实验一 细菌培养基的制备

姓名：何家俊（5131509025） 实验日期： 2016年4月18日

实验一 细菌培养基的制备

一. 实验目的

1. 学习并掌握不同细菌培养基的配制过程。 2. 了解液体和固体培养基的区别及灭菌方法。

二.实验原理

培养基按照不同的分类标准可以分成不同的类别，如按照物理状态可以分为液体、半固体和固体培养基；根据营养物质的来源可以分为天然培养基、合成培养基等。固体培养基中含有一定的琼脂或明胶。

配制好的培养基需要灭菌，实验室一般使用湿热高压蒸汽灭菌法。

三.仪器、试剂与材料

1.试剂

（1）LB培养基所需试剂：胰蛋白胨、酵母提取物、盐、琼脂粉、蒸馏水。 1）液体LB培养基（100mL）：胰蛋白胨1.0g，酵母提取物0.5g，NaCl 1.0g，蒸馏水约900mL，PH=7.3±0.1； 2）固体LB培养基（100mL）：胰蛋白胨1.0g，酵母提取物0.5g，NaCl 1.0g，琼脂粉1.5g，蒸馏水约900mL，PH=7.3±0.1。 2.仪器设备

天平、烧杯、玻璃棒、药勺、量筒、称量纸、封口膜、三角烧瓶、pH试纸、一次性培养皿、微波炉、超净工作台和高压灭菌锅等。

四.实验步骤

LB培养基的制备 1. LB培养基的配制

（1） 用天平按照配方称取适量原料倒入烧杯 （2） 加入蒸馏水，用玻璃棒将试剂溶解

（3） 用玻璃棒将LB液体培养基引流入三角烧瓶中，用封口膜封口 （4） 做好标记，如时间，配制人等 2. 将标记好的培养基放入高压灭菌锅： （1） 仔细阅读说明

（2） 开启电源，检查面板是否正常 （3） 添加适量蒸馏水

（4） 将培养基放入专用篮筐，然后缓慢放入灭菌锅 （5） 闭合锅盖，检查阀门是否关闭 （6） 按STAR键

（7） 面板显示灭菌完成以后，开启灭菌锅，取出灭菌物品 3. 固体培养基（含琼脂）平板的制备

（1） 灭菌后的固体培养基冷却至55-60℃

（2） 左手中指、无名指和小拇指托住无菌平皿，盖子用食指和拇指掰开，右

手倾注无菌平皿

（3） 倾注完成后晃动培养基铺满平皿底部

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2013级《食品微生物实验》报告

姓名：何家俊（5131509025） 实验日期： 2016年4月18日

（4） 将平皿放入超净工作台

（5） 固体培养基完全凝固后，将平皿收起

五.结果与讨论

实验结果：最后得到的培养基时比较成功的，经过接种细菌之后发现细菌能正常生长，说明培养基能满足细菌的生长要求。细菌的生长情况将会在细菌的革兰氏染色这一节用图片作为说明。

讨论：

1. 配制培养基应注意哪几个方面？为什么？ 答：

（1）需要根据不同的微生物配制营养来配制不同的培养基，这是因为每种微生物对营养的要求各不相同，必须要对症下药才能让细菌更好的生长。

（2）控制好培养基的pH，这是因为微生物在生长和代谢产物积累的过程中需要特定的pH才能更好的生存，对pH的嗜好有些偏酸，有的偏碱。

（3）控制要氧化还原电位。这是因为细菌有的需氧，有的厌氧，所以我们要根据不同的细菌喜好来制备不同的培养基。 2.为什么一般的培养基都需要高压灭菌处理？

高压蒸汽灭菌法使用比较方便，灭菌效果彻底，而且加热可使培养基中的组分彻底溶解，同时里面的蒸汽还能保证培养基中的水分不会被蒸干，这是十分重要的，烘干的培养基难以满足细菌的生长要求。若是不灭菌，会造成杂菌过多，不仅消耗营养物质，还产生很多杂质，这会使得我们需要生产的产品不纯。

六. 注意事项

1.称量培养基原料时，已取出试剂瓶的多余试剂原料应弃掉 2.确保灭菌锅有足够多的蒸馏水

3.从灭菌锅拿出培养基时，注意不要别蒸汽灼伤 4.倾注培养基时注意无菌操作

5.任何培养基不得超过容器体积的1/3，且不得封口过严

七．实验收获

这是本学期的第一次食品微生物实验，感受颇深。我们虽然已经大三了，貌似学了很多的专业知识，但真正要你动起手来操作还是会出现许多问题的。比如在倾注培养皿的过程中，专业的手势是用左手中指、无名指和小拇指来托住无菌平皿，但若老师没有强调，恐怕我们还是随心所欲用着自己的办法。微生物实验最基础的一部恐怕就是培养基的配制了，学会了这一步，为以后的实验打下了基础，同时还进入到超净工作台进行一些相应的操作，熟悉了实验的环境，懂得了一些基本的操作步骤，收获还是相当大的。最后也特别谢谢老师的耐心指导和组员们的积极协作！

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