浙江大学学报（农业与生命科学版） ３９（３）：３５１～３５４，２０１３ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ａｇｒｉｃ．＆Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．） ｈｔｔｐｔｉ｜ ．ｊｏｕｒｎａｌｓ．ｚｊｕ．ｅｄｕ．ｃｎ／ａｇｒ ＤＯＩ：１０．３７８５／ｊ．ｉｓｓｎ．１００８—９２０９．２０１２．０２．０３３ Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｄｘｂｎｓｂ＠ｚｊｕ．ｅｄｕ．ｃｎ 疫苗的泡沫冷冻干燥研究 张绍志 ，施铭耀 ，陈光明 ，吕芳 ，卢宇。 （１．浙江大学制冷与低温研究所，杭州３１００２７；２．江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心，南京２１００１４） 摘要 以鸡新域疫活疫苗为例，介绍了泡沫冷冻干燥的工艺过程，并对用泡沫冷冻干燥法制得的样品进行热分析 及鸡胚半数感染量（５０％ｅｇｇ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｄｏｓｅ，ＥＩＤｓｏ）测试，然后与用传统冷冻干燥法生产的低毒疫苗和耐热疫苗进 行对比．结果表明：经泡沫冷冻干燥工艺处理的疫苗与低毒疫苗、耐热疫苗的玻璃化转变温度分别为３３．９℃、３Ｏ．２ ℃和４Ｏ．１℃；泡沫冷冻干燥疫苗和耐热疫苗的耐老化试验下降滴度分别为１．１和０．８．表明用泡沫冷冻干燥法制 得的疫苗在耐热性能上有其优越性，值得进一步深入研究． 关键词 泡沫冷冻干燥；疫苗；差示量热扫描；鸡胚半数感染量 中图分类号Ｒ ３９２；Ｓ ８５９．７９＋７ 文献标志码Ａ Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｆｏａｍ ｆｒｅｅｚｅ ｄｒｙｉｎｇ ｉｎ ｖａｃｃｉｎｅ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ａｇｒｉｃ．＆Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．），２０１３，３９（３） ３５１—３５４ ＺＨＡＮＧ Ｓｈａｏｚｈｉ ，ＳＨＩ Ｍｉｎｇｙａｏ ，ＣＨＥＮ Ｇｕａｎｇｍｉｎｇ ，ＬＹＵ Ｆａｎｇ ，ＬＵ Ｙｕ （１．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｒｅｆｒｉｇｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｒｙｏｇｅｎｉｃ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ ３１００２７，Ｃｈｉｎａ；２．Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｃｈｉｎａ，Ｊｉａｎｇｓｕ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１００１４，Ｃｈｉｎａ） Ｓｕｍｍａｒｙ Ｆｒｅｅｚｅ－ｄｒｙｉｎｇ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｗｉｄｅｌｙ ｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，ｖａｃｃｉｎｅｓ ａｎｄ ｈｉｇｈ—ｖａｌｕｅｄ ｆｏｏｄｓ．Ｆｏａｍ ｆｒｅｅｚｅ－ｄｒｙｉｎｇ ｉｓ ａ ｎｅｗ ｔｙｐｅ ｏｆ ｄｒｙｉｎｇ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｉｎ ｗｈｉｃｈ ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅ ｉｓ ｆｏａｍｅｄ ａｎｄ ｆｒｏｚｅｎ ｂｅｆｏｒｅ ｄｒｙｉｎｇ．Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ ｆｒｅｅｚｅ－ｄｒｙｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ，ｔｈｅ ｎｅｗ ｍｅｔｈｏｄ ｃａｎ ｒｅｄｕｃｅ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ａｎｄ ＣＯＳｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ．Ｓｏｍｅ ｆｏｒｅｉｇｎ ｒｅｓｅａｒｃｈｅｒｓ ｈａｖｅ ｕｓｅｄ ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｔｏ ｐｒｏｄｕｃｅ ｈｅａｔ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｖａｃｃｉｎｅｓ ｗｈｉｃｈ ｃａｎ ｅｎｄｕｒｅ ｈｉｇｈｅｒ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ａｎｄ ｒｅｍａｉｎ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｆｔｅｒ ａ ｌｏｎｇｅｒ ｓｔｏｒａｇｅ ｉｎ ｒｅｆｒｉｇｅｒａｔｏｒ．Ｕｐ ｔｏ ｎｏｗ，ｌｉｔｔｌｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｂｏｕｔ ｆｏａｍ ｆｒｅｅｚｅ—ｄｒｙｉｎｇ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｒｅｐｏｒｔｅｄ ｄｏｍｅｓｔｉｃａｌｌｙ．Ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ，ｎｅｗｃａｓｔｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｖａｃｃｉｎｅ ｗａｓ ｕｓｅｄ ａｓ ａｎ ｅｘａｍｐｌｅ ｔｏ ｉｌｌｕｓｔｒａｔｅ ｔｈｅ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ ｏｆ ｆｏａｍ ｆｒｅｅｚｅ－ｄｒｙｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｔｏ ｔｅｓｔ ｉｔｓ ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｈｅａｔ—ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｖａｃｃｉｎｅ． Ｔｈｅ ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｆｏａｍ ｆｒｅｅｚｅ ｄｒｙｉｎｇ（ＦＦＤ）ｓａｍｐｌｅ ｉｎｃｌｕｄｅｄ Ｗ（ｔｒｅｈａｌｏｓｅ）＝１０ ，∞（ｈｙｄｒｏｌｙｚｅｄ ｇｅｌａｔｉｎ）一５ ，∞（ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ－１０８）一３ ， （ａｒｇｉｎｉｎｅ）一２ ，２５ ｍｍｏｌ／Ｌ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ＝７．２）．Ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅ ｗａｓ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ：１）Ｏｎｅ ｍｉｌｌｉｌｉｔｅｒ ｓａｍｐｌｅ ｗａｓ ｐｌａｃｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｐｌａｔｅ ｏｆ ｔｈｅ ｆｒｅｅｚｅ ｄｒｙｅｒ ａｎｄ ｃｏｏｌｅｄ ｔｏ １ ５℃；２）ｔｈｅｎ ｔｈｅ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｗａｓ ｌｏｗｅｒｅｄ ｔｏ ５ Ｐａ ａｎｄ ｆｏａｍｉｎｇ ｂｅｇａｎ；３）ａｆｔｅｒ ｏｎｅ ｈｏｕｒ ｔｈｅ ｐｌａｔｅ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｗａｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｕｐ ｔｏ ３ １℃ａｔ ａ ｖｅｌｏｃｉｔｙ ｏｆ ０．７℃／ｍｉｎ ａｎｄ ｋｅｐｔ ｆｏｒ ａｎｏｔｈｅｒ ４８ ｈｏｕｒｓ．Ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅｓ ｍａｄｅ 基金项目：江苏省农业科技自主创新资金“鸡新城疫耐热糖玻璃活疫苗制造技术研究”资助项目［Ｃｘ（１１）４０７１］． 通信作者（Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ）：卢宇，Ｔｅｌ：＋８６—０２５—８４３９２０７８；Ｅ－ｍａｉｌ：ｆｉｓｈｍａｎｌｕｙｕ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ 第～作者联系方式：张绍志，Ｅ－ｍａｉｌ：ｅｎｅｚｓｚ＠ｚｊｕ．