灰毡毛忍冬新品种组培苗生根的研究

第２６卷第４期　２　０　０　６年１２月　河　南　林业科　技　ＶＯｌ＿２６ＮＯ．４　Ｄｅｃ．２　００　６　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｈｅｎａｎ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　灰毡毛忍冬新品种组培苗生根的研究　乇晓明　”，李永欣‘，易霭琴‘，宋庆安‘，聂启英　（１．湖　省林木无性系育种重点实验室，长沙４１０００４；２．巾南林业科技大学；　３．长沙环境保护职业技术学院）　摘要：以灰毡毛忍冬新品种‘金翠蕾’的组培无菌苗为试材，研究了不同生长素、活性炭、培养温度对组培　苗生根的影响。研究结果表明．不同生长素，活性炭浓度，培养温度对组培苗生根的影响显著。生根培养的适　宜生长素为ＩＢＡ．适当低温有利于灰毡毛忍冬组培苗生根，组培苗生根培养的适宜温度为２Ｏ℃　适宜的生根培　养基是１／２ＭＳ＋ＩＢＡ３．０　ｍｇ・Ｌ一＋活性炭２１０　ｍｇ・Ｌ～　关键词：灰毡毛忍冬；组织培养；生根率　中图分类号：￥５６７．７　９　文献标识码：Ａ　文章编号：１００３—２６３０（２００６）０４—０００１—０３　Ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ　ｆｒｏｍ　ｎｅｗ　ｖｒｉｅｔｉｅｓ　ｏｆ　Ｌｏｎｉｃｅｒａ　ｍａｃｒａｎｔｈｏｉｄｅｓ　ＷＡＮＧ　Ｘｉａｏ—ｍｉｎｇ‘’　（１．Ｔｒｅｅｓ　Ｃｌｏｎｅｓ　ｂｒｅｅｄｉｎｇ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｈｕｎａｎ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，　ＣｈａｎｇＳｈａ　４１０００４．Ｃｈｉｎａ；２．Ｃｅｎｔｒａｌ　Ｓｏｕｔｈ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｒｏｆ　Ｆｏｅｓｔｙ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｒｏｇｙ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｌｏｎｉｃｅｒａ　ｍａｃｒ＇ｄｄｌｔｈｏｉｄｅｓｃｇ．Ｊｉｎｃｔｕｌｅｉｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ａｓ　ｔｅｓｔ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ　ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｐａｐｅｒ，Ｄｆｉｆｅｒｅｎｔ　ａｕｘｉｎ　ａｎｄ　ａｃｔｉｖｅ　ｃａｒｂｏｎ　ａｎｄ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒ　ｗｅｒｅ　ｄｏｎｅ　ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅｉｒ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓｉｎｄｉｃａｔｅｔｈａｔｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ｏｆｒｏｏｔｉｎｇｒａｔｅｗａｓｖｅｒｙｄｉｓｔｉｎｃｔ．ＩＢＡｉｓｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍａｕｘｉｎｉｎ　ｔｈｅ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｃｕｌｔｕｒｅ．Ｉｔ　Ｗａｓ　ｆｏｕｎｄ　ｔｈａｔ　ｌｏｗｅｒ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｉｓ　ａｄｖａｎｔａｇｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｏｏｔ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｍｏｓｔｆａｖｏｒａｂｌｅ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｉｓ　２０ｏＣ．Ｔｈｅｓｔｉｆｔａｂｌｅ　ｒｏｏｔ￣ｍｅｄｉｕｍｗ－ｄｓ　１／２ＭＳｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄｗｉｈ３．ｔ０　ｍｇ‘Ｌ一‘ＩＢＡ　ｎｄ　ａ２１０　ｍｇ・Ｌ～ＡＣ．　、　ＫｅｙＷｏ—ｓ：Ｌｏｎｉｃｅｒａｍａｃｍ￣ｔｈｏｉｄｅｓ；ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ；ｒｏｏｍ￣ｇ；　灰毡毛忍冬，俗称拟大花忍冬，是忍冬科忍冬　属半常绿植物，也是西南、中南地区商品金银花的　主要品种之一　‘，它含有挥发油、黄酮类、三萜皂　甙、有机酸　‘等，具有抑菌、抗病毒、消炎懈毒．　抗艾滋病等作用ｕ　。湖南已从灰毡毛忍冬选育出高　培苗的增殖和生根影响试验　。但至今未见有关灰　毡毛忍冬组培苗生根的研究报道。　１材料与方法　１．１试验材料　产、优质花蕾型新品种‘金翠蕾’、‘银翠蕾’和‘白　云’，其花期花冠一直不开裂或半开裂，深受广大　以金翠蕾（Ｌｏｎｉｃｅｍ￣ｔｈｏＪｄｅｓ　ｃＴＪｉｎｃｍＩｅ１）为　试验材料。将本实验室继代培养的２～３　ｃｍ高的丛　芽切成单株后转接在生根培养基种上，培养时间　２５ｄ。　生产者和消费者青睐，但其常规的无性繁殖困难，　组培苗生根率较低瞄　。为此，我们在建立灰毡毛忍　冬新品种组培无菌体系和丛生芽增殖体系的基础　上　”，开展了新品种的组培苗生根的研究。　目前，国内外对金银花组培生根的研究报道不　多，且主要集中在忍冬植物（厶ｄａｐａｎｉｃａ　Ｔｈｕｎｂ），　国内主要有杨培君、王光金等开展了蒙花忍冬、凤　爪金银花、红河金银花等的组织培养与快速繁殖研　究，国外有Ｋａｒｈｕ　ＳＴ等开展了植物激素对蓝靛果组　收稿日期：２００６—１０—１５　１．２培养基及培养条件　基本培养基为ＭＳ，附加成分６一ＢＡ，ＮＡＡ　ＩＡＡ、ＩＢＡ和活性炭等，ＰＨ值为５．８，琼脂７ｇ－Ｌ～，　蔗糖浓度３０　ｇ．Ｌ～。培养基用３００ｍｌ的广口瓶分装，　每瓶３０ｍｌ，封口膜包扎，在１２１ｏＣ和１．１ｋｇ．ｃｍ　条　件下，用高压蒸汽灭菌锅灭菌２５ｍｉｎ。培养温度为　（２０±１）ｏｃ（除温度试验外），光强度３０～４０　ｍｏｌ・ｍ～・ｓ～，光照时间１２　ｈ・ｄ～。　作者简介：王晓明，在读博士，研究员，湖南省林木无性系育种重点实验室，常务副主任　主要从事经济林育种、栽培与生物技术研究　维普资讯 http://www.cqvip.com

