第３７卷第２期 ２０１８年３月 球 科 学 Ｖｏｌ＿３７ ＮＯ．２ Ｍａｒ．２Ｏｌ８ ＦＩＳＨＥＲＩＥＳ ＳＣＩＥＮＣＥ 鲟源迟钝爱德华氏菌的分离鉴定与药敏特性研究 孔 杰 ，李小义 ，周 洲 ，关 梅 ，石 婧 （１．贵州省水产研究所，贵州贵阳５５００２５；２．贵州省疾病预防控制中心，贵州贵阳５５ＯＯ０４） 摘要：从患病鲟鱼的肾脏组织中分离到菌株Ｋ９，通过菌株的形态特征、生理生化鉴定及１６Ｓ ｒＤＮＡ 序列分析等，鉴定菌株Ｋ９为迟钝爱德华氏菌。人工感染试验证明该菌株为引起鲟鱼疾病及死亡的病 原菌；药敏特性研究表明，Ｋ９对链霉素、阿米卡星、左氧氟沙星、阿齐霉素、新霉素、氯霉素（禁药）等６ 种抗生素敏感，而对青霉素Ｇ、妥布霉素、麦迪霉素等９种抗生素具有耐药性。本研究结果为有效防控 鲟鱼迟钝爱德华氏菌病害提供参考。 关键词：鲟鱼；迟钝爱德华氏菌；分离鉴定；药敏特性 中图分类号：￥９１７．１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００３—１ｌｌｌ（２０１８）０２—０１８７—０６ 鲟鱼是一类古老的软骨硬鳞鱼类，素有“活化 石”之称，具有巨大的经济和科研价值。鲟鱼几乎 全身是宝，肉质鲜美，富含多种人体必需氨基酸；鱼 鳔含有高级胶质可配制上等漆料，还可人药，而鲟 鱼卵做成的鱼子酱更有“黑色黄金”的美名。强大 的市强需求刺激着我国鲟鱼养殖市场的发展与扩 大，然而由于没有规范的引种与养殖制度，鲟鱼养 殖环境不断恶化，使鲟鱼细菌性疾病发生率不断增 加。已有报道的主要致病菌包括：气单胞菌（Ａｅｒｏ— ｍｏｌｌ＂ａｓ）属革兰氏阴性菌，如嗜水气单胞菌（Ａ．ｈｙ－ ｄｒｏｐｈｉｌａ）、维氏气单胞菌（Ａ．ｖｅｒｏｎｉｉ）、豚鼠气单胞 菌（Ａ．ｃａｒｖｉａ）和类志贺邻单胞菌（Ｐｌｅｓｉｍｏｎａｓ ｓｈｉｇｅｌｌｏｉｄｅｓ）［１ ；革兰氏阳性菌链球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏ— ｃｏｃｃｕｓ），如停乳链球菌（Ｓ．ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ）、海豚链 球菌（Ｓ．ｉｎｉａｅ）；此外还有鲁氏耶尔森氏菌（Ｙｅｒｓｉｎ— 种人鱼共患的条件致病菌，也是爱德华氏菌属里唯 一感染人的病原菌，能引起患者腹泻、肠胃炎、败血 症及黄疸等疾病。迟钝爱德华氏菌是水产养殖业 中危害极大的革兰氏阴性菌之一，它能引起鳗鲡、 褐牙鲆（Ｐａｒａｌｉｃｈｔｈｙｓ ｏｌｉｖａｃｅｕｓ）、大菱鲆（Ｓｃｏｐｈ— ｔｈａｌｍｕｓ ｍａｘｉｍｕｓ）、大鳞大麻哈鱼（Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓ ｔｓｈａｗｙｔｓｃｈａ）＿ｇ。 等数十种水产动物疾病。 ２０１３年７月，贵州省惠水县鲟鱼养殖场养殖的 杂交鲟［施氏鲟（Ａｃｉｐｅｎｓｅｒ ｓｃｈｒｅｎｃｋｉｉ旱）×达氏鳇 （Ｈｕｓｏ ｄａｕｒｉｃｕｓ ）］发生大量死亡，病鱼的主要症 状为腹部出现血点，肛门红肿，鳃丝变白，部分尾部 出现白色溃烂。剖检发现内脏器官元血色，肝脏与 肾脏肿大，严重的肠坏死穿孔。笔者从具有明显发 病症状的杂交鲟中分离得到一株高致病性病原菌， 经过生理生化鉴定、回归感染、１６Ｓ ｒＤＮＡ序列分析 和系统发育分析对该菌进行了分类鉴定，确定该致 ｉａ ｒｕｃｋｅｒｉ）、弗氏柠檬酸杆菌（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｆｒｅｕ．