卞圈奶才２０１２・５ ＤＡＩＲＹ ＨＥＡ ｒＨ 圜 牛病毒性腹泻病毒弱毒活疫苗免疫 持续期的研究 张淑琴’，郭利’，王伟’，张亭亭 ，吴永旺 ，武华 （１．中国农业科学院特产研究所，长春 １３２１０９， ２．北京必威安泰生物科技有限公司，北京 ｌ００１ ７６） 中图分类号：￥８５８．２３文献标识码：Ａ 文章编号：１ ００４—４２６２（２０１ ２）０５—００２９—０４ ｜｜＼Ｌ 一 —摘 要：为检测牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）弱毒活疫苗在免疫牛体内抗体产生及其消长规律，评价弱毒疫苗 的保护效力，并确定免疫持续期，本试验对免疫试验牛每头颈部肌肉接种ＢＶＤＶ ＳＭ株弱毒疫苗１０４ ＴＣＩＤ 监测血 清抗体效价，进行免疫持续期的确定。在疫苗免疫后的６个月、９＃－月和１２个月，分别抽取５头免疫组和５头对照组 牛，采）￣ＢＶＤＶ—ｌＬ强毒株进行攻毒试验，每头牛攻毒剂量为６ Ｘ １０ 。ＴＣＩＤ ／ｍＬ。结果显示疫苗免疫后１２个月时血 清中和抗体效价仍维持在１：１０４８Ｐ２上。攻毒结果显示，在３个不同时间点进行强毒攻击后，免疫组所有动物白细 胞数量都没有下降也没有分离到病毒，而对照组动物白细胞数下降均超过３０％，６４＂月和９个月时动物血清中均能 分离到病毒，而１２个月对照组动物由于年龄大，没有分离到病毒，因此暂定此疫苗的免疫持续期为９个月。 关键词：牛病毒性腹泻病毒；弱毒活疫苗；免疫持续期；保护效果 牛病毒性腹泻病毒（ＢｏｖｉＲｅ ｖｉ ｒａｌ ｄｉａ ｒ ｒｈｅａ ｖｉ ｒｕｓ， 估算，在美国每１００万犊牛中，由ＢＶＤＶ感染造成的损 ＢＶＤＶ）是黄病毒科（Ｆｌａｖｉｖｉ ｒｉｄａｅ）瘟病毒属（Ｐｅｓｔｉｖｉ ｒｕｓ）的 失可达２ ０００万～５ ７００￣－美元［３， 。由于没有很好的免疫 代表种。在分类上与猪瘟病毒（Ｃｌａｓｓｉｃａｌ ｓｗｉｎｅ ｆｅｖｅｒ 防护措施，本病感染呈上升趋势。对牛群的肥育、产奶 ｖｉ ｒｕｓ，ＣＳＦＶ）和边界病毒（Ｂｏｒｄｅ ｒ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉ ｒｕｓ，ＢＤＶ） 和繁殖影响极大。疫苗接种是本病最重要的预防和控制 同为一属，抗原性有交叉性反应。病毒可感染牛、羊、 措施，中国农业科学院特产研究所自２００６年就开始进行 猪等多种家畜和野生反刍动物，但以牛为主。受感染牛 ＢＶＤ发病机理及疫苗研究，并成功筛选到制苗用毒株［５ 表现为发热、白细胞减少、腹泻、流产、黏膜糜烂溃 及分离到ＢＶＤＶ攻击用强毒株＿６】，本研究旨在进～步评 疡等急性感染症状及小牛先天持续性感染【１ Ｊ。１ ９４６年 价所筛选的制苗用毒株配成冻干苗后免疫动物的抗体消 Ｏｌａｆｓｏｎ首次在美国东北部地区发现并分离出ＢＶＤＶ＿２］。 长规律并确定其免疫持续期，为合理制定免疫程序及预 到目前为止，牛病毒性腹泻病毒已遍布全世界，严重危 防和控制牛病毒性腹泻的发生和流行提供实践依据。 害养牛业的发展。ＢＶＤＶ感染造成的经济损失巨大，据 １材料和方法 收稿日期：２０１ １—０９—２８ 基金项目：牛羊重大疫病防控技术研究与产业化（２００８０３０１ ８） １．１试验材料 作者简介：张淑琴（１９７８一），女，内蒙古赤峰市人，博士，助理研究员 主要从事动物病毒和生物制品的研究。 牛肾（ＭＤＢＫ）细胞、牛病毒性腹泻病毒制苗株 通讯作者：武华。 （ＢＶＤＶ—ＳＭ）、攻击用强毒株（ＢＶＤＶ—ＪＬ），均由中 ２９－科技 ＿ 一 羞世 罂器皿 一 丑世 导皿 ２・５ 中国奶斗２０１加 ∞ ∞ ∞ ∞ 加 ０ 加 ∞ 舳 ∞ ∞ 加 ０ ＤＡＩＲＹ ＨＥＡＩ ｒＨ 圜 ３个时间点的免疫组牛不论白细胞还是鼻拭子均没有分 原，最早在美国纽约牛群中暴发的ＢＶＤ被形容为具有 离到病毒。 一２ｄ ０ｄ ２ｄ ４ｄ ６ｄ ８ｄ １０ｄ 攻毒天数（ｄ） 图２免疫后６个月试验动物攻毒后白细胞下降比变化曲线 －２ｄ ０ｄ ２ｄ ４ｄ ６ｄ ８ｄ １０ｄ 攻毒天数（ｄ） 图３免疫后９个月试验动物攻毒后白细胞下降比变化曲线 １２Ｏ １００ ８０ 遨 ６Ｏ 留 嚣４ｏ ２Ｏ ０ —２ｄ ０ｄ ２ｄ ４ｄ ６ｄ ８ｄ １０ｄ 攻毒天数（ｄ１ 图４免疫后１２个月试验动物攻毒后白细胞下降比变化曲线 ３讨论 牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）是一个高度传染性病 “爆炸性传播”能力，同群牛基本上在几天之内全部发 病 。２００７年。ＯｌＥ将该病列为需要通报的牛疾病 。 血清学检测结果、临床症状资料和本研究室前期做的大 量调查研究证明牛病毒性腹泻在我国广泛存在，对养牛 业造成很大的经济损失。 