２　河　南　林业科技　第２６卷　１．３试验设计　回归分析，得生根率的回归方程为　ｙ＝３５．０７２１＋４９．４６７５ｘ一１１．０７１０ｘ　＋０．６２０１ｘ”，相关系　随机区组试验设计，４次重复，每次重复中各　种处理接种１０瓶，每瓶接种１０根无菌苗。培养结　数ｒ＝０．９９９５（ｒ，　０．８７８，ｎｕ¨：＝０．９５９）。说明ＩＢＡ浓度　束后，调查组培苗生根率、根系等指标，并观察苗　木的叶色及生长是否正常。　ｌ－３．１不同生长素对组培苗生根的影响试验　生根培养基为１／２ＭＳ＋活性炭２００　ｍｇ・Ｌ～，附　加２．０ｍｇ／Ｌ的不同生长素（ＩＢＡ、ＮＡＡ、ＩＡＡ）。　１．３．２　ＩＢＡ浓度对组培苗生根的影响试验　设计ＩＢＡ　０．０、１．０、２．０、５．０、１０ｍｇ・Ｌ　５种　浓度，生根培养基为１／２ＭＳ＋活性炭２００　ｍｇ・Ｌ～。　１．３．３活性炭浓度对组培苗生根的影响试验　设计活性炭０、１００、２００、３００、４００、５００ｍｇ・Ｌ。　６种浓度，生根培养基为１／２ＭＳ＋ＩＢＡ２．０　ｍｇ・Ｌ～。　１．３．４温度对组培苗生根的影响试验　利用ＰＹＸ一３００Ｇ—Ｂ光照培养箱进行试验。设　计４种温度：１５ｏＣ、２０ｏＣ、２５ｏＣ、３０ｏＣ，温度波动　±０．５℃。生根培养基为１／２ＭＳ＋ＩＢＡ２．０　ｍｇ・Ｌ～＋活　性炭２００　ｍｇ・Ｌ～。　１．３．５不同品种对优化生根培养基的反应试验　供试品种：金翠蕾、银翠蕾和白云，优化生根　培养基是１／２ＭＳ＋ＩＢＡ３．０　ｍｇ・Ｌ～＋活性炭２１０　ｍｇ・Ｌ～。　２结果与分析　２．１不同生长素对组培苗生根的影响　方差分析结果表明，不同生长素对灰毡毛忍冬　组培苗生根的影响极大（Ｆ＝９７．９４４　，Ｒ城＝４．２６，　Ｆｎ　：８．０２），各激素间差异极显著。从表１可以看　出，２．０ｍｇ．Ｌ　的ＩＢＡ处理生根率最高，达到９３．４％，　而经过ＮＡＡ处理的组培苗，茎基部形成较多的愈　伤组织，生根率最低，小苗容易发黄，掉叶，而ＩＢＡ　处理的小苗叶色浓绿，根系好，须根多。因此，诱　导灰毡毛忍冬组培苗生根最适宜的生长素为ＩＢＡ。　表１　不同生长素对组培苗生根影响的试验结果　注：生根率：Ｌ．Ｓ．Ｄ．　＝４．７９，Ｌ　Ｓ．Ｄｍ０Ｉ＝６．８８　２．２　ＩＢＡ浓度对组培苗生根的影响　从表２可见，ＩＢＡ浓度在２～５　ｍｇ・Ｌ　的范　围内比较适合灰毡毛忍冬组培苗诱导生根，浓度过　高，生根率反而较低。对试验数据进行曲线估计和　对灰毡毛忍冬组培生根影响极显著，随着ＩＢＡ浓度　的升高，二者的变化曲线呈抛物线状。对本回归方　程求一阶导数并令其等于零，求解极值点，可得出　令生根率取得极大值的ＩＢＡ浓度为３．０　ｍｇ・Ｌ～。这　表明灰毡毛忍冬生根的最适浓度是３．０　ｍｇ・Ｌ～。　表２　ＩＢＡ浓度对组培苗生根影响的试验结果　ＩＢＡ／ｍｇ・Ｌ－’０．０　１．０　２．０　５．０　１０．０　生根率　３４．６　７５．４　９３．７　８３．３　４２．７　２．３活性炭浓度对组培苗生根的影响　有文献报道，在植物组培生根培养基中添加适　量活性炭可促进了不定根的诱导与生根率洚圳　。对　试验数据（表３）进行曲线估计和回归分析，得生根率　的回归方程为Ｙ＝７６．７８２１＋０．１２８０ｘ一０．０００３ｘ２，相关系　数ｒ：０，９６３４　（ｎ１．０５－０．８１１，ｒｏ．０ｔ－０．９１．７）。这表明活性炭　浓度对灰毡毛忍冬组培生根影响极显著，随着活性　炭浓度的升高，二者的变化曲线呈抛物线状。对回　归方程求极值点，可得出令生根率取得极大值的　ＩＢＡ浓度为２１０　ｍｇ・Ｌ～。从表３也可以看出，添加适　量（１００～４００　ｍｇ・Ｌ　）的活性炭可提高组培苗生根　率，２００　ｍｇ・Ｌ　的活性炭处理比不加活性炭的生根　率高出１６．６％。而且添加活性炭以后，灰毡毛忍冬组　培苗的根系和生长状况也比不添加活性炭时要好，　苗木粗壮，叶色浓绿，须根较多。这可能与组培苗　根系有避光生长的特性有关，使用活性炭后，创造　了有利于根系生长的黑暗环境，故能促进根系生　长。因此，灰毡毛忍冬组培苗生根最适合的培养基　为１／２ＭＳ＋ＩＢＡ３．０　ｍｇ・Ｌ～＋活性炭２１０　ｍｇ・Ｌ～。　表３活性炭浓度对组培苗生根影响的试验结果　２．４温度对组培苗生根的影响　方差分析结果表明，温度对灰毡毛忍冬生根的　影响差异极大（Ｆ＝８１．７８２　，Ｆ＝０．５１３，Ｒ　＝３．４９）。　多重比较结果也表明各处理间差异极显著。从表４　可见，适当低温有利于灰毡毛忍冬组培苗生根，但　温度过低，生根率较低；温度过高，生根率更低，　超过３０℃，生根率明显降低，而且组培苗出现黄叶　及死亡的现象。灰毡毛忍冬组培苗生根的适宜培养　温度为２０℃。　维普资讯 http://www.cqvip.com