一 ｄｉｉ）［ 一 等。 迟钝爱德华氏菌（Ｅｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａ ｔａｒｄａ），属肠 病菌为迟钝爱德华氏菌，并研究了其药敏特性，以 期为鲟鱼防治迟钝爱德华氏菌提供理论参考依据。 杆菌科爱德华氏菌属，本属细菌可分为３个种，即 迟钝爱德华氏菌、鲇鱼爱德华氏菌（Ｅ．ｉｃｔａｌｕｒｉ）和 保科爱德华氏菌（Ｅ．ｈｏｓｈｉｎａｅ）。迟钝爱德华氏菌 和鲇鱼爱德华氏菌已被大量研究证实为重要的鱼 类病原微生物，而保科爱德华氏菌不能引起鱼类疾 病。迟钝爱德华氏菌最初于１９６２年被日本学者 Ｈｏｓｈｉｎａ在鳗鲡（Ａｎｇｕｉｌｌａ ｊａｐａｎｃｉａ）中发现Ⅲ８］，随 后又分别在人类的排泄物和爬行类中分离到，是一 １材料与方法 １．１材料 ２０１４年７月采集濒死病鱼于贵州省水产研究 所惠水鲟鱼繁育基地；回归感染用的健康杂交鲟也 来自该基地，健康杂交鲟鱼放水族箱中暂养７ ｄ，无 异常后进行试验。 收稿日期：２０１６—１２－１３；修回日期：２０１７－０４—２４． 基金项目：贵州省科技支撑计划项目（黔科合ＮＹＥ２０１５１３００３－－２）；贵州省农业科学院院专项（黔农科院院专项Ｅ２ｏ１３］ｏｏ５） 作者简介： Ｌ杰（１９８６一），女，助理研究员，硕士；研究方向：水产生物技术．Ｅ—ｍａｉｌ：ｋｅｌｌｙｋｊ＠１２６．ｃｏｍ． 水 产 科 学 第３７卷 １．２主要试剂 细菌基础固体培养基、水解酪蛋白琼脂按常规 方法自配，细菌基因组ＤＮＡ提取试剂盒、ｔａｑ ＤＮＡ 聚合酶、ｄＮＴＰ等购自ＴＡＫＡＲＡ公司，药敏试纸 片、细菌生化微量鉴定管均购自杭州滨和微生物试 剂有限公司。 １．３ 方法 １．３．１病原菌的分离纯化 ２０１４年７月，贵州省惠水鲟鱼养殖基地部分养 殖池内发生鲟鱼规模性疾病，病死鱼头腹朝天，腹 部肿胀并出现明显的血点，选取具有典型症状濒死 鲟鱼，用７Ｏ％酒精对鱼体表面进行消毒灭菌，无菌 环境下取病鱼肾组织用于细菌分离，用经过灼烧的 接种环取少量器官组织划线于细菌基础培养基平 板上，置２８℃下培养２４ ｈ后挑取形态大小、颜色等 菌落特征一致的优势菌落进一步纯化，纯化后的菌 株用含３Ｏ 甘油的ＬＢ培养液于冰箱一８Ｏ。Ｃ保存 备用。 １．３．２理化特性测定 选取纯化分离菌株，测定温度５、１５、２Ｏ、２８、３５、 ４２℃下的生长情况；测定盐度（即ＮａＣ１质量分数） 为０～７ 下的生长情况；测定ｐＨ值为３．０～１０．０ 下的生长情况。应用细菌生化微量鉴定管进行细 菌的常规生理生化测定。 １．３．３ １６Ｓ ｒＤＮＡ基因序列的测定与分析 纯化培养的菌株，按照ＤＮＡ提取试剂盒说明 书提取细菌基因组ＤＮＡ。ＰＣＲ扩增引物使用细菌 １６Ｓ ｒＤＮＡ通用引物（２７ｆ：５，＿ＡＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣ— ＣＴＧＧＣＴＣＡＧ一３ ，１４９２ｒ：５ 一ＧＧＴＴＡＣＣＴＴＧＴＴＡ— ＣＧＡＣＴＴ一３ ）；ＰＣＲ扩增产物由生工生物工程上海 （股份）有限公司进行测序。用ＢＬＡｓＴ在线同源性 查询软件查询菌株的１６Ｓ ｒＤＮＡ序列属性。从 ＧｅｎＢａｎｋ数据库获得同源性为９８ 的８株菌的 １６Ｓ ｒＤＮＡ序列，并选择鲇鱼爱德华氏菌模式菌株、 保科爱德华氏菌模式菌株共４株、与爱德华氏菌进 化关系较近的阪崎肠杆菌（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｕｒ ｓａｋａｚａｋｉｉ） 的１６Ｓ ｒＤＮＡ序列进行同源性序列比对分析，然后 构建菌株系统发育进化树。 １．３．４回归感染试验 选取体长１ｏ～１２ ｃｍ的健康杂交鲟，设试验 组、平行试验组、对照组和平行对照组，每组１Ｏ尾。 将纯培养的菌落制成菌悬液，用麦氏比浊法测定并 调节菌密度为１×１０。ｃｆｕ／ｍＬ，分别对试验组与平行 试验组鲟鱼进行胸鳍基部注射，每尾注射０．３ ｍＬ， 对照组与平行对照组注射相同剂量的无菌生理盐 水。试验期间，水温控制在２３～２５。Ｃ，充氧，隔日 换水，连续观察１１ ｄ至无新增死亡，记录鱼的发病 和死亡情况，并对濒死鱼及时剖检并再次分离纯化 鉴定致病菌。 １．３．５药物敏感性测定 对分离并经鉴定的菌株采用琼脂扩散纸片法 进行常用抗菌类药物的敏感性测定，以明确这些菌 株的耐药情况并为临床防治的用药提供参考。药 敏试验结果判别按照美国临床实验室标准化协会 相关标准口 执行。 ２ 结 果 ２．１病原菌的分离纯化 从病鱼的肾中分离到菌落形态相同的优势菌， ２８℃培养２４ ｈ的菌落在ＬＢ固体培养基上呈圆形 光滑、半透明、边缘整齐、灰白色菌落。革兰氏阴性 杆菌，将病原菌编号为Ｋ９。 ２．２生理生化鉴定 经测定，盐度为Ｏ～３０时菌株Ｋ９生长正常，４Ｏ 以上盐度不生长；ｐＨ为５～８时生长正常，最适ｐＨ 为７。其他生理生化特性见表１，菌株ＥＴ８１１２６口 、 菌株ＨＣ０１０９０７—１ ｒ１。。、菌株ＨＮＯ０５【】５］均为已鉴定的 迟钝爱德华氏菌，除了对蔗糖的利用与ＥＴ８１１２６和 ＨＮ００５不同外，菌株Ｋ９的其他特性与迟钝爱德华 氏菌株表现一致。 表１菌株Ｋ９的生理生化特性 注：＋表示阳性，一表示阴性，＋／一表示介于＋与一之间 第２期 孔 杰等：鲟源迟钝爱德华氏茵的分离鉴定与药敏特性研究 １８９ ２．２病原菌的１６Ｓ ｒＤＮＡ鉴定 菌株Ｋ９经ＰＣＲ扩增所获得的１６Ｓ ｒＤＮＡ基 因序列长度为１４６８ ｂｐ，ＧｅｎｅＢａｎｋ登录号为： （ＢＡＵＣ０１０００ｏ６２）、迟钝爱德华氏菌ＮＢＲＣ一１０５６８８ （Ｔ）（ＢＡＮＷ０１００００３０）的相似性分别为９８．３４％、 ９７．９９ 、９７．９１ 、９７．７１ 。选择以上序列以及肠 杆菌科中的阪崎肠杆菌构建进化树，结果见图１，菌 ＫＹ４８９７８Ｏ；在ＧｅｎｅＢａｎｋ数据库上进行同源性比对 分析，结果显示，菌株Ｋ９与迟钝爱德华氏菌的同源 性为９８ 。在ＥＺＴａｘｏｎ上进行同源序列比对，结 果显示，Ｋ９菌株与爱德华氏菌ＥＴ８３３（Ｔ） （ＪＲＧＱ０１０００１３４）、鲇鱼爱德华氏菌ＡＴＣＣ一３３２０２（Ｔ） （ＡＦＪ１０１０００００２）、保科爱德华氏菌ＮＢＲｃ１０５６９９Ｔ 株Ｋ９与迟钝爱德华氏菌聚为１支。细菌分类学 上，通常将１６Ｓ ｒＲＮＡ基因同源性大于９７。５ 的菌 株定为同种菌株ｒ１。州，因此综合生化指标、１６Ｓ ｒＤ－ ＮＡ基因序列分析以及进化树的分析结果，可将菌 株Ｋ９鉴定为迟钝爱德华氏菌。 图１根据菌株Ｋ９ １６Ｓ ｒＤＮＡ基因序列同源性构建的系统发育树 ２．３ 回归感染试验结果 研究结果表明，迟钝爱德华氏菌Ｋ９对链霉素、阿米 分离迟钝爱德华氏菌Ｋ９通过接种感染，显示 对杂交鲟有强致病力。在１１ ｄ的感染中，试验组感 染２４ ｈ后开始发病死亡，１ ｄ内死亡４尾，之后２ ｄ 又死亡３尾，至第１ｌ ｄ共死亡８尾。试验过程中， 卡星、左氧氟沙星、阿齐霉素、新霉素、氯霉素（禁 药）等６种抗生素敏感，对头孢噻肟、阿莫西林、头 孢唑啉、氨苄西林、红霉素（禁药）等５种抗生素等 中度敏感，对青霉素Ｇ、妥布霉素、麦迪霉素等９种 抗生素耐药（表３）。 