弱毒疫苗是预防和控制牛病毒 性腹泻的主要措施， 其用于预防牛病毒性腹泻已有约五十年的历史【９】。弱毒 活疫苗既可刺激机体的细胞免疫，又可以刺激机体产 生体液免疫；动物免疫后产生抗体速度快并且免疫期 持久，无需重复免疫。到目前为止国外批准上市的抗 ＢＶＤＶ的疫苗达数百种＿１…。在集约化养牛业日益发达的 今天，国外牛病毒性腹泻疫苗已成为养牛业必须使用的 疫苗之一。我国目前尚无自主研发的牛病毒性腹泻活疫 苗，本实验室前期工作筛选到一株致细胞病变型牛病毒 性腹泻毒株，将其驯化培养后证明其安全、免疫保护效 果良好。本试验继续对该毒株进行免疫持续期研究， 监测了其在牛体内抗体的消长规律。研究结果表明， 该活疫苗应用后动物免疫一次，在免疫后１ ４日左右产 生抗体，在６０～９０天达到高峰，持续数周后缓慢下降， １２个月后抗体效价仍维持在１：１０４８。国际上常用于评 价ＢＶＤＶ１型疫苗的攻击毒为ＢＶＤＶ—ＮＹ毒株，该型毒株 虽在实际生产中形成很严重的疾病，但将其单独感染牛 时，临床表现不是很明显，一旦牛体免疫力降低才表现出 临床症状，形成疫病的流行，给养牛业造成巨大的经济 损失【＿ 。而本试验所用攻击毒株ＢＶＤＶ—ＪＬ为ＢＶＤＶｌ型 病毒，感染牛时临床表现较明显。在免疫后６个月、９ 个月和１２个月时疫苗保护率均为１００％。但由于免疫后 １ ２月时动物年龄较大，对照动物也没有分离到病毒，因 此暂定此疫苗的免疫持续期为９个月。此项研究可为我 国研发自主知识产权的ＢＶＤＶ活疫苗提供候选毒株，为 ＢＶＤＶ活疫苗的研制奠定了基础。 参考文献 ［１］Ｘｕｅ Ｗ，Ｍａｔｔｉｃｋ Ｄ，Ｓｍｉｔｈ Ｌ，ｅｔ ａｌ Ｆｅｔａｌ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ａｇａｉｎｓｔ ｂｏｖｉｎｅ ｖｉｒａｌ ｄｉａｒｒｈｅａ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅｓ １ ａｎｄ ２ ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ａ ｍｏｄｉｉｆｅｄ—ｌｉｖｅ ｖｉｒｕｓ ｖａｃｃｉｎｅ［Ｊ］ＣａｎＪ Ｖｅｔ Ｒｅｓ，２００９，７３（４）：２９２—２９７ ［２】Ｏｌａｆｓｏｎ，Ｐ．Ａｎ ａｐｐａｒｅｎｔｌｙ ｎｅｗ ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｂｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｏｆ ｃａｔｔｌｅ［Ｊ］． Ｃｏｍｅｌｌ Ｖｅｔ，１９４６，３６：２０５—２１３． ［３１ Ｈａｎｓ Ｈｏｕｅ．Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｆｅａｔｕｒｅｓ ａｎｄ Ｅｃｏｎｏｍｉｃａｌ Ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ ｏｆ Ｂｏｖｉｎｅ Ｖｉｒｕｓ Ｄｉａｒｒｈｅａ Ｖｉｒｕｓ（ＢＶＤＶ）Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１９９９（６４）：８９－１０７． ３１ Ｉ科技 ＿ 圜 Ｄ中Ａ圈哪ＩＲ才Ｙ２ ０Ｈ１２Ｅ・５Ａ Ｉ ｒＨ ［４］Ｈｏｕｅ Ｈ．Ｅｃｏｎｏｍｉｃ ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ＢＶＤＶ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｄａｉｒｉｅｓ［Ｊ］． Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ．２００３，３１：１３７—１４３． Ｖｅｔ Ｃｌｉｎ Ｆｏｏｄ Ａｎｉｍ，２０１０，２６（１）：１０５—１２１ ［９】Ｃｏｇｇｉｎｓ Ｌ，Ｇｉｌｌｅｓｐｉｅ ＪＨ，Ｒｏｂｓｏｎ ＤＳ，ｅｔ ａ１．Ａｔｔｅｎｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｖｉｒｕｓ ［５］张淑琴，郭利，武华，等．牛病毒性腹泻弱毒活疫苗安全性和 免疫保护效果的研究 中国兽医科学，２０１１，１０（３３）：１８１—１８４． ｄｉａｒｒｈｅａ ｖｉｒｕｓ（ｓｔｒａｉｎ Ｏｒｅｇｏｎ Ｃ２４Ｖ）ｆｏｒ ｖａｃｃｉｎｅ ｐｕｒｐｏｓｅｓ［Ｊ】． Ｃｏｒｎｅｌｌ Ｖｅｔ，１９６１，５４：５３９—５４５． ［６】张淑琴，郭利，武华，等．牛病毒性腹泻病毒ＢＶＤＶ－ＪＬ株的分 ［１０］武华，薛文志．