第１８卷第４期 长春大学学报 Ｖ０１．１８ Ｎｏ．４ ２００８年８月 ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＣＨＡＮＧＣＨＵＮ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ Ａｕｇ．２００８ 文章编号：１００９—３９０７（２００８）０４—００７５—０５ 西洋参叶二醇组皂苷抑制血管平滑肌细胞增殖及 影响原癌基因表达的研究 王智昊，赵学忠 （吉林大学第一医院，吉林长春１３００２１） 摘要：观察ＰＱＤＳ对ＶＳＭＣ增殖及原癌基因ｃ・ｍｙｃ的ｍＲＮＡ表达的影响，探讨ＰＱＤＳ抑制ＶＳＭＣ 的增殖作用及相关机制。方法用组织贴块法培养大鼠胸主动脉ＶＳＭＣ作为研究对象，用ＡｎｇｌＩ诱 导ＶＳＭＣ增殖，随机分为：空白对照组、Ａｎ Ｉ模型组、Ａｎ Ｉ＋ＰＱＤＳ ２５、５０、１００ｍｇ／Ｌ不同剂量组。 用ＭＴｒ法、流式细胞术、ＲＴ－ＰＣＲ法观察ＰＱＤＳ对细胞增殖、细胞周期、增殖指数及原癌基因ｃ—ｍｙｃ 的ｍＲＮＡ表达的影响。结果ＰＱＤＳ可减低ＶＳＭＣ的增殖能力，将增殖的ＶＳＭＣ抑制在Ｇ０／Ｇ１期，可 以下调ＶＳＭＣ中的原癌基因ｃ．ｍｙｃ的ｍＲＮＡ表达。结论ＰＱＤＳ能抑制ＶＳＭＣ增殖，其机制可能与 下调原癌基因ｃ—ｍｙｃ的表达有关。 关键词：西洋参叶二醇组皂苷；血管平滑肌细胞增殖；血管紧张素ＩＩ；原癌基因 中图分类号：Ｒ２８２．７１；Ｑ２５３ 文献标识码：Ａ 血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖是动脉粥样硬化（ＡＳ）和经皮冠状动脉介入治疗（ＰＣＩ）术后血管再狭窄等 疾病的主要病理变化…。血管紧张素ＩＩ（Ａｎ Ｉ）是肾素一血管紧张素系统（ＲＡＳ）中的重要生物活性肽，可诱 导细胞增殖 ｊ。ＶＳＭＣ增殖是受各种基因如原癌基因ｃ—ｍｙｃ、Ｃ—ｆｏｓ的调控，原癌基因ｃ—ｍｙｃ在ＡｎｇＩ！或生长 因子等刺激下，进行转录、表达水平升高，引发各种转录调节因子合成，促进细胞增殖 。西洋参叶二醇组 皂苷（ＰＱＤＳ）是五加科人参属植物，资料报道ＰＱＤＳ有抗心肌缺血、缩小心肌梗死面积的作用 。目前尚未 有文献报道ＰＱＤＳ对ＶＳＭＣ增殖的影响，本文就ＰＱＤＳ对ＶＳＭＣ增殖的影响进行研究。 １材料与方法 １．１试剂及材料 Ｗｉｓｔａｒ大鼠３只，雄性，１２０～１５０ｇ，购于吉林大学实验动物部。西洋参叶二醇组皂苷ＰＱＤＳ粉末（吉林 大学基础医学院化学教研室），Ａｎ Ｉ（Ｓｉｇｍａ公司），ＲＰＭＩ １６４０培养基（Ｇｉｂｃｏ公司），胎牛血清ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ公 司），兔抗大鼠 ．ＳＭＡ（平滑肌肌动蛋白）（美国Ｌａｂ ｖｉｓｉｏｎ公司），Ｓ－Ｐ抗兔试剂盒（中杉金桥生物工程有限 公司），ＤＡＢ显色试剂盒（中杉金桥生物工程有限公司），ＭＴＦ（Ｓｉｇｍａ分装），碘化丙锭ＰＩ（Ｓｉｇｍａ分装），ＲＮＡ 酶（Ｓｉｇｍａ分装），Ｔｒｉｚｏｌ（Ｇｉｂｃｏ公司），Ｍ—ＭＬＶ逆转录酶（Ｐｒｏｍｅｇａ公司），Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶（Ｐｒｏｍｅｇａ公司）， ｄＮＴＰ（Ｐｒｏｍｅｇａ公司），Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）（Ｐｒｏｍｅｇａ公司），其他试剂为国产、进口分析纯。 １．２ ＶＳＭＣ的培养及鉴定 用组织贴块法进行中层ＶＳＭＣ培养，待细胞铺满培养瓶底８０％以上时，传代培养，取第３—６代培养物， 经兔抗大鼠仅。ＳＭＡ平滑肌肌动蛋白免疫组化染色鉴定，阳性细胞＞９８％，证实培养的是ＶＳＭＣ，实验用４～ １０代ＶＳＭＣ。 