表２迟钝爱德华氏菌Ｋ９对鲟鱼的致性病试验 死亡鱼腹部两侧出现红点，肛门红肿，鳃丝变白，在 试验后期死亡的鱼背部出现白色溃烂，肠部穿孑Ｌ。 病症与自然发病鲟鱼基本一致。平行试验组１１ ｄ 的观察中，共死亡７尾，而对照组与平行对照组在 感染试验期内，没有发病死亡病例。从感染死鱼中 再次分离菌株，经１６Ｓ ｒＤＮＡ鉴定，与从自然发病鲟 鱼中所分离的菌株为同一株。 ２．４药物敏感试验结果 分离迟钝爱德华氏菌Ｋ９对２Ｏ种药物敏感性 １９０ 水 产 科 学 第３７卷 注：Ｓ，敏感；Ｉ，中度敏感；Ｒ，抗性 ３ 讨 论 迟钝爱德华氏菌于１９６２年首次在鳗鲡中被发 现，随后在大口黑鲈（Ｍｉｃｒｏｐｔｅｒｕｓ ｓａｌｍｏｉｄｅｓ）Ｌ１ 、 美洲红点鲑（Ｓａｌｖｅｌｉｎｕｓ ｆｏｎｔｉｎａｌｉｓ）［１ 、罗非鱼 ｃｆｕ／ｍＬ时，引起鲟鱼７５ 的死亡率，表明迟钝爱德 华氏菌对鲟鱼的致病性较其他水生动物弱。 本研究的药敏结果显示，迟钝爱德华氏菌Ｋ９ 只对链霉素、阿米卡星、左氧氟沙星、阿齐霉素、新 霉素、氯霉素等６种药物敏感，对青霉素Ｇ、妥布霉 素、麦迪霉素、呋喃唑酮等９种抗生素表现出很强 的耐药性。与分离自斑马鱼中菌株Ｚ１［ 。 相比，在 （Ｏｒｅｏｃｈｒｏｍｉｓ）＿２ 、褐牙鲆ｒ１ 、大菱鲆＿２ 、黄颡鱼 （Ｐｅｌｔｅｏｂａｇｒｕｓ ｆｕｌｖｉｄｒａｃｏ）ｌ１ 、尖吻鲟（Ａｃｉｐｅｎｓｅｒ ｏｘｙｒｉｎｃｈｕｓ）＿２ 、斑马鱼（Ｄａｎｉｏ ｒｅｒｉｏ） 等数十种 Ｚ１表现为敏感的药物中，如青霉素Ｇ、妥布霉素、头 孢唑啉、庆大霉素、红霉素、卡那霉素，Ｋ９表现均为 水产品种中均有报道。本研究从患病的杂交鲟肾 脏组织中分离到１株革兰氏阴性杆菌Ｋ９，人工感染 中度敏感甚至耐受。与分离自牙鲆Ｌ】。。中的迟钝爱 德华氏菌相比，Ｋ９对该菌株表现为敏感的头孢曲 松、妥布霉素、呋喃唑酮和耐药的青霉素、克林霉素 均表现耐受性，表明Ｋ９耐药性较为强烈。葛慕湘 等＿２ 对３５株迟钝爱德华氏菌的耐药检测显示，大 试验表明Ｋ９能使健康鲟鱼致病死亡，表现出与自 然感染下相似的临床症状。迟钝爱德华氏菌对斑 马鱼与透明四带无须钯（Ｐｕｎｔｉｕｓ ｔｅｔｒａｚｏｎａ）¨２胡的 人工感染试验表明，当菌液密度达到１０。ｃｆｕ／ｍＬ 时，能分别引起９Ｏ 和８Ｏ 的死亡率；在迟钝爱德 华氏菌株ＥＴ８１１２６在对欧洲鳗（Ａ．ａｎｇｕｉｌｌａ）的致 病性试验中［１ ，当菌液密度为１０。ｃｆｕ／ｍＬ时，欧洲 鳗的死亡率达到了１００ ；尖吻鲟源迟钝爱德华氏 菌的死亡率为５Ｏ ｌ２。 ；本研究中，迟钝爱德华氏菌 Ｋ９的人工感染试验结果显示，在菌液密度为１０。 部分菌株耐抗菌类药物达７～９种。本次试验分离 到的迟钝爱德华氏菌耐受９种抗生素，与其研究结 果相同，进一步表明迟钝爱德华氏菌的耐药性严重 性。本研究中迟钝爱德华氏菌表现为耐药性的抗 生素，并非意味着该菌株对这些抗生素完全耐受， 从刁菁等＿２ 的研究中可以看出，虽然迟钝爱德华氏 第２期 孔 杰等：鲟源迟钝爱德华氏菌的分离鉴定与药敏特性研究 １９１ 菌在低抗生素含量下表现为耐受，但是随着抗生素 含量的增加细菌的生长受到抑制。因此，迟钝爱德 菌的分离、鉴定与致病性［Ｊ］．中国水产科学，２００９， １６（６）：８９１－９０３． 华氏菌Ｋ９表现为耐受的抗生素，也可能会在增加 抗生素含量后表现为敏感。需注意的是，在本次药 ［５］邓梦玲，耿毅，刘丹，等．西伯利亚鲟海豚链球菌的 分离鉴定及毒力基因检测［Ｊ］．水产学报，２０１５，３９ （１）：１２７—１３５． 敏试验所用抗生素中，氯霉素、红霉素和呋喃唑酮 为国家禁用抗生素，仅供试验研究用，严禁用于生 产中。