细胞冻存
1. 实验前准备：细胞室及工作台紫外线照射15min；
培养液、PBS、胰酶、小牛血清、DMSO、恒温水浴箱37℃预热，回温培养液和PBS。
2. 冻存前24-48h更换半量或全量培养基，使细胞处于指数生长期，约为80–90％致密度。
3. 配制冷存液（使用前配制）：
将DMSO加入胎牛血清(FBS)中，最后浓度为10％，混合均匀，置于室温下待用。
1mL冻存液=900uLFBS+100uLDMSO（FBS:DMSO=9:1）
4. 用吸管吸弃培养皿中细胞培养液，PBS清洗2遍吸出冲洗液，加入胰蛋白酶消化(6cm培养皿0.5mL胰酶）
5. 显微镜下观察，细胞回缩成圆形，细胞上有亮点，大部分细胞飘起，加入3mL含血清培养液终止消化， 吸管吸取培养液吹打使细胞成为均匀分散的细胞悬液，转移入15mL离心管，（另一种做法：显微镜下观察，细胞回缩成圆形，细胞上有亮点，少部分细胞飘起，吸弃消化液，加适量含血清培养液，轻轻吹打，使细胞脱落，成为均匀分散的细胞悬液，调整细胞浓度为1-5*106cells/mL,分装）
6. 取50uL细胞悬浮液计数细胞浓度及冻前存活率离心，其余离心，1000rpm，5min
7. 弃上清液，缓慢逐滴加入冻存液，并晃动离心管，制成细胞冻存悬液，使细胞浓度为1～5*106cells/ml，轻轻吹打是细胞分散均匀，分装于已标示完全的冻存管中，1ml/管
8. 冷存管置于4℃10min—-20℃30min—-80℃16～18h(或隔夜)---液氮槽长期储存。
（-20℃不要超过1h）
因篇幅问题不能全部显示，请点此查看更多更全内容