AMAMFSIs0178咖啡 咖啡因 光谱法

AM-AM-FS-Is-0178

咖啡——咖啡因含量的测定(参考方法)

1．适用范围：

本方法是一个参考方法，适用于咖啡中咖啡因含量的测定。该方法也可用于生咖啡、脱咖啡因生咖啡、炒咖啡、脱咖啡因炒咖啡、干或液体咖啡萃取物以及脱咖啡因干或液体咖啡萃取物。

2．原理概要：

在氨性介质中萃取出咖啡因。用乙醚先后在两个色谱柱上对咖啡因进行提纯，第一个柱子为碱性介质，第二个柱子为酸性介质，而后用氯仿进行洗脱。洗脱液在最大吸收波长(在紫外区)下进行光谱测定。

3．主要仪器和试剂：

3.1.仪器

色谱柱(长250mm，柱I内径21mm，柱II内径17mm，带PTFE活栓)、紫外光谱仪、硅池、烧杯、沸水浴、容量瓶、移液管、分析天平、咖啡磨、齿盘磨、筛子。

3.2.主要试剂

试剂要用分析纯，水要用蒸馏水或至少同等纯度的水。主要试剂有：200g/l硫酸溶液、80g/l氢氧化钠溶液、硅藻土、70g/l氨水、乙醚、无水纯咖啡因、氯仿。

4．过程简述：

4.1.样品制备

取样可参照有关标准。如有必要咖啡先研磨，使之能通过筛子，并测定干物质含量。

生咖啡和炒咖啡：称取约1g试样，精确至0.1mg。移至100ml烧杯，加入5ml氨水，在沸水浴上温热2min，冷却后移入100ml容量瓶，用水稀释至刻度并混匀。混浊液放置后，用移液管移取5.0ml至100ml烧杯中，加入6g硅藻土，小心混匀。

干咖啡萃取物：操作同上，但试样称取0.5g，混浊液移取量为2ml，加入3g硅藻土。

液体咖啡萃取物：操作同生咖啡和炒咖啡，但试样称取量为1～2.5g，混浊液移取量为2ml，加入3g硅藻土。

脱咖啡因生咖啡和脱咖啡因炒咖啡：称取约1g试样，精确至0.1mg。移至100ml烧杯，加入5ml氨水，在沸水浴上温热2min。加入6g硅藻土，小心混匀。

干脱咖啡因咖啡萃取物：操作同上，但试样称取量为0.5g。

液体脱咖啡因萃取物：操作同脱咖啡因生咖啡和脱咖啡因炒咖啡，但取样量为1～2.5g，加入7～8g硅藻土。

装填好色谱柱，柱I为碱柱，分A、B两层，A层为3g硅藻土和2ml氢氧化钠溶液；B层为硅藻土和试样的混合物；柱II为酸柱，中间层为3g硅藻土和3ml硫酸。两柱上下放置，以使柱I的流出物能直接进入柱II。使150ml乙醚依次通过两个色谱柱。调节柱II上的阀，使清夜在上层。用气泡赶尽柱II中的乙醚，然后移走柱I，再使50ml乙醚通过柱II，用最初溶液冲洗柱I, 再进入柱II, 舍弃洗脱液。此条件下乙醚和氯仿的流速应在1.5 ~ 3mL/min之间，并用45～50ml氯仿l淋洗柱II，洗脱液收集到50ml容量瓶，并用氯仿稀释至刻度。

分别对测试液和参比液进行光谱测定。需做空白试验。

4.2测定：

用硅吸收池，在最大吸收波长（约276nm）测吸光度,在该波长上 、下30nm处测定以检验得到的咖啡因的纯度。

装填好色谱柱，柱I为碱柱，分A、B两层，A层为3g硅藻土和2ml氢氧化钠溶液；B层为硅藻土和试样的混合物；柱II为酸柱，中间层为3g硅藻土和3ml硫酸。两柱上下放置，以使柱I的流出物能直接进入柱II。使150ml二乙醚依次通过两个色谱柱。然后移走柱I，再使50ml二乙醚通过柱II，使气流从柱II顶部流到底部，并用45～50ml氯仿稀释柱II，稀释液收集到50ml容量瓶，并用氯仿稀释至刻度。

分别对测试液和参比液进行光谱测定。需做空白试验和标准曲线。

5．精确度：

重复性和再现性

检测下限为干物质中0.02%的咖啡因。

6．来源

国际标准化组织，ISO 4052：1983(E)