因此，防治迟钝爱德华氏菌引起的疾病，可 以考虑采用其他迟钝爱德华氏菌Ｋ９敏感的抗生 １６］杨移斌，夏永涛，郑卫东，等．鲟源鲁氏耶尔森氏菌 的分离鉴定［Ｊ］，水生生物学报，２０１３，３７（２）： ３９３—３９８． Ｉ－７］杨移斌，夏永涛，赵蕾，等．鲟源弗氏柠檬酸杆菌分 素，如阿米卡星、左氧氟沙星、阿齐霉素、新霉素。 迟钝爱德华氏菌感染鱼体通常是由水温升高所 致＿２ ，因而建议养殖中注意控制水温，当疾病发生 离鉴定及药敏特性研究Ｉ－Ｊ］．水生生物学报，２０１３，３７ （４）：７６６—７７１． ｒ８］Ｈｏｓｈｉｎａ Ｔ．Ｏｎ ａ ｎｅｗ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ，Ｐａｒａｃｏｌｏｂａｃｔｒｕｍ 后，除给药外，还应同时采取相应的降温措施。 目前水产养殖中对细菌性疾病的防治仍以抗 生素为主，而长期使用抗生素极易产生耐药菌株， 本研究中分离到具有较强耐药性菌株Ｋ９，可能就 是由于生产上长期使用抗生素导致。中草药不易 产生耐药性、毒副作用小，成为研究抗菌药物的热 点。杨移斌等＿２ 就曾对鲟源的３种致病菌进行过 中草药研究，结果表明，乌梅、石榴皮、地榆、杞子对 防治鲟鱼细菌性疾病效果良好。而不同来源的迟 钝爱德华氏菌也开展过许多中草药抑菌研究，如五 倍子与石榴皮对斑马鱼源的迟钝爱德华氏菌抑菌 作用明显Ｌ２ ，最小抑菌质量浓度和最小杀菌质量浓 度均≤６．２５ ｍｇ／ｍＬ；五倍子、诃子、黄芩、秦皮和红 藤对牙鲆源的迟钝爱德华氏菌抑菌作用明显＿２ ，最 小抑菌质量浓度＜１２．５ ｍｇ／ｍＬ，最小杀菌质量浓 度＜５０ ｍｇ／ｍＬ；五倍子＋黄芩、五倍子＋大黄、黄 连＋黄芩和大黄＋黄芩对石斑鱼源的迟钝爱德华 氏模式菌具有明显的强力杀菌作用ｌ＿２ ，最小抑菌质 量浓度和最小杀菌质量浓度均≤３．１２５ ｍｇ／ｍＬ；陈 言峰等＿２ 研究表明，２０种中草药中五倍子的杀菌 能力极强，最小抑菌质量浓度为１．５６２６ ｍｇ／ｍＬ；从 以上数据可以看出，五倍子对防治迟钝爱德华氏菌 具有明显的作用，在防治鲟源迟钝爱德华氏菌中不 仅可以考虑本文中给出的抗生素药物，还可以考虑 中草药的防治方法。 参考文献： ［１］杨治国．鲟鱼嗜水气单胞菌的分离鉴定［Ｊ］．淡水渔 业，２００１，３１（５）：４０—４１． ［２］杨移斌，夏永涛，邱军强，等．鲟源维氏气单胞菌分 离鉴定及药敏特性研究［Ｊ］．四川动物，２０１４，３３（３）： ４１４－４１８． １１３］曹海鹏，杨先乐，高鹏，等．鲟细菌性败血综合征致 病菌的初步研究［Ｊ］．淡水渔业，２００７，３７（２）：５３—５６． ［４］潘厚军，刘晓勇，常藕琴，等．西伯利亚鲟停乳链球 ａｎｇｕｉｌｌｉｍｏｒｔｉｆ ｎ．ｓｐ．［Ｊ］．Ｂｕｌｌ Ｊｐｎ Ｓｏｃ Ｓｅｉ Ｆｉｓｈ， １９６２，２８（２）：１６２－１６４． １９］Ａｍａｎｄｉ Ａ，Ｈｉｕ Ｓ Ｆ，Ｒｏｈｏｖｅｃ Ｊ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａ ｔａｒｄａ ｆｒｏｍ ｆａｌｌ ｃｈｉｎｏｏｋ ｓａｌｍｏｎ（Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓ ｔｓｈａｗｙｔｓｃｈａ）ｒＪ］．Ａｐ— ｐｌｉｅｄ ８Ｌ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１９８２，４３（６）： １３８０—１３８４． ［１Ｏ］张晓君，战文斌，陈翠珍，等．牙鲆迟钝爱德华氏菌 感染症及其病原的研究［Ｊ］．