实用医学杂志２０１０年第２６卷第１３期 ・检验与临床・ 溶血对双抗原夹心法检测ＨＩＶ抗体的影响 张桂芳 摘要 目的：探讨溶血对双抗原夹心法检测ＨＩＶ抗体的影响。方法：制备ＨＩＶ抗体阴性非溶血和配对溶 血（Ｈｂ ２—７ ｇ／Ｌ）血清４８份。另制备ＨＩＶ抗体阴性非溶血和重度溶血（Ｈｂ ８０ ｇ／Ｌ）血清ｌ份、ＨＩＶ抗体阳性 非溶血和重度溶血（Ｈｂ １０８ ｇ／Ｌ）血清ｌ份，用ＨＩＶ抗体阴性血清对ＨＩＶ抗体阴性重度溶血血清、ＨＩＶ抗体 阳性非溶血和配对重度溶血血清进行倍比稀释，得到不同溶血程度的样品。测定ＨＩＶ抗体．检测溶血及不同 溶血程度对ＨＩＶ抗体的影响 结果：４８份ＨＩＶ抗体阴性非溶血和溶血血清比较，差异无统计学意义（ｆ＝０．０７８， Ｐ＝０．９３８）；对ＨＩＶ抗体阴性重度溶血倍比稀释血清的Ａ值和Ｈｂ浓度做相关性分析，两组间无相关性ｒ＝ 一０．３８２，Ｐ＝０．２２１）；对ＨＩＶ抗体阳性溶血、非溶血倍比稀释血清的Ａ值进行比较，差异无统计学意义（￡＝ ０．２３６，Ｐ＝０．８１７）。ＡＡ（溶血血清Ａ一非溶血血清Ａ）与Ｈｂ浓度作相关性分析．两组间无相关性ｒ＝０．１４９， Ｐ＝０．６４４）。结论：溶血对双抗原夹心法检测ＨＩＶ抗体无影响。但是如果试剂反应孔包被、封闭的质量差可能 引起Ｈｂ的非特异吸附而造成假阳性，故日常工作中要尽量避免样品溶血，严格按照全国艾滋病检测技术规 范操作 关键词ＨＩＶ抗体： 溶血： 双抗原夹心法 检测ＨＩＶ抗体是诊断ＡＩＤＳ和ＨＩＶ感染的有 效途径．由于ＥＬＩＳＡ灵敏度高、特异性强、操作简 ＜１为阴性。 １．３．２ ＨＩＶ抗体阴性非溶血和溶血稀释样品的制 Ｖ抗体阴性样品，分离非溶血血清，剩余 便、试剂稳定易保存等优点，是ＨＩＶ抗体筛查的常 备取ＨＩ用方法之一…，目前国内外主要使用第三代试剂 标本用冻融法分离溶血血清（Ｈｂ ８０ ｇ／Ｌ，为排除冻 （双抗原夹心法） 。日常工作中经常遇到溶血样 融的影响。分离的非溶血血清与溶血血清相同条件 品．溶血对许多检验项目都会产生不同程度的影 冻融）。用ＨＩＶ抗体阴性非溶血血清对ＨＩＶ抗体阴 ０２４），制 响。在ＥＬＩＳＡ试验中溶血对ＨＩＶ抗体的影响有不 性溶血血清作倍比稀释（原液、１：２、…１：１同的报道［３－４］。但溶血的严重程度与Ａ（Ａｂｓｏｑｂａｎｃｅ）值 备不同溶血程度的ＨＩＶ抗体阴性血清，检测非溶 呈怎样的关系报道较少，笔者就溶血及溶血不同 血血清和溶血稀释血清的ＨＩＶ抗体，测定Ａ值，同 程度对双抗原夹心法检测ＨＩＶ抗体的影响进行了 时测定稀释标本的Ｈｂ浓度。另取４８份ＨＩＶ抗体 阴性样品．分离非溶血血清，然后通过人为机械溶 分析。 １材料与方法 血分离溶血血清（Ｈｂ ２—７ ｇ／Ｌ），检测非溶血血清 Ｖ抗体，测定Ａ值。 １．１试剂ＨＩＶ抗体第三代（双抗原夹心法）诊断 和溶血血清的ＨＩ３．３ ＨＩＶ抗体阳性非溶血和溶血稀释样品的制 试剂盒、ＨＩＶ抗体质控血清购自北京万泰有限公司。 １．Ｖ抗体阴性标本，待血液凝固后去除血 １．２仪器ＭＵＬＴＩＳＫＡＮ ＭＫ３型酶标仪，赛默飞世 备取ＨＩＶ抗体强阳性灭活血清，充分混匀， 尔仪器有限公司；ＤＥＭ一３型自动洗板机，北京拓普 凝块，加人ＨＩ分析仪器有限公司：电热恒温水温箱，上海医疗器 制备ＨＩＶ抗体较强阳性标本，离心分离非溶血血 械厂：ＸＴ．１８００全自动血细胞分析仪，ｓｙｓｍｅｘ公司。 清．剩余标本用冻融法分离溶血血清（Ｈｂ １０８ ｇ／Ｌ， １．３方法 非溶血血清与溶血血清相同条件冻融）。