收稿日期：２００８．０６－２５ 基金项目：吉林省中医药管理局科技项目（２００４—０９６） 作者简介：王智吴（１９８０．），女，吉林省长春市人，吉林大学第一医院急诊科医师，硕士，主要从事 ｔ：，ｇｎ管临床常见疾病的诊疗与 研究。 ７６ 长春大学学报 第１８卷 １．３实验分组 将细胞随机分为５组，空白对照组（Ｃｏｎｔｒｏ１）：正常血管平滑肌细胞；ＡｎｇｌＩ模型组（Ｍｏｄｅ１）：ＡｎｇｌＩ １０ ｍｏｌ／Ｌ，ＰＱＤＳ低剂量组（ＰＱＤＳ１）：ＰＱＤＳ ２５ｍｇ／Ｌ＋ＡｎｇＩＩ １０ ｍｏｌ／Ｌ；ＰＱＤＳ中剂量组（ＰＱＤＳ２）：ＰＱＤＳ ５０ｍｇ／Ｌ ＋ＡｎｇＩＩ １０ ｍｏｌ／Ｌ；ＰＱＤＳ高剂量组（ＰＱＤＳ３）：ＰＱＤＳ １００ｍｇ／Ｌ＋ＡｎｇｌＩ １０ ｍｏｌ／Ｌ；以上各组细胞置于含 １０％胎牛血清的ＲＰＭＩ １６４０培养液中，于５％ＣＯ 、３７ｏＣ、饱和湿度培养箱中培养。 １．４用Ｍ，ＩＴＩ＇法测细胞增殖能力 用０．２５％胰蛋白酶消化单层培养细胞，用含１０％胎牛血清的ＲＰＭＩ １６４０培养液配成单细胞悬液，以每 孔１０ 一１Ｏ 个细胞接种于９６孔培养板中，每孔体积为２００ 。将培养板放人ｃＯ 孵箱中３７０（：、５％ＣＯ 及饱 和湿度条件下，培养２４ｈ，待培养细胞贴壁后，吸去培养液。根据上述分组中的给药，各组细胞在１０％胎牛血 清的ＲＰＭＩ １６４０培养液，于ＣＯ 孵箱中３７０（：、５％ＣＯ 及饱和湿度条件下，培养４８ｈ。弃去培养液，每孔加入 ＭＴ＇Ｆ溶液２０１ｘｌ，３７℃继续培养４ｈ后终止培养，吸弃培养上清液，每孔加１５０１￣１ ＤＭＳＯ（二甲基亚枫），振荡 １０ｒａｉｎ。然后选择４９０ｎｍ波长，在酶标仪上测定各孔吸光度值，记录结果。 １．５用流式细胞仪测细胞周期及增殖指数 将细胞接种在培养瓶中，培养２４ｈ，之后换无血清ＲＰＭＩ １４０培养液作用２６４ｈ，使细胞同步化于ｃ０期。 按前述分组方案加药处理后，继续培养４８ｈ，然后收集细胞，离心１０００ｇ×５ｍｉｎ，弃上清。用４℃预冷的７０％ 冷乙醇固定１８ｈ，之后调整细胞浓度为１×１０ ｃｅｌｌ／ｍｌ，ＰＩ染色３７℃孵育３０ｍｉｎ后进行流式分析，微机处理应 用ＭｏｄＦｉｔ ＬＴ３．０软件分析细胞周期中各期细胞所占总细胞的百分率；计算细胞增殖指数（Ｐｉ），ＰＩ＝（Ｓ＋Ｇ２／ Ｍ）／（Ｇ０／Ｇ１＋Ｓ＋Ｇ２／Ｍ）。 １．６ 用ＲＴ－ＰＣＲ法测ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ的表达 用快速提取法提取细胞总ＲＮＡ，用紫外分光光度计测定总ＲＮＡ浓度，波长在２６０ｎｍ、２８０ｎｍ处测其ＯＤ 值，ＯＤ２６０／２８０在１．８以上时可用。样品总ＲＮＡ用量为２ｐ．ｇ，总ＲＮＡ经反转录后，取１／１０体积７１ｘＬ反应 液，进行ＰＣＲ反应。ｃ—ｍｙｃ、ＧＡＰＤＨ由北京博迈德科技发展有限公司合成，具体引物长度见表１。ｅＤＮＡ预变 性：９４０（：，５ｍｉｎ。ＰＣＲ扩增：９４＇ｔ２，４５ｓ；５５℃，３０ｓ；７２ｏＣ，６０ｓ共３０个循环。循环完毕后７２￣（２延伸１０ｍｉｎ，４￣１２保 存。取５ ＰＣＲ产物进行２％琼脂糖凝胶（含０．Ｓｔａｇ／ｍｌ溴化乙锭）３Ｖ／ｃｍ电泳３０～５０ｍｉｎ，紫外灯下照相， 用凝胶成像处理系统对ＰＣＲ产物扩增的特异性片断进行灰度扫描，以ＧＡＰＤＨ密度作为参考定量标准，数值 以两者之积分光密度的比值表示，记录各组的三种ＰＣＲ的表达结果。 表１ ＰＣＲ引物设计。扩增长度及退火温度 １．７统计学处理 采用ＳＰＳＳ软件进行统计处理，所有计量数据以均数４－标准差（ ４－ｓ）表示，采用单因素方差分析 （ＡＮＯＶＡ）、ＳＮＫ检验进行差异的统计学处理。Ｐ＜０．０５为差异 有显著性。 ２结果 ２．１血管平滑肌细胞的鉴定 用倒置相差显微镜和Ｏｔ肌动蛋白免疫组化染色，对血管平 滑肌细胞进行鉴定。