水生生物学报，２００５，２９ （１）：３１—２６． ［１１］王印庚，秦蕾，张正，等．养殖大菱鲆的爱德华氏菌 病ｌ－Ｊ］．水产学报，２００７，３１（４）：４８７—４９５． １１２］陈昌福，吴志新，高汉娇．日本鳗鲡爱德华氏菌病原 菌的分离１１Ｊ］．华中农业大学学报：自然科学版，１９９８， １７（４）：３８２－３８８． ｒ１３］Ｃｌａｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．ＣＬＳＩ ｄｏｃｕｍｅｎｔ Ｍ１００一Ｓ２ １，Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ ｆｏｒ Ａｎｔｉ— ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ Ｔｅｓｔｉｎｇｓ［Ｓ］．９５０ Ｗｅｓｔ Ｖａｌｌｅｙ Ｒｏａｄ，Ｓｕｉｔｅ １４００，Ｗａｙｎｅ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ １９０８７，ＵＳＡ： Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，２０１１． ［１４］陈强，龚晖，杨金先．欧洲鳗迟钝爱德华氏菌的分离 鉴定Ｉ－Ｊ］．中国人兽共患病学报，２０１１，２７（１）：７－１０． ［１５］邓先余，罗文，谭树华，等．黄颡鱼（Ｐｅｌｔｅｏｂａｇｒｕｓ ｆｕｌｖｉｄｒａｃｏ）“红头病”病原菌迟钝爱德华氏菌（Ｅｄ— ｗａｒｄｓｉｅｌｌａｔａｒｄａ）的分离及鉴定［Ｊ］．海洋与湖沼， ２００８，３９（５）：５１１－５１６． １１６］鲁辛辛，黄艳飞，田晓波．细菌ｒＤＮＡ分类鉴定的方 法学研究［Ｊ］．中华检验医学杂志，２００６，２９（５）： ４３５—４３７． －１１７］蹇文婴，东秀珠．定向进化同源基因在细菌系统进化 研究中的应用［Ｊ］．微生物学通报，２０００，２７（５）： ３７７—３８１． １１８］Ｆｒａｎｃｉｓ—Ｆｌｏｙｄ Ｒ，Ｒｅｅｄ Ｐ，Ｂｏｌｏｎ Ｂ．Ａｎ ｅｐｉｚｏｏｔｉｃ ｏｆ Ｅｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａ ｔａｒｄａ ｉｎ ｌａｒｇｅｍｏｕｔｈ ｂａｓｓ（Ｍｉｃｒｏｐｔｅｒｕｓ ｓａｌｍｏｉｄｅｓ）ｌ－Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｗ．１ｄ１ｉｆｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，１９９３，２９ （２）：３３４—３３６． ［１９］Ｕｈｌａｎｄ Ｆ ｃ，Ｈｅｌｌｅ Ｐ，Ｈｉｇｇｉｎｓ Ｒ．Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｅｄ— ｗａｒｄｓｉｅｌｌａ ｔａｒｄａ ａｍｏｎｇ ｂｒｏｏｋ ｔｒｏｕｔ ｉｎ Ｑｕｅｂｅｃ［Ｊ］． １９２ 水 产 科 学 第３７卷 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｑｕａｔｉｃ Ａｎｉｍａｌ Ｈｅａｌｔｈ，２０００，１２（１）： ７４—７７． 表型及４种耐药基因检测［Ｊ］．水产科学，２０１５，３４ （５）：３００－３０４． Ｅｚｏ］ Ｃｌａｖｉｊｏ Ａ Ｍ，Ｃｏｎｒｏｙ Ｇ，Ｃｏｎｒｏｙ Ｄ Ａ．