再用同一 Ｖ抗体较强阳性非溶血和 １．３．１ ＨＩＶ抗体检测双抗原夹心法，操作按ＨＩＶ ＨＩＶ抗体阴性血清对ＨＩ抗体诊断试剂盒说明书进行，波长４５０ ｎｍ、参考波 溶血血清作倍比稀释（原液、１：２、…１：２ ０４８），进行 Ｖ抗体检测，测定Ａ值，同时测定各标本Ｈｂ浓 长６３０ ｎｍ读取吸光度值（Ａ）。以吸光度值／临界值 ＨＩ ［Ｓ／ＣＯ（Ｃｕｔ ｏｆｆ）］判断结果，Ｓ／ＣＯ≥１为阳性，Ｓ／ＣＯ 度。１．４统计学方法采用ＳＰＳＳ １４．０软件进行配对 资料ｔ检验，Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。对Ａ值 ｄｏｉ：１０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１ｏ０６—５７２５．２０１０．１３．０６６ 作者单位：０５６２００河北省邯郸市，冀中能源峰峰集团有限公 司总医院 和溶血程度进行相关分析，Ｐ＜０．０５为Ａ值与溶血 程度有相关性。 实用医学杂志２０１０年第２６卷第１３期 ２４３３ ２结果 高［５１。 ２．１溶血对ＨＩＶ抗体阴性样品的影响 同时检测 ＨＩＶ抗体阴性非溶血样品和不同程度溶血样品的 ＨＩＶ抗体，Ａ值随Ｈｂ浓度变化的结果见图１。对Ａ 值和Ｈｂ浓度做相关性分析。两组间无相关性（ｒ＝ ０．３８２，Ｐ＝０．２２１）。同时检测４８份ＨＩＶ抗体阴性 一通过实验发现，ＨＩＶ抗体阴性非溶血样品与溶 非溶血、溶血样品，两组Ａ值差异无统计学意义（ｔ ＝０．０７８，Ｐ＝０．９３８）。 血稀释样品的Ａ值差别较小（图１），对Ａ值和Ｈｂ 浓度进行相关性分析，ｒ＝～０．３８２，Ｐ＝０．２２１＞０．０５， 说明Ａ值与Ｈｂ浓度无相关性。４８份ＨＩＶ抗体阴 性非溶血与溶血样品的配对ｔ检验，Ｐ＝０．９３８＞ ０．０５，结果差异无统计学意义。以上实验说明溶血 对ＨＩＶ抗体阴性样品的检测无影响，Ａ值不会随着 Ｈｂ浓度的增加而增加或减低。在ＨＩＶ抗体阳性非 ０．Ｏ３８ Ｈｂ（ｇ，Ｌ） 图１ ＨＩＶ抗体阴性非溶血、溶血稀释样品的Ａ值变化 ２．２溶血对ＨＩＶ抗体阳性标本的影响 同时检测 ＨＩＶ抗体阳性非溶血、溶血倍比稀释标本的ＨＩＶ抗 体，Ａ值的变化见图２。两组Ａ值差异无统计学意 义（ｔ＝０．２３６，Ｐ＝０．８１７）。△Ａ（溶血血清Ａ一非溶 血血清Ａ）与Ｈｂ浓度作相关性分析，两组间无相关 性（ｒ＝０．１４９，Ｐ＝０．６４４）。 ３．５００ ３．０００ ２．５００ ２．０００ １．５００ １．Ｏ０ｏ ０．５００ Ｏ．Ｏｏ０ ０ ２０ ４０ ６０ ８０ １０ｏ １２０ Ｈｂ（ｅＪＬ） 图２ ＨＩＶ抗体阳性非溶血、溶血配对样品的Ａ值变化 ３讨论 溶血是由于各种原因造成红细胞破坏释放 Ｈｂ和细胞内容物，游离Ｈｂ具有过氧化物酶的作 用，与辣根过氧化物酶作用相似．可以催化底物 显色导致假阳性结果［ ］。有学者认为在ＥＬＩＳＡ实 验中红细胞溶血越严重，Ｈｂ浓度越高，Ａ值也越 溶血和溶血稀释样品的配对实验中，非溶血和溶血 样品稀释到１：８时，Ａ值几乎无变化（图２），这可 能因为酶标反应孔包被物的浓度是一个相对的定 值，ＨＩＶ抗体浓度超过包被抗原的结合浓度时，多 余的抗体不能结合上，因此ＨＩＶ抗体浓度与Ａ值 只是在一定范围内呈线性关系，当ＨＩＶ抗体达到 一定浓度时，Ａ值变化进入相对平台期。随着稀释 倍数的增加，Ａ值逐渐降低，非溶血与溶血样品的 Ａ值差别很小，配对 检验，Ｐ＝０．８１７＞０．０５，说明 两者Ａ值差别无统计学意义。