细胞培养３～５ｄ后，用相差显微镜观察可 见少量细胞自组织块边缘游离出来，细胞呈梭形或长梭形排列， 然后细胞呈放射性生长，长轴与组织块边缘垂直，多为两极，胞 图１ ＶＳＭＣ 肌动蛋白鉴定 第４期 王智吴，等：西洋参叶二醇组皂苷抑制血管平滑肌细胞增殖及影响原癌基因表达的研究 浆均匀，可见圆形细胞核及分裂相。至培养１０ｄ左右出现局部成束的细胞平行排列，部分区域细胞重叠，部 分区域高低起伏呈“峰、谷”状生长。ｄ肌动蛋白染色＞９８％的细胞染色呈阳性，即细胞浆内呈现棕黄色反 应，胞核不着色，表明细胞含有肌动蛋白，证明培养的细胞为ＶＳＭＣ。 ２．１ ＰＱＤＳ对ＶＳＭＣ增殖能力的影响 本实验用四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色法（ＭＩＴ法）测量各组的光密度值（ＯＤ值），ＯＤ值反映细胞 生长及增殖活性。ＡｎｇｌＩ模型组ＯＤ值与空白对照组相比明显升高（Ｐ＜０．０５），提示Ａｎ Ｉ可促进ＶＳＭＣ的 增殖，造模成功。ＰＱＤＳ高、中剂量组ＯＤ值与Ａｎ Ｉ模型组相比均显著降低（Ｐ＜０．０５），ＰＱＤＳ低剂量组有下 降趋势，但是没有统计学意义（Ｐ＞０．０５），提示ＰＱＤＳ能够抑制ＶＳＭＣ增殖，抑制作用与剂量大小成正相关。 表２ ＶＱＤＳ对ＶＳＭＣ增值的影响（ｉ±ｓ。ｔｌ＝８） ＃Ｐ＜０－０５ Ｖｓ Ｃｏｎｔｒｏｌ；・Ｐ＜０．０５：ｅａｃｈ ｇｒｏｕｐ ｏｆ ＤＳ Ｖ８Ｍｏｄｅｌ ２．２ ＰＱＤＳ对ＶｓＭＣ的细胞周期及增殖指数的影响 本实验用流式细胞仪测量细胞周期，观察ＰＱＤＳ对ＶＳＭＣ细胞周期影响及增殖指数（ＰＩ）的变化。 ＡｎｇｌＩ模型组与空白对照组比较：Ｇ０／Ｇ１期ＶＳＭＣ百分率明显减少（Ｐ＜０．０５），ｓ期、Ｇ２／Ｍ期ＶＳＭＣ百 分率显著增加（Ｐ＜０．０５），增殖指数也明显升高（Ｐ＜０．０５）。提示ＡｎｇｌＩ可以促进ＶＳＭＣ从Ｇ１／Ｇ０期向Ｓ期 转化，可以诱导ＶＳＭＣ增殖，造模成功。ＰＱＤＳ药物组与ＡｎｇＩＩ模型组比较：ＰＱＤＳ各组Ｇ０／Ｇ１期的ＶＳＭＣ百 分率均显著增加（Ｐ＜０．０５）；Ｓ期的ＶＳＭＣ百分率、增殖指数均显著减少（Ｐ＜０．０５）；ＰＱＤＳ高、中剂量组Ｇ２／ Ｍ期ＶＳＭＣ百分率显著降低（Ｐ＜０．０５），低剂量组Ｇ２／Ｍ期百分率降低，但没有明显差异（Ｐ＞０．０５）。ＰＱＤＳ 药物组与空白对照组比较：Ｇ０／Ｇ１期ＶＳＭＣ百分率中，ＰＱＯＳ低、中剂量组低于空白对照纽，ＰＱＤＳ高剂量组 高于空白对照组；Ｓ期、Ｇ２／Ｍ期ＶＳＭＣ百分率和增殖指数中，ＰＱＤＳ低、中剂量组高于空白对照组，高剂量组 低于空白对照组。在Ｇ０／Ｇ１期、ｓ期ＶＳＭＣ百分率和增殖指数中，ＰＱＤＳ高、低剂量组与空白对照组之间有 统计学意义（Ｐ＜０．０５），中剂量组与空白对照组间没有统计学意义（Ｐ＞０．０５）。提示ＰＱＰＳ高剂量组抑制 ＶＳＭＣ增殖的作用略强，中、低剂量组抑制作用略弱。ＰＱＤＳ各组相比：随药物剂量增加，Ｇ０／Ｇ１期ＶＳＭＣ百 分率显著增加（Ｐ＜０．０５）。ｓ期ＶＳＭＣ百分率和增殖指数显著减少（Ｐ＜０．０５）。上述结果显示ＰＱＤＳ对Ａｎ－ ｇｌＩ诱导的ＶＳＭＣ增殖有抑制作用，主要将细胞抑制在Ｇ１／Ｇ０期，抑制作用与ＰＱＤＳ剂量大小成正相关，如表 ３所示。 表３ ＰＱＤＳ对细胞周期及增殖指数的影响（ｉ±ｓ。ｎ＝８） ’Ｐ＜０．０５ ＶＳ Ｃｏｎｔｒｏｌ； Ｐ＜Ｏ．０５：ｅａｃｈ ｇｒｏｕｐ ｏｆＰＱＤＳ ｖｓＭｏｄｅｌ；△Ｐ＜Ｏ．０５：ＰＱＤＳ２，ＰＱＤＳ３ ＶＳ ＶＱＤＳｌ；口Ｐ＜Ｏ．０５：ＰＱＤＳ３ ｖｓ ＰＱＯＳ２ ２．３ ＰＱＤＳ对原癌基因ｃ—ｍｙｃ ｍＲＮＡ表达的影响 本实验用１０ Ｉ７ｍｏｌ／Ｌ的ＡｎｇＩＩ及加用不同剂量的ＰＱＤＳ作用于培养的平滑肌细胞，４８ｈ后用ＲＴ—ＰＣＲ法 观测细胞ｃ－ｍｙｃ的ｍＲＮＡ表达。