MM_FS_CNJ_0141 出口肉及肉制品中卡巴氧留量检验方法

MM_FS_CNJ_0141出口肉 肉制品 卡巴氧 残留量 液相色谱法-紫外检测器法

MM_FS_CNJ_0141

     出口肉及肉制品中卡巴氧留量检验方法

1.适用范围

    本方法适用于出口鸡肉、猪肉、羊肉、兔肉中卡巴氧残留量的检验。

2.原理概要

    样品中残留的卡巴氧经乙腈提取后，以正己烷净化，用C18柱反相分离，液相色谱法-紫外检测器测定。

3.主要试剂和仪器

3.1.主要试剂

    无水硫酸钠：分析纯，经650℃灼烧4h，置于干燥器内备用；

    无水甲醇：分析纯；

    乙腈：色谱纯，经正已烷饱和；

    正己烷：分析纯，经乙腈饱和；

    二甲基甲酰胺：分析纯；

    卡巴氧标准品：含量99%以上；

    标准溶液配制：称取卡巴氧标准品0.010g，溶于少量二甲基甲酰胺，再以无水甲醇定容于100mL棕色容量瓶中，浓度为100μg/mL，此溶液为标准储备溶液；吸取上述储备液5mL，用无水甲醇定容于100mL棕色容量瓶中，浓度为5μg/mL，此溶液为标准工作溶液。

3.2.仪器

    液相色谱仪：Spectra-Physics高效液相色谱系统，包括：

SPectra FOCUS光学扫描检测器；

SP 8800三元梯度泵；

SP 8875自动进样器；

Spectra FOCUS色谱工作站；

RP-18柱，10μm，4.6×250mm；

    均质器；

    往复式振荡器；

    离心机；

    旋转蒸发器并配150mL茄形蒸发瓶；

    玻璃抽滤器；

    过滤膜：0.45μm；

    微孔滤膜过滤器：MF-O型(0.5μm)。

4.试样的抽取与制备

4.1.检验批

    以不超过2500件商品为一检验批。

    同一检验批的商品应具有相同特征，如：包装、标记、产地、规格和等级等。

4.2.抽样数量

4.3.抽样方法

    按规定的抽样件数，随机抽取，逐件开启。从每件内取一袋作为原始样品，其总量不少于2kg，放入清洁容器内，加封后，标明标记，及时送交实验室。

如每件中无小包装或有小包装但每袋重量超过2kg者，则可用锋利刀(用酒精灭菌后)在抽出的包件中，每件割取不少于100g，混合后置于清洁容器内，作为混合原始样。混合原始样的重量不少于2kg。加封后，标明标记，及时送交实验室。

4.4.试样的制备

    从所取全部样品中分取出约1kg，充分绞碎混匀，装入清洁的容器内，作为试样，加封并标明标记。

4.5.试样保存

    将试样于－18℃冷冻保存。

注：在抽样和制样的过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

5.过程简述

5.1.提取

    称取绞碎混匀的试样约20g(精确到0.1g)于研钵中，加入40g无水硫酸钠，研磨至粉末状。全部转移至250mL三角瓶中，加入乙腈80mL，在振荡器上振荡提取30min。将提取液于3000r/min离心5min。

5.2.净化

    取上清液40mL于125mL分液漏斗中，加入正己烷40mL，用力振摇，静置分层后，将乙腈层放入150mL茄形蒸发瓶。再向分液漏斗中加入乙腈20mL，重复上述操作。合并乙腈溶液于同一茄形蒸发瓶，用旋转蒸发器在50℃水浴中将溶剂蒸发浓缩至干。用2mL无水甲醇溶解残渣，样液通过微孔滤膜过滤器收集于进样瓶，滤液供HPLC分析。

5.3.测定

5.3.1.色谱条件

a.流动相：乙腈＋水(30＋70)，配制后，经0.45μm滤膜抽滤，脱气；

b.流速：1.0mL/min；

c.检测波长：380nm；

d.进样方式：以20μL定量管自动进样。

5.3.2.色谱测定

    分别将样液及适宜浓度的标准工作溶液，以20 μL等体积进样，进行色谱分析。在上述色谱条件下，卡巴氧保留时间为4.70min。

5.4.空白试验

    除不加试样外，按上述测定步骤进行。

6.结果的计算

    用Spectra FOCUS系统工作站以外标法按相关程序计算卡巴氧残留量，或按下式进行计算：

式中：X——样品中卡巴氧含量，mg/kg：

h——样液中卡巴氧峰高，mm；

h_s——标准工作溶液中卡巴氧峰高，mm；

c——标准工作溶液中卡巴氧浓度，μg/mL；

m——注入样液所代表的样品重量，g；

V——标准工作溶液(也是样液)进样体积，mL。

注：计算结果需扣除空白值。全部操作应注意避光。

7.低限和回收率的测定

7.1.测定低限

    本方法的测定低限为0.020mg/kg。

7.2.回收率

    回收率实验数据：卡巴氧添加浓度在0.020～0.100mg/kg范围内，回收率为73.0%～96.2%。

8.来源：

    SN  0194.1—93