牛病毒性腹泻病毒及其控制＿Ｍ］．北京：中国农 离鉴￣－Ｕ】中国预防兽医学报，２０１１，３（３３）：１８１—１８４． 业出版社．２０１０，２１－２８． 【７】Ｗｅｉｓｓ Ｍ，Ｈｅｒｔｉｇ Ｃ，Ｓｔｒａｓｓｅｒ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｂｏｖｉｎｅ ｖｉｒｕｓ ｄｉａｒｒｈｅａ／ｍｕｃｏｓａｌ ｄｉｓｅａｓｅ：ａ ｒｅｖｉｅｗ．Ｓｃｈｗｅｉｚ Ａｒｃｈ Ｔｉｅｒｈｅｆｌｋｄ，１９９４ １３６（５）：１７３—８５． ［８］Ｊｕｌｉａ Ｆ，Ｒｉｄｐａｔｈ，Ｂｏｖｉｎｅ Ｖｉｒａｌ Ｄｉａｒｒｈｅａ Ｖｉｒｕｓ：Ｇｌｏｂａｌ Ｓｔａｔｕｓ［Ｊ］． ［１ １］Ｒｉｄｐａｔｈ ＪＦ，Ｎｅｉｌｌ ＪＤ，Ｐｅｔｅｒｈａｎｓ Ｅ．Ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｏｆ ＢＶＤＶ１ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｎ ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ｂｅｔｔｅｒ ｖａｃｃｉｎｅ ｅｆｉｃａｃｙ ｆｃｈａｌｌｅｎｇｅ ｍｏｄｅｌｓ［Ｊ］．Ｖａｃｃｉｎｅ，２００７，２５（４７）：８０５８—６６． Ｔｈｅ Ｅｆｉｃａｃｙ ｏｆ ｆｔｈｅ Ｌｉｖｅ Ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ Ｂｏｖｉｎｅ Ｖｉｒａｌ Ｄｉａｒｒｈｅａ Ｖｉｒｕｓ ＳＭ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｓｔｒａｉｎ ＺＨＡＮＧ Ｓｈｕ．ｑｉｎ ，ＧＵＯ Ｌｉ ，ＷＡＮＧ Ｗｅｉ ，ＺＨＡＮＧ Ｔｉｎｇ．ｔｉｎｇ。ＷＵ Ｙｏｎｇ．ｗａｎｇ ，ＷＵ Ｈｕａ ，（１．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｓｐｅｃｉａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃ Ａｎｉｍａｌ ａｎｄ Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ １３２１０９；２．Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｂｉｇｖｅｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｃｏ．Ｌｔｄ．，Ｂｅｉｊｉｎｇ １００１７６） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｗａｓ ｄｅｓｉｇｎｅｄ ｔｏ ｅｖａｌｕｔａｔｅ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ（ＳＮ）ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ ｂｏｖｉｎｅ ｖｉｒａｌ ｄｉａｒｒｈｅａ ｖｉｒｕｓ （ＢＶＤＶ）ｉｎ ｔｈｅ ｃａｌｖｅｓ ｖａｃｃｉｎａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ １ｉｖｅ ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ ｂｏｖｉｎｅ ｖｉｒａｌ ｄｉａｒｒｈｅａ ｖｉｒｕｓ ＳＭ ｖａｃｃｉｎｅ．Ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ ３０ ｈｅａｌｔｈｙ ｃａｌｖｅｓ ａｔ ｗｅａｎｉｎｇ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ．ｗｉｔｈ １ ５ ｃａｌｖｅｓ ｉｎ ｖａｃｃｉｎａｔｅ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ １ ５ ｉｎ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅ ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ ＢＶＤＶ ＳＭ ｖａｃｃｉｎｅ ｓｔｒａｉｎ ｗａｓ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｅｄ ｖｉａ ｉｎｔｒａｍｕｓｃｕｌａｒ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅ ｎｅｃｋ ａｔ ａ ｓｉｎｇｌｅ ｄｏｓｅ ａｎｄ ｃｈａｌｌｅｎｇｅｄ ｗｉｔｈ ａ ｖｉｒｕｌｅｎｔ ＢＶＤＶ－ＪＬ ｖｉｒｕｓ ｂｙ ｎａｓａｌ ｓｐｒａｙ．