空白对照组中ｃ－ｍｙｃ条带亮度较弱，ＡｎｇＩＩ作用４８ｈ后，ＡｎｇＩＩ模型组与空白 ７８ 长春大学学报 第１８卷 对照组比较ｃ－ｍｙｃ条带亮度明显加强，表达明显增高（Ｐ＜０．０５）。说明在ＡｎｇｌＩ诱导细胞增殖状态下ｃ—ｍｙｃ ｍＲＮＡ表达增高。ＰＱＤＳ组与Ａｎ Ｉ模型组比较，ＰＱＤＳ低、中、高剂量组的ｃ．ｍｙｃ条带亮度明显变弱，表达明 显下降（Ｐ＜０．０５）。ＰＱＤＳ组与空白对照组比较：ｃ—ｍｙｃ ｍＲＮＡ表达中，ＰＱＤＳ低、中剂量组高于空白对照组， 高剂量组低于空白对照组。ＰＱＤＳ各组比较：ｃ—ｍｙｃ条带随着ＰＱＤＳ剂量增大逐渐变弱，表达逐渐下降。ｅ— ｍｙｃ ｍＲＮＡ表达中ＰＱＤＳ高与中、低剂量组比较有统计学意义（Ｐ＜０．０５），上述结果显示：ＰＱＤＳ可以下调原 癌基因ｃ—ｍｙｃ ｍＲＮＡ的表达，下调作用与剂量大小成正相关，如表４所示。 表４ ＰＱＤＳ对原癌基因表达的影响（ｒａｔｉｏｎ ±ｓ。Ｊｌ＝３） Ｇｒｏｕｐｓ ｃ－ｍｙｃ／ＧＡＰＤＨ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｍｏｄｅ１ ＰＱＤＳ１ ＰＱＤＳ２ ＰＱＤＳ３ Ｐ＜Ｏ．０５ ｖｓ Ｃｏｎｔｒｏｌ；・Ｐ＜０．０５：ｅａｃｈ ｇｒｏｕｐ ｏｆ ＰＱＤＳ ｖ８ Ｍｏｄｅｌ；△Ｐ＜０．０５：ＰＱＤＳ２。ＰＱＤＳ３ ｖｓ ＰＱＤＳ１；１３Ｐ＜０．０５：ＰＱＤＳ３ Ｖ８ ＰＱＤＳ２ Ｍ ｌ ２ ３ ４ ５ —一 —圈 ｃ－ｍｙｃ（３５３ｂｐ） ＧＡＰＤＨ（４５０ｂｐ） Ｍ．ｍａｒｋｅｒ，１．空白对照组，２．ＡｎｇＩＩ模型组，一 ¨ 一３．ＰＱＤＳ低剂量组， 一 ¨ ～一 ４．ＰＱＤＳ中剂量组，５．ＰＱＤＳ高剂量组 ３讨论 ｕ血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖是动脉粥样硬化（ＡＳ）和ＰＣＩ术后血管再狭窄等疾病重要的病理改变。寻 找抑制ＶＳＭＣ增殖的药物及探讨抑制ＶＳＭＣ增殖的机制有重要意义。 本文用组织贴块法培养平滑肌细胞，与传统的消化法比较，具有稳定性好、培养时间短、细胞产量高、质 量好等特点。 ＡｎｇＩＩ是肾素一血管紧张素系统中最重要的生物活性肽，它不仅是血管活性物质引起机体血流动力学改 变，而且通过自分泌、旁分泌刺激ＶＳＭＣ增殖。本实验用Ａｎ Ｉ诱导ＶＳＭＣ增殖，ＭＴｒ法观察到ＡｎｇＩＩ模型组 ＯＤ值比空白对照组明显增高，说明ＡｎｇＩＩ促进ＶＳＭＣ增殖，表明实验造模成功。ＰＱＤＳ组ＯＤ值明显比Ａｎ— ｇＩＩ组减低，说明ＰＱＤＳ可抑制细胞增殖，且随剂量增加，抑制作用成正相关。本实验通过流式细胞仪技术， 发现ＡｎｇＩＩ使Ｇ０／Ｇ１期的ＶＳＭＣ百分率明显减少，ｓ期、Ｇ２／Ｍ期的ＶＳＭＣ百分率明显增加。说明ＡｎｇｌＩ促 使ＶＳＭＣ从Ｇ０／Ｇ１期进入到ｓ期、Ｇ２／Ｍ期，诱导细胞增殖。ＰＱＤＳ各组随剂量增加可增加Ｇ０／Ｇ１期ＶＳＭＣ 的百分率，减少ｓ期、Ｇ２／Ｍ期ＶＳＭＣ的百分率，减少增殖指数，阻断细胞由Ｇ０／Ｇ１期向ＤＮＡ合成的ｓ期、 Ｇ２／Ｍ期转化。说明ＰＱＤＳ可抑制ＶＳＭＣ的增殖，可将ＶＳＭＣ细胞抑制在Ｇ０／Ｇ１期，显示ＰＱＤＳ通过抑制 ＶＳＭＣ增殖而起到对ＡＳ的防治作用。 原癌基因家族中能被第二信使所诱导的立早基因（ｉｍｍｅｄｉａｔｅ ｅａｒｌｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｇｅｎｅｓ，ＩＥＧｓ），也称快反应基 因。这类基因是细胞经过外部刺激最先表达的一组基因，是联系细胞生化改变与细胞对刺激发生特异性反 应的中介物，其编码的特异ＤＮＡ的结合蛋白，将短暂的信号转为长时程的反应。因此，它们又被认为是第三 信使 ］，具有生长调节作用 。研究发现原癌基因ｃ．ｍｙｃ、ｅ—ｆｏｓ是ＶＳＭＣ增殖的始动因子，ｃ—ｍｙｃ促进细胞增 殖的机制有三：１．