，置于100℃水浴中加热2h。冷却后用氮气流吹干，准确加入2.00mL丙酮，超声波溶解3min，溶液供气相色谱测定。

5.5.测定

5.5.1.色谱条件

色谱柱：OV-17，石英毛细管柱，25m×0.32mm(id)，膜厚0.25μm；

色谱柱温度：50℃(2min)  ^30℃/min   170℃(1min)  ^4℃/min    250℃(2min)；

进样口温度：270℃；

检测器温度：280℃；

载气：氮气，纯度≥99.99%，20cm/s；

尾吹气：氮气，纯度≥99.99%，50mL/min；

氢气：80mL/min；

空气：100mL/min；

进样方式：无分流进样，1min后开阀；

进样量：2μL。

5.5.2.色谱测定

    根据样液中被测农药含量情况，选定浓度相近的标准工作液。标准工作液和待测样液中衍生化农药的响应值均应在仪器检测的线性范围内。对甲酯化后的标准工作液与样液应分别等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，3-甲基膦丙酸甲酯的保留时间约为8min，草丙磷甲酯的保留时间约为15min。衍生化标准品色谱图见附录A中图A1。

5.6.空白实验

    除不加试样外，均按上述测定步骤进行。

6.结果计算

    用色谱数据处理机或按式(2)分别计算试样中3-甲基膦丙酸和草丙磷铵盐残留含量：

式中：X_i——试样中3-甲基膦丙酸或草丙磷铵盐含量，mg/kg；

h_i——样液中3-甲基膦内酸甲酯或草内磷甲酯的色谱峰高，mm；

h_is——标准工作液中3-甲基膦丙酸甲酯或草丙磷甲酯的色谱峰高，mm；

c_is——标准工作液中3-甲基膦丙酸或草丙磷铵盐的浓度，μg/mL；

V——样液最终定容体积，mL；

m——最终样液所代表的试样量，g。

注：计算结果需将空白值扣除。

    按式(3)计算试样中草丙磷铵盐总含量：

X＝1.30X_A＋X_B……………………………(3)

式中：X——试样中草丙磷铵盐总含量(以草丙磷铵盐计)，mg/kg；

1.30——3-甲基膦丙酸换算成草丙磷铵盐的换算系数；

X_A——试样中3-甲基膦丙酸含量，mg/kg；

X_B——试样中草丙磷铵盐含量，mg/kg。

7.低限、回收率的测定

7.1.测定低限

    本方法草丙磷铵盐的测定低限为0.020mg/kg；3-甲基膦丙酸的测定低限为0.005mg/kg。

7.2.回收率

    回收率的实验数据：

草丙磷(铵盐)总含量添加浓度在0.0065mg/kg时，回收率为92.3%，

草丙磷(铵盐)总含量添加浓度在0.0200mg/kg时，回收率为.5%，

草丙磷(铵盐)总含量添加浓度在0.0265mg/kg时，回收率为90.4%，

草丙磷(铵盐)总含量添加浓度在0.1325mg/kg时，回收率为91.4%，

草丙磷(铵盐)总含量添加浓度在0.5300mg/kg时，回收率为88.1%。

8.来源：

    SN.0587—1996