Ｆｉｒｓｔ ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ Ｅｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａ ｔａｒｄａ ｆｒｏｍ ｔｉｌａｐｉａｓ ｉｎ Ｖｅｎｅｚｕｅｌａ［Ｊ］． Ｂｕｌｌ Ｅｕｒ ＡＳＳＯＣ Ｆｉｓｈ Ｐａｔｈｏｌ，２００２，２２（４）：２８０—２８２． ［２５］刁菁，杨秀生，叶海斌，等．一种水产迟钝爱德华氏 菌快速药敏检测方法的研究［Ｊ］．水产科学，２０１４，３３ （１）：２９—３４． ［２１］ 秦蕾．迟钝爱德华氏菌感染大菱鲆的病理学研究［Ｊ］． ［２６］杨移斌，曹海鹏，夏永涛，等．４１种中草药对３种鲟 中国水产科学，２００９，１６（３）：４１１－４１９． Ｆｒａｎｃｉｓ—Ｆｌｏｙｄ Ｒ，Ｄｖｍ Ｍ Ｓ．Ｄｉｓｅａｓｅ Ｈｉｓｔｏｒｙ ｏｆ Ｃｕｌ— ［２２］ 源病原菌的体外抑菌效果［Ｊ］．淡水渔业，２０１３，４３ （４）：８０—８４． ｔｕｒｅｄ Ｓｔｕｒｇｅｏｎ ｉｎ Ｆｌｏｒｉｄａ，１９９０—１９９９［Ｏ］／／Ｍｅｔｃａｌｆ Ｋ， Ｚａｊｉｃｅｋ Ｐ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｆｌｏｒｉｄａ Ｓｔｕｒｇｅｏｎ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｒｉｓｋ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｗｏｒｋｓｈｏｐ，Ｆｌｏｒｉｄａ：Ｆｌｏｒｉｄａ Ｄｅｐａｒｔ— ｍｅｎｔ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ．Ｃｏｍｓｕｍｅｒ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，２０００：３３— ３７． ［２７］朱壮春，史相国，张淑杰，等．中草药对牙鲆病原迟 钝爱德华氏菌的体外抑制作用研究［Ｊ］．水产科学， ２００７，２６（５）：２７８—２８１． ［２８］李瑞，白东清，郭永军，等．９种中草药及１７组方对 迟钝爱德华氏菌的体外抑菌试验［Ｊ］．水利渔业， ２００８，２８（４）：１１４—１１６． ［２３］ 刘春，李凯彬，王庆，等．斑马鱼迟缓爱德华氏菌的 鉴定、致病性及药物敏感性ＥＪ］．华中农业大学学报： 自然科学版，２０１３，３２（３）：１０５—１１１． Ｅ２９］陈言峰，邹记兴．２Ｏ种中草药对迟缓爱德华氏菌的体 外抑菌试验［Ｊ］．水生态学杂志，２０１１，３２（５）： １】Ｏ一１】２． ［２４］ 葛慕湘，靳晓敏，张艳英，等．迟钝爱德华氏菌耐药 Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｅｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａ ｔａｒｄａ ｆｒｏｍ Ｓｔｕｒｇｅｏｎ ＫＯＮＧ Ｊｉｅ ，ＬＩ Ｘｉａｏｙｉ ，ＺＨＯＵ Ｚｈｏｕ ，ＧＵＡＮ Ｍｅｉ ，ＳＨＩ Ｊｉｎｇ。 （１．Ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｇｕｉｙａｎｇ ５５００２５，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，Ｇｕｉｙａｎｇ ５５０００４，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｔｒａｉｎ Ｋ９ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｋｉｄｎｅｙ ｏｆ ｔｈｅ ｄｉｓｅａｓｅｄ ｓｔｕｒｇｅｏｎ ｗａｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｓ Ｅｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａ ｔａｒｄａ ｂｙ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ，ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ａｎｄ １ ６Ｓ ｒＤＮＡ ｇｅｎｅ ｓｅ－ ｑｕｅｎｃｅ ａｎａｙｌｓｉｓ．Ｔｈｅ ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｔｅｓｔ ｐｒｏｖｅｄ ｔｈａｔ Ｋ９ ｗａｓ ｉｎｄｅｅｄ ｓｕｒｅ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ｗｈｉｃｈ ｃａｕｓｅｄ ｔｈｅ ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ ｄｅａｔｈ ｏｆ ｓｔｕｒｇｅｏｎ．Ｔｈｅ ｄｒｕｇ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｔｅｓｔ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｓｔｒａｉｎ Ｋ９ ｗａｓ ｈｉｇｈｌｙ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｔｏ ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ，ａｍｉｋａｃｉｎ，ｌｅｖｏｆｌｏｘａｃｉｎ，ａｚｉｔｒｏｍｙｃｉｎ，ｎｅｏｍｙｃｉｎ，ａｎｄ ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ（ｂａｎｎｅｄ ｄｒｕｇｓ），ｂｕｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｔｏ ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ Ｇ，ｔｏｂｒａｍｙｃｉｎ，ａｎｄ ｍｉｄｅｃａｍｙｃｉｎ．Ｔｈｅ ｆｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｖｉｄｅｓ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｂａ— ｓｉｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏ１ ｏｆ Ｅ．ｔａｒｄａ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ｓｔｕｒｇｅｏｎ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｓｔｕｒｇｅｏｎ；Ｅｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａ ｔａｒｄａ；ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