第４期　王晓明等：灰毡毛忍冬新品种组培苗生根的研究　３　２．５不同品种对优化生根培养基的反应　ｍｇ・Ｌ－Ｉ）的活性炭，明显促进组培苗的生根。研究　发现，适当低温有利于诱导灰毡毛忍冬组培苗生　根，找到了其组培苗生根培养的适宜温度为２０℃。　３．２三个灰毡毛忍冬新品种在优化的生根培养基上　诱导生根，其生根率没有明显差异，说明筛选的优　化生根培养基１／２ＭＳ＋ＩＢＡ３．０　ｍｇ・Ｌ～＋活性炭２１０　为了探讨灰毡毛忍冬３个新品种对优化生根培　养基的表现，进行了不同品种试验（表５）。方差分析　表４不同温度对组培苗生根影响的试验结果　ｍｇ・Ｌ　具较广的适应性，均适合金翠蕾、银翠蕾　和自云生根培养。　注：生根系：Ｌ．Ｓ．Ｄｏ　＝７．７４，Ｌ．Ｓ．Ｄ一＝１０．８４７　结果表明，在优化生根培养基上　导生根，３个品种　参考文献：　之间没有显著性差异　：３．３１４，Ｒ“　＝４．２６，Ｒ“ｕ：＝８．０２）。　【１】石钺，石任兵，陆蕴如．我国药用金银花资源、化学成分及药　证明该优化生根培养基适合金翠蕾、银翠蕾和白云　理研究进展【Ｊ】．中国药学杂志，１９９９．３４（１１）　的生根培养。　【２】王天志，李永梅．王志霄．灰毡毛忍冬花蕾挥发油成分研　表５　不同品种对优化生根培养基的反应结果　究【Ｊ】．中草药．２０００．３１（９）：６５７—６５８　ｆ３】茅青，曹东，贾宪生．灰毡毛忍冬化学成分的研究．药学学　报．１９９３，２８（４）：２７３—２７８　【４】周日宝，童巧硷灰毡毛忍冬与正品金银花的绿原酸含量比较，中　２．６组培苗的移栽　药材．２００３．２６（６）：３９９－４００　生根培养２５　ｄ左右的苗高达３　ｃｍ以上时，采　【５】王晓明．罗金塔、马社军等．金银花（灰毡毛忍冬）新品种　用独创的“塑料杯单株一步移栽法”，不需炼苗，　选育，湖南林业科技，２００４．３１（６）：１５—１７　直接从培养瓶中取出试管苗，洗掉根部培养基，在　【６】王晓明．易霭琴．宋庆安等．灰毡毛忍冬新品种组织培养　０．１％瑞毒霉一锰锌（浙江禾本农药化学有限公司生　的无菌体系建立，２００５．（２３）：１４—１６　产，５８％可湿性粉剂）溶液中浸泡３　ｍｉｎ，栽入盛有　【７】王晓明．李＝ｊＩ漱、聂启英．金银花组织培养的研究进展【Ｊ】，　黄心土、炭化谷壳灰、细砂混合（１：２：２）基质　湖南林业科技，２００６，３３（４）：１－３　的塑料杯中。以０．１％瑞毒霉溶液淋透基质，再用组　ｆ８ｌ鼓立理．童明控．活性炭在甜樱桃组织培养中的应用【Ｊ】，　培废弃的封口膜封口保湿，置于自动喷雾的塑料大　落叶果树，２００１，３：７～８　棚中。３０ｄ后，揭开封口膜，４０ｄ后可移入大田，　【９】赖家业杨振繇活性炎　士＝丰宁难期　始养中白　用【Ｊ１，广西热作　成活率达９５％以上。　科找１９９９．７３（４）：１０—１１　‘　３结论与讨论　【１０］刘很林．梁珍海．朱军．活性炭在植物组织培养中的作　３．１不同生长素、活性炭、培养温度对组培苗生根　用概述【Ｊ１．江苏休业科技．２００１，２８（５）：４６＿４７　的影响显著。ＩＢＡ是金翠蕾生根培养的适宜生长素，　（责任编辑：王团荣）　其适宜浓度为３．０　ｍｇ・Ｌ～；添加适量（２００～３００