Ｔｈｅ ｂｌｏｏｄ ｓａｍｐｌｅ ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｉｍｅ ｐｏｉｎｔｓ ｆｏｒ ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ＳＮ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔｉｔｅｒｓ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ＳＮ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔｉｔｅｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｖａｃｃｉｎａｔｅｄ ｃａｌｖｅｓ ｍａｉｎｔａｉｎｅｄ ａｔ ａ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｈｉｇｈ ｌｅｖｅｌ ｕｎｔｉｌ １ ２ ｍｏｎｔｈ ｐｏｓｔ．ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ．ａｎｄ ｔｈｅ ｖａｃｃｉｎａｔｅｄ ｃａｌｖｅｓ ｗｅｒｅ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｃｈａｌｌｅｎｇｅ，ａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｗｈｉｔｅ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ ｃｏｕｎｔ（ＷＢＣ）ａｎｄ，ｖｉｒｕｓ ｓｈｅｄｄｉｎｇ． ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，ｔｈｅ ｄｕｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｖａｃｃｉｎｅ ｗａｓ ａｔ ｌｅａｓｅ ｆｏｒ ９ ｍｏｎｔｈｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｂｏｖｉｎｅ ｖｉｒａｌ ｄｉａｒｒｈｅａ ｖｉｒｕｓ（ＢＶＤＶ）；Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ；Ｄｕｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｌｉｖｅ ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ ｖａｃｃｉｎｅ １宦≯ 总’。 ｝丑’’≮弼 近期乳品加工新项目 若尔盖完成乳制品生产线改扩建项目 ３月投产使用，建成后将成为亚洲乳品项目“第一工厂”， 近期，西藏若尔盖县高原之宝牦牛乳业组织实施的 是集乳饮料、低温酸奶、冰淇淋为一体的亚洲最大单体 “天然有机牦牛乳制品生产线改扩建”工程验收。截至去 工厂。该项目规划年生产能力３４万吨，总投资９亿元。３亿元，形成１６．８万吨的生产能力。 年年底，该公司生产奶粉１３０吨、酥油１５吨、酸奶２０吨。 其中一期投资５．安徽省最大乳制品基地将开建 近期，由合肥与阜阳合作共建的“阜阳合肥现代 红星乳业１０万吨鲜奶、乳制品加工项目４月复工 ４月，红星乳业集团年加工１０万吨鲜奶及乳制品加 产业园区”签定协议，中国农业发展银行安徽分行将于 工项目将开工续建，计划今年９月竣工。该项目于２００９年７月１８日开工建设，投资２．２５亿元。 ２０１２－２０１６年给予阜阳合肥现代产业园区信贷授信支持， 奶酪、黄油、 专项用于园区公用事业规划实施和基础设施项目建设。 项目内容包括建设年处理鲜奶１０万吨的奶粉、伊利乳业承诺在阜阳合肥现代产业园内建设该省最大的 有机奶加工厂。此外，红星乳业集团乳制品加工二期项 乳制品生产基地。 目已开始进行初期设计，计划投资２．４５亿元，包括投资１．９ 蒙牛金华工厂将建亚洲乳品项目“第一工厂” 近期，蒙牛在金华的生产基地正式开工，预计明年 亿元新建５０００头奶牛有机牧场项目和投资５０００万元新建 巴氏奶和酸奶生产线的液态奶项目。目前，５０００头奶牛 有机散场项目已经进行了场址的初步选择。 科技Ｉ ３２