对△Ａ（溶血血清Ａ 一非溶血血清Ａ）与Ｈｂ浓度作相关性分析，Ｐ＝ ０．６４４＞０．０５．两组问无相关性，即溶血严重程度对 ＨＩＶ抗体阳性样品的检测无影响。 溶血对ＥＬＩＳＡ的影响主要是溶血血清的游离 Ｈｂ非特异吸附在反应孑Ｌ上，催化底物显色使Ａ值 增高而出现假阳性结果。如果反应孔包被、封闭的 质量好，操作正规，洗涤彻底，则可能减少或排除非 特异吸附的干扰。因此应用ＥＬＩＳＡ进行测定，试剂 的质量、正规操作至关重要，本实验仅使用一个厂 家（北京万泰公司）试剂进行，没有发现溶血样品中 Ｈｂ非特异吸附的影响，即溶血不会引起Ａ值增高 而出现假阳性，与陆亭屹等［ ］报道相同。笔者认为， 虽然溶血样品对双抗原夹心法检测ＨＩＶ抗体结果 影响较小，但是如果试剂反应孔包被、封闭的质量 差可能引起Ｈｂ的非特异吸附而造成假阳性，因此 日常工作中遇到溶血标本应重新采取合格样本检 测，选择经临床质量评估敏感性和特异性高的试 剂ｒ８］，试验操作严格按照说明书进行，并严格遵守 全国艾滋病检测技术规范要求，以保证ＨＩＶ抗体 检测的准确性和重复性。 ４参考文献 ［１］ 中国疾病预防控制中心．全国艾滋病检测技术规范［Ｓ］． ２００９：６． Ｅ２１马晶，郭秀婵，曾毅．ＨＩＶ抗体检测技术研究进展［Ｊ］．病毒 学报．２００６．２２（２）：１５５—１５８． ［３］张利泉，杨杰．孟淑欣．溶血对ＥＬＩＳＡ方法检测ＨＩＶ抗体的 影响［Ｊ］．中国卫生检验杂志，２００８，１８（１ｏ）：２１６１—２１６２． ［４］ 殷勤．溶血对抗一ＨＩＶ测定结果的影响『Ｊ］．实用医技杂志． ２４３４ 实用医学杂志２０１０年第２６卷第ｌ３期 ２００４，１１（１０）：２１４２． ［７］陆亭屹，徐萍．ＨＩＶ抗体ＥＬＩＳＡ测定中影响因素探讨［Ｊ］．实 用医技杂志，２００８，１５（２６）：３５４２—３５４３． ［５］ 高丹，李丁．ＥＬＩＳＡ法检测ＨＩＶ抗体需注意的问题［Ｊ］．中国 卫生检验杂志，２００５，１５（１）：ｌ１５． ［８］刘文新，陈玉杰，安凤兰．ＨＩＶ抗体初筛检测质量影响因素的 ［６］李红叶．ＥＬＩＳＡ法检测ＨＩＶ抗体的注意事项［Ｊ］．兵团医学， ２００５，３（１）：５８—６０． 分析［Ｊ］．中国艾滋病性病，２００５，１１（３）：２１３，２１７； （收稿：２００９—１０—１５编辑：徐荣远） 双侧嗜铬细胞瘤合并室间隔缺损１例麻醉体会 患者男，２３岁，因“自幼发现心脏 杂音，感心悸、气短１年余”入院。患者 幼时因感冒到当地医院就诊，发现心脏 杂音，确诊为“先天性心脏病（具体不 详）”，未行治疗。近一年来感活动后，头 晕、头痛，视物模糊，偶感心悸，气短，无 明显胸闷及呼吸困难，不伴畏寒发热， 无咳嗽、胸痛，发病以来体重明显降低 并乏力，遂来我院就诊。入院后查体：心 率８０次／ｍｉｎ，血压１９０／１１６ ｍｍＨｇ，呼 吸２０次／ｒａｉｎ，体温３６．５℃。神清，口唇 无明显紫绀，颈静脉无怒张，气管居中。 双肺呼吸音清。心前区隆起，呈抬举性 搏动，心界向左扩大，心音有力，律齐， 胸骨左缘２、３、４肋间可闻及５级连续 性隆隆样杂音，向心尖传导，Ｐ２不亢， Ｐ２＞Ａ２，心功能Ⅱ级。双肺呼吸音清 晰，胸片未见实变影，肺血不多，符合室 间隔缺损的诊断。Ｂ超资料：（１）主动脉 增宽（窦部４．４ ｃｍ，升主动脉３．８ ａｍ）， 活动度尚可．主动脉瓣大小不一，左冠 瓣较小。肺动脉不宽。（２）左心扩大（ＬＡ ４．０ ｃｍ，ＬＶ ５．６ ｃｍ），右心稍大（ＲＡ ４．０ ａｍ，ＲＶ