ｃ．ｍｙｃ羧基端与特异的ＤＮＡ序列结合，开放与细胞增殖有关的基因；２．氨基端与抑制基 因结合，解除抑制作用，刺激细胞增生；３．诱导丝氨酸一苏氨酸蛋白激酶Ｐ３４ｅｄｅ２产生，使细胞迁移 。本 试验ＲＴ．ＰＣＲ结果ＰＱＤＳ可以下调ｃ．ｍｙｃ的表达。说明ＰＱＤＳ抑制ＶＳＭＣ增殖的机制可能与下调ｃ－ｍｙｃ的 表达有关。本实验为ＰＱＤＳ抑制ＶＳＭＣ增殖、预防动脉粥样硬化提供理论基础。 参考文献： ［１］Ｃａｍｐｂｅｌｌ ＪＨ，Ｃａｍｐｂｅｌｌ ＧＲ．Ｃｕｌｔｕｒｅ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｔｏ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｓｃｉ， 第４期 王智吴，等：西洋参叶二醇组皂苷抑制血管平滑肌细胞增殖及影响原癌基因表达的研究 ７９ １９９３，８５：５０１—５１３． ［２］Ｏｗｅｎｓ ＧＫ．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ［Ｊ］．Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｒｅｖ，１９９５，７５（７）：４８７—５１７． ［３］Ｃｏｄｙ ＲＪ．Ｔｈｅ ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｏｎ ＩＩ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｃａｒｄｉｏ，１９９７，７９（５）：９—１０． ［４］Ｎｅｗｂｙ ＡＣ，Ｇｅｏｒｇｅ ＳＪ．Ｐｒｏｐｏｓｅｄ ｒｏｌｅｓ ｆｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎ ｍｅｄｉａｔｉｎｇ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｐｒｏｌｆｉｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｖａｓｃｕｌａｒ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｅｓ［Ｊ］． Ｃａｒｄｉｏｖａｓｅ Ｒｅｓ，１９９３，２７（７）：１１７３—１１８３． ［５］ Ｍａｌｌａｔ Ｚ，Ｃｏｊｏｖａ Ａ，Ｍａｒｃｈｉｏｌ－Ｆｏｕｍｉｇａｕｌｔ Ｃ，ｅｔ １ａ．Ｉｎｈｉｂｉｉｔｏｎ ｏｆ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ—Ｂ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｓ ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｅｓ ａｎ ｕｎｓｔａｂｌｅ ｐｌａｑｕｅ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ｉｎ ｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｃｉｅｒ Ｒｅｓ，２００１，８９：９３０—９３４． ［６］Ｍａｔｓｕｓａｋａ Ｔ，Ｉｃｈｉｋａｗａ Ｉ．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ［Ｊ］．Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，１９９７，５９：３９５ —４１２． ［７］Ｓｗａｎｓｏｎ ＧＮ，Ｈａｎｅｓｗｏｒｔｈ ＪＭ，Ｓａｒｄｉｎｉａ ＭＦ，ｅｔ １ａ．Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ａ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅ ｆｏｒ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ ＩＩ（３—８），ａ ｐｕｔａｔｉｖｅ ａｎ— ｉｇｏｔｅｍｉｎ ＩＶ ｒｅｃｅｐｔｏｒ［Ｊ］．Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，１９９２，４０：４０９—４１９． ［８］Ｎａｈｍｉａｓ Ｃ，Ｓｔｏｒｓｂｅｒｇ Ｄ．Ｔｈｅ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ ＡＴ ｒｃｅｅｐｔｏｒ：ｓｅａｒｃｈｉｎｇ ｆｏｒ ｓｉｇｎａｌ・ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｐａｈｔｗａｙｓ ａｎｄ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ［Ｊ］．Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｐｈａｒ－ｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９９５，１６：２２３—２２５． 责任编辑：姜丽杰 Ｓｔｕｄｙ ｏｆ Ｐａｎａｘ ＱｕｌｎｑｕｅｆｏＨｕｍ Ｄｉｏｌｓａｐｏｎｉｎｓ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｖａｓｃｕｌａｒ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｆｆｅｃｔｉｎｇ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｏ－ｏｎｃｏｇｅｎｅ ＷＡＮＧ Ｚｈｉ—ｈａｏ，ＺＨＡＯ Ｘｕｅ—ｚｈｏｎｇ （Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｊｉｌｉｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ １３００２１，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｅｃｔ ｏｆ ＰＱＤＳ ｏｎ ＶＳＭＣ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｈｔｅ ｐｒｏｔｏ－ｏｎｅｏｇｅｎｅ ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ． Ｔｏ ｄｉｓｃｕｓｓ ｈｔｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＰＱＤＳ ｉｈｎｉｂｉｉｔｎｇ ＶＳＭＣ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｒａｔｓ ａｏｒｔａ ｈｔｏｒａｃａｌｉｓ ｖａｓｃｕｌｒａ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ ｂｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｂｙ ｔｉｓｓｕｅ－ｓｔｉｃｋｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ ｉｎ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ．ＣｅＨｓ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍ ｄｉｖｉｄｅｄ ｔｏ：ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，ＡｎｇＩＩ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ，ＡｎｇＩＩ＋ ＰＱＤＳ ｇｒｏｕｐｓ，ａｍｏｎｇ ｈｔｅ ｍｏｄｅｌ＋ＰＱＤＳ ｇｒｏｕｐｓ，ＰＱＤＳ ｄｉｖｉｄｅｄ ｔｏ ２５ｍｇ／Ｌ，５０ｍｇ／Ｌ，ｌＯＯｍｇ／Ｌ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｄｏｓａｇｅ．Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｍａｋｅ ｍｏｄ． ｅｌ，１０～ｍｏｌ／Ｌ ＡｎｇＩＩ Ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｉｎｄｕｃｅ ＶＳＭＣ ｔｏ ｐｒｏｌｆｉｅｒａｔｅ．Ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｂｉｌｉｔｙ ｗｉｔｈ ＭＴｒ，ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｃｙｃｌｅ ａｎｄ ｐｒｏｌｉｆａｆｉｏｎ ｉｎｄｅｘ ｗｉｔｈ Ｈｏｗ ｅｙｔｏｍｅｔｃｒ，ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃ—ｍｙｃ ｍＲＮＡ ｗｉｔｈ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ． ｏｐｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｅｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｈｔｏｄ．ＲｅｃｕＲｓ ＰＱＤＳ ｃａｎ ｄｅｃｒｅｓｅ ｈｔｅ ｂａｉｌｉｔｙ ｏｆ ＶＳＭＣ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ｉｔ ｃａｎ ｉｈｎｉｂｉｔ ＶＳＭＣ ａｔ ＧＯ／Ｇ１ ｐｅｒｉｏｄ． ＰＱＤＳ ｃａｌｌ ｄｏｗｎ ｒｅｕｇｌａｔｅ ｔｈｅ ｍＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃ・ｍｙｃ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＰＱＤＳ Ｃａｎ ｉｎｈｉｂｉｔ ＶＳＭＣ ｐｒｏｌｆｉｅｒａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ｍｅｓｃｈａｎｓｉｍｓ ｏｆ ｉｔ ｃｏｎｃｅｍｅｄ ｗｉｔｈ ｄｏｗｎ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃ－ｍｙｃ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｐａｎａｘ Ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍ Ｄｉｏｌｓａｏｐｎｉｎｓ；ｖａｓｃｕｌａｒ ｓｍｏｏｈｔ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ；ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ Ｉ／；ｐｒｏｔｏ．ｏｎｃｏｇｅｎｅ