ｅｄｕ．ｃｎ 收稿日期（Ｒｅｃｅｉｖｅｄ）：２０１２—０２—０３；接受日期（Ａｃｃｅｐｔｅｄ）：２０１２—０６～０３；网络出版日期（Ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｏｎｌｉｎｅ）：２０１３—０５—１５ ＵＲＬ：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｅｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３３．１２４７．Ｓ．２０１３０５１５．１６３７．０１４．ｈｔｍｌ 浙江大学学报（农业与生命科学版） 第３ ９卷 ｂｙ ｆｏａｍ ｆｒｅｅｚｅ ｄｒｙｉｎｇ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅｒｍａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ａｇｉｎｇ ｔｅｓｔ，ａｎｄ ｗｅｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｌｉｖｅ ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ ｓａｍｐｌｅｓ ａｎｄ ｈｅａｔ—ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｓａｍｐｌｅｓ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｂｙ ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ ｆｒｅｅｚｅ ｄｒｙｉｎｇ．Ｔｈｅ ｌａｔｔｅｒ ｔｗｏ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｓａｍｐｌｅ ｗｅｒｅ ｂｏｕｇｈｔ ｆｒｏｍ ｍａｒｋｅｔ（Ｔｉａｎｂａｎｇ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｎａｎｊ ｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ）．Ｔｈｅｒｍａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｗａｓ ｄｏｎｅ ｗｉｔｈ ａ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｓｃａｎｎｉｎｇ ｃａｌｏｒｉｍｅｔｒｙ（ＤＳＣ ２００ Ｆ３ Ｍａｉａ，ＮＥＴＺＳＣＨ，Ｇｅｒｍａｎｙ）．Ｔｈｅ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ ｗａｓ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ：１）ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅ ｗａｓ ｃｏｏｌｅｄ ｔＯ一２０℃ａｔ ａ ｒａｔｅ ｏｆ １０℃／ｍｉｎ ａｎｄ ｈｅｌｄ ｆｏｒ ３ ｍｉｎｕｔｅｓ：２）ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅ ｗａｓ ｈｅａｔｅｄ ｔｏ ８０℃ａｔ ｔｈｅ ｒａｔｅ ｏｆ １０℃／ｒａｉｎ ａｎｄ ｈｅｌｄ ｆｏｒ ３ ｍｉｎｕｔｅｓ：３）ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅ ｗａｓ ｃｏｏｌｅｄ ｔｏ ｒｏｏｍ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ａｔ ｔｈｅ ｒａｔｅ ｏｆ １０℃／ ａｉｒｎ．Ａｇｉｎｇ ｔｅｓｔ ｗａｓ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ ｂｙ ｐｌａｃｉｎｇ ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅ ａｔ ３７℃ｆｏｒ １０ ｄａｙｓ ａｎｄ ｔｈｅｒｅａｆｔｅｒ ｍｅａｓｕｒｉｎｇ ｉｔｓ ＥＩＤ５０．ＥＩＤ５。 ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｃｈｉｃｋ ｅｍｂｒｙｏ ａｎｄ Ｒｅｅｄ—Ｍｕｅｎｃｈ ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ． Ｔｈｅ ａｐｐｅａｒａｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ＦＦＤ ｓａｍｐｌｅ ｗａｓ ｌｉｋｅ ｓｐｏｎｇｅ，ｔｏｔａｌｌｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｆｌａｔ ｂｉｓｃｕｉｔ—ｌｉｋｅ ｓａｍｐｌｅ ｍａｄｅ ｂｙ ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ ｆｒｅｅｚｅ ｄｒｙｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｇｌａｓｓ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｆ ＦＦＤ ｖａｃｃｉｎｅ ｗａｓ ３３．９℃．ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ３Ｏ．２℃ｏｆ ｌｉｖｅ ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ ｖａｃｃｉｎｅ．ｂｕｔ １ｏｗｅｒ ｔｈａｎ ４０．１℃ｏｆ ｈｅａｔ—ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｖａｃｃｉｎｅ．Ｔｈｉｓ ｍｅａｎｓ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｈｅａｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ＦＦＤ ｖａｃｃｉｎｅ ｉｓ ｐｈｙｓｉｃａｌｌｙ ｂｅｔｔｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｌｉｖｅ ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ ｖａｃｃｉｎｅ．Ａｆｔｅｒ ａｇｉｎｇ ｔｅｓｔ ｔｈｅ ｔｉｔｅｒｓ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｆｏｒ ＦＦＤ ｖａｃｃｉｎｅ ｗａｓ １．１．ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ａ １ｉｔｔｌｅ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ０．８ ｆｏｒ ｈｅａｔ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｖａｃｃｉｎｅ．Ｔｈｅ ｌａｔｔｅｒ ｒｅｓｕｌｔ ｗａｓ ｉｎ ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｆｏｒｍｅｒ ｒｅｓｕｌｔ． Ｉｔ ｉｓ ｃｌｅａｒ ｔｈａｔ ＦＦＤ ｖａｃｃｉｎｅ ｈａｓ ｉｔｓ ｏｗｎ ｓｕｐｅｒｉｏｒｉｔｙ Ｏｉｌ ｈｅａｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｂｉｌｉｔｙ，ａｌｔｈｏｕｇｈ ｔｈｅ ｆｏｒｍｕｌａ ａｎｄ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｓｔｉｌｌ ｎｅｅｄ ｔｏ ｂｅ ｉｍｐｒｏｖｅｄ．Ｃｏｎｓｉｄｅｒｉｎｇ ｉｔｓ ｏｂｖｉｏｕｓ ｅｃｏｎｏｍｉｃ ｐｒｏｓｐｅｃｔ，ｉｔ ｉｓ ｗｏｒｔｈ ｔＯ ｃａｒｒｙ ｏｕｔ ｆｕｒｔｈｅｒ ｗｏｒｋ ｏｎ ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ＦＦＤ ｖａｃｃｉｎｅ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ ｆｏａｍ ｆｒｅｅｚｅ—ｄｒｙｉｎｇ；ｖａｃｃｉｎｅ；ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｓｃａｎｎｉｎｇ ｃａｌｏｒｉｍｅｔｒｙ；５０ ｅｇｇ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｄｏｓｅ（ＥＩＤ５０） 冷冻干燥法是获取干燥制品的一种方法，先通 能不仅关系到保存期限，还影响到保存、运输设备的 配置．针对耐热问题，发达国家在疫苗保护剂方面的 研究开展得较早，冻干活疫苗目前基本都使用耐热 型冻干保护剂，能让疫苗在２～８℃的储藏环境中保 质１２－－３６个月．国内疫苗生产企业目前常用的保护 过低温将物料冻结，然后在真空条件下提供热量使 冰升华，最后通过解吸干燥除去部分结合水，使产品 最终含水量达到要求．与其他干燥方法相比，采用冷 冻干燥法生产的产品具有保存期限长、复水性能好 等优点，因此，该方法被广泛应用于血液制品、疫苗、 抗生素、激素等药品以及贵重食品的生产上［１－２３．冷 冻干燥法的主要缺点是生产周期长、成本高．近年 来，为了缩短冷冻干燥法的生产周期、降低成本，国 外学者提出了泡沫冷冻干燥法．该方法在物料配方 中加入发泡剂，在冷冻前将物料发泡，再加以冷冻、 １次干燥和２次干燥．由于发泡后的物料比表面积 剂有牛奶＋蔗糖、明胶＋蔗糖，配方简单，但疫苗制 品的耐热性能较差，通常要求在一１５℃冰箱中保 存，在２～８℃环境中的保存期不超过６个月 ］．本 文以鸡新城疫活疫苗为例，尝试采用泡沫冷冻干燥 法生产具有良好耐热性能的疫苗，以期促进国内疫 苗生产工艺的进步与发展． 显著增大，传热和传质状况得到明显改善，使１次干 燥和２次干燥时间缩短，生产效率提高，成本降低． Ｖｅｈｒｉｎｇ和Ａｏ［３ 用泡沫冷冻干燥法保存流感病毒， １ 材料与方法 １．１ 材料 制得的样品剩余含水量为２．２ ，玻璃化转变温度 为４３℃，能够在３７℃高温下保存１２５ ｄ．Ｗｏｒｒａｌｌ＿ｌ４Ｊ 使用海藻糖作为保护剂，用泡沫冷冻干燥法保存病 低毒疫苗与耐热疫苗均购自南京天邦生物科技 有限公司，均为冷冻干燥制得的产品；低毒疫苗采用 普通保护剂，耐热疫苗采用耐热保护剂．其中，低毒 疫苗为鸡新城疫低毒力活疫苗（ＬａＳｏｔａ株），含鸡新 城疫病毒（ＬａＳｏｔａ株）至少ｌ ｘ １０ 鸡胚半数感染量 （５０ ｅｇｇ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｄｏｓｅ，ＥＩＤ５０）；耐热疫苗为鸡新 城疫耐热保护剂活疫苗（ＬａＳｏｔａ株），用鸡新城疫病 毒（ＬａＳｏｔａ株）感染鸡胚液，每羽份鸡新城疫病毒含 量≥１×１０ ＥＩＤ 毒和支原体，干燥样品的剩余含水量低于２％． Ｍｕｔｈｕｋｕｍａｒａｎ等ｎ＇ 研究了泡沫生成的稳定性，并 建立了物理模型预测干燥所需时间．Ｗｏｒｒａｌｌ等 还对牛瘟弱毒活疫苗和小反刍兽疫疫苗的泡沫冷 冻干燥保存及其疫苗的耐热性能进行了研究．但 目前国内还没有关于疫苗泡沫冷冻干燥的相关 报道． 泡沫冷冻干燥疫苗的制备：泡沫疫苗的配方包 含１Ｏ 海藻糖、５ 水解明胶、３ ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ一１０８、 疫苗是预防、控制传染病的重要手段，其耐热性 第３期 张绍志，等：疫苗的泡沫冷冻干燥研究 ２ ９／６精氨酸、２５ ｍｍｏｌ／Ｌ Ｋ。ＰＯ 缓冲液（ｐＨ ７．２）．取 １ ｍＬ样品溶液装在小瓶里，半盖上瓶塞，放置于实 验窒的冷冻干燥机搁板上，将搁板温度设定为１５ ℃，溶液先预冷１ ｈ，然后抽真空到５ Ｐａ，发泡开始， １ ｈ后搁板温度以０．７℃／ｍｉｎ升温至３１℃，在该温 度下持续干燥４８ ｈ，最后盖好瓶塞并密封． １．２样品热分析 ２．１泡沫冷冻干燥疫苗的外观形态 ２ 结果与分析 从图１可以看出：泡沫冷冻干燥疫苗呈海绵结 构．而用传统冷冻干燥工艺制备的低毒疫苗呈饼状， 外观平整均匀（图２）．二者在外观上有明显不同． ２．２泡沫冷冻干燥疫苗的玻璃化转变温度 样品热分析采用差式扫描量热仪（ＤＳＣ ２００ Ｆ３ Ｍａｉａ，德国Ｎｅｔｚｓｃｈ公司），使用前采用标准物质 Ｃ Ｈ Ｈｇ、Ｈ Ｏ、Ｉｎ和Ｓｎ对仪器进行温度和热焓 校正．试验时取１Ｏ～２０ ｍｇ药品置于铝盘，并迅速 放人ＤＳＣ测量腔中，参比盘采用空铝盘．吹扫气体 的输出压力调整为０．０５ ＭＰａ，流量为２０ ｍＬ／ｍｉｎ， 通过不同方法制备的疫苗的玻璃化转变温度见 表１．从中可以看出：泡沫疫苗的玻璃化转变温度为 保护气体采用高纯氮，输出压力调整为０．０５ ＭＰａ， 流量为６０ ｍＬ／ｍｉｎ．样品质量采用梅特勒一托利多仪 器（上海）有限公司的精密电子天平ＡＬｌ０４进行称 量，精度为０．１ ｍｇ．样品取样处理在充满氮气的有 机玻璃手套箱中进行． ＤＳＣ扫描程序设定：以１０℃／ｒａｉｎ的速率降温 到一２Ｏ℃，保持恒温３ ｒａｉｎ；再以１０℃／ｒａｉｎ的速率 升温到８０℃，保持恒温３ ｍｉｎ；最后以１Ｏ℃／ｒａｉｎ的 速率降到室温，结束程序． １．３样品ＥＩＤ５０测定 图１泡沫疫苗 Ｆｉｇ．１ Ｆｏａｍ ｆｒｅｅｚｅ—ｄｒｙｉｎｇ（ＦＦＤ）ｖａｃｃｉｎｅ 将待测新城疫尿囊液以１２ ０００ ｒ／ｒａｉｎ离心１Ｏ ｍｉｎ，用含有抗生素的灭菌生理盐水对上清液作 １Ｏ 、１Ｏ 、１０ 、１Ｏ 倍稀释，每个稀释度尿囊腔接种５ 枚１０日龄ＳＰＦ鸡胚，每胚０．１ ｍＬ，置于３７℃培养 箱内孵育，２４ ｈ内死亡的鸡胚弃去不计，间隔４ ｈ照 蛋１次，死胚随时取出，活胚于１２０ ｈ取出，无论死 胚或活胚均逐胚测定血凝（ＨＡ）效价，ＨＡ≥２ 判 为阳性感染，按Ｒｅｅｄ—Ｍｕｅｎｃｈ方法计算鸡胚半数感 染量（ＥＩＤ５。）［８３． 图２低毒疫苗 Ｆｉｇ．２ Ｌｉｖｅ ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ ｖａｃｃｉｎｅ 表１低毒、耐热和泡沫疫苗的玻璃化转变温度 Ｔａｂｌｅ １ Ｇｌａｓｓ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ ｏｆ ｌｉｖｅ—ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ，ｈｅａｔ—ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ａｎｄ ＦＦＤ ｖａｃｃｉｎｅｓ 浙江大学学报（农业与生命科学版） 第３ ９卷 ３３．９℃，高于低毒疫苗的玻璃化转变温度（３０．２ 冷冻干燥在疫苗的耐热性能上有其优越性． ２．３泡沫冷冻干燥疫苗的耐老化试验结果 ℃）；而耐热疫苗由于使用了成熟可靠的耐热保护 剂，其玻璃化转变温度（４０．１℃）比泡沫疫苗的高． 根据玻璃化转变的相关理论，相比低毒疫苗，泡沫疫 耐热疫苗和泡沫疫苗的耐老化试验下降滴度见 表２．泡沫疫苗的耐老化试验下降滴度为１．１，与耐 热疫苗的下降滴度０．８相比略差． 苗可以在更高的温度下保存更长的时间．说明泡沫 表２泡沫疫苗和耐热疫苗的耐老化试验下降滴度 Ｔａｂｌｅ ２ Ｄｒｏｐ ｉｎ ｔｉｔｅｒ ｏｆ ＦＦＤ ｖａｃｃｉｎｅ ａｎｄ ｈｅａｔ—ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｖａｃｃｉｎｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ａｇｉｎｇ ｔｅｓｔ ［２］刘嘉，刘汉清，冻干技术及其在中药冻干制剂中应用的研究 ３ 讨论 泡沫冷冻干燥是一种新型的干燥技术，具有省 时、节能的优点，本试验将其成功应用于实验室的鸡 新城疫活疫苗的生产中．实验室里的生产周期为５Ｏ 进展．中国医药技术经济与管理，２００７，１（５）：３４—４２． Ｌｉｕ Ｊ，Ｌｉｕ Ｈ Ｑ．Ｔｈｅ ｖａｃｕｕｍ ｆｒｅｅｚｅ－ｄｅｓｉｃｃａｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ｉｔｓ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｆｒｅｅｚｅ ｄｒｙｉｎｇ ｄｒｕｇｓ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ． Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ ａｎｄ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ， ２００７，１（５）：３４—４２．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｗｉｔｈ Ｅｎｇｌｉｓｈ ａｂｓｔｒａｃｔ） ｈ，与传统冷冻干燥所需的７２ ｈ相比有了明显的缩 短＿＿ｇ］．为了得到足够低的剩余含水量的干燥样品，本 试验将２次干燥过程予以了保守性延长，在进行工 艺优化后，生产周期预计还可以进一步缩短． 本试验应用的泡沫冷冻干燥法有别于Ｐｉｓａｌ ［３］ Ｖｅｈｒｉｎｇ Ｒ，Ａｏ Ｙ．Ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｏａｃｔｉｖｅ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｂｙ ｆｒｅｅｚｅ ｄｒｉｅｄ ｆｏａｍ．ＵＳ：ＷＯ／２００８／１４３７８２．２００８—１１—２７． ［２０１０一ｌ１—２５］． ［４］Ｗｏｒｒａｌｌ Ｅ Ｅ．Ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｖｉｒｕｓｅｓ ａｎｄ ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ．Ｂｒｉｔａｉｎ：ＷＯ ００／６６７１０．２０００—１１—０９． ［５］Ｍｕｔｈｕｋｕｍａｒａｎ Ａ，Ｒａｔｔｉ Ｃ，Ｒａｇｈａｖａｎ Ｖ Ｇ Ｓ．Ｆｏａｍ－ｍａｔ ｆｒｅｅｚｅ ｄｒｙｉｎｇ ｏｆ ｅｇｇ ｗｈｉｔｅ ａｎｄ ｍａｔｈｅｍａｔｉｃａｌ ｍｏｄｅｌｉｎｇ ｐａｒｔ Ｉ： 等＿ｇ 保存新城疫活疫苗所用的真空泡沫干燥法，后 者在干燥过程中溶液温度始终保持在０℃以上，水 分是通过溶液的蒸发而不是冰的升华去除的． ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｇｇ ｗｈｉｔｅ ｆｏａｍ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ．Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，２６（４）：５０８—５１２． Ｄｒｙｉｎｇ ［６］Ｗｏｒｒａｌｌ Ｅ Ｅ，Ｌｉｔａｍｏｉ Ｊ Ｋ，Ｓｅｃｋ Ｂ Ｍ，ｅｔ ａ１ Ｘｅｒｏｖａｃ：ａｎ ｕｌｔｒａ ｒａｐｉｄ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｖｅ ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ Ｒｉｎｄｅｒｐｅｓｔ ａｎｄ Ｐｅｓｔｅ ｄｅｓ Ｐｅｔｉｔｓ ｒｕｍｉｎａｎｔｓ ｖａｃｃｉｎｅｓ．Ｖａｃｃｉｎｅ．２０００．１９：８３４—８３９． 本试验制得的泡沫疫苗耐老化试验下降滴度比 耐热疫苗的下降滴度大，与Ｖｅｈｒｉｎｇ和Ａｏｌ３ 用泡沫 冷冻干燥流感病毒的效果相比仍有较大的差距．目 前，国内泡沫冷冻干燥技术的发展尚处于起步阶段， 与配方和工艺有关的研究还极少，本试验尝试应用 ［７］张道华，侯继波，何家惠，等．鸡新城疫活疫苗耐热保护剂研 究．中国家禽，２００６，２８（９）：１４—１５． Ｚｈａｎｇ Ｄ Ｈ，Ｈｏｕ Ｊ Ｂ，Ｈｅ】Ｈ，ｅｔａ１．Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅｒｍｏｓｔａｂｌｅ ｐｒｏｔｅｃｔａｎｔｓ ｏｆ ｌｉｖｅ Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｖａｃｃｉｎｅ Ｃｈｉｎａ Ｐｏｕｌｔｒｙ， ２００６，２８（９）：１４—１５．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｗｉｔｈ Ｅｎｇｌｉｓｈ ａｂｓｔｒａｃｔ） 该技术制得的泡沫疫苗已经比市面上常见的低毒疫 苗在耐热性能上有了明显的改善，今后的研究可以 考虑从配方及工艺两个方面予以优化，以便使该技 术能够尽快走向实用化． Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ： ［８］ 中华人民共和国农业部．中华人民共和国兽用生物制品规 程．北京：化学工业出版社，２０００：４４６ Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｐｅｏｐｌｅ’Ｓ Ｒｅｐｕｂｌｉｃ ｏｆ Ｃｈｉｎａ． Ｔｈｅ Ｓｔａｎｄａｒｄ ｆｏｒ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｏ＿，ｔｈｅ Ｐｅｏｐｌｅ’Ｓ Ｒｅｐｕｂｌｉｃ ｏｆ Ｃｈｉｎａ．Ｂｅｉｊｉｎｇ：Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２０００：４４６．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［１］ Ｍｕｔｈｕｋｕｍａｒａｎ Ａ，Ｒａｔｔｉ Ｃ，Ｒａｇｈａｖａｎ Ｖ Ｇ Ｓ．Ｆｏａｍ—ｍａｔ ｆｒｅｅｚｅ ｄｒｙｉｎｇ ｏｆ ｅｇｇ ｗｈｉｔｅ－－ｍａｔｈｅｍａｔｉｃａｌ ｍｏｄｅｌｉｎｇ ｐａｒｔⅡ： ｆｒｅｅｚｅ ｄｒｙｉｎｇ ａｎｄ ｍｏｄｅｌｉｎｇ．Ｄｒｙｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，２６ （４）：５ｌ３—５１８． ［９］Ｐｉｓａｌ Ｓ，Ｗａｗｄｅ Ｇ，Ｓａｌｖａｎｋａｒ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｖａｃｕｕｍ ｆｏａｍ ｄｒｙｉｎｇ ｆｏｒ ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＬａＳｏｔａ ｖｉｒｕｓ：ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｄｄｉｔｉｖｅｓ．ＡＡＰＳ ＰｈａｒｍＳｃｉＴｅｃｈ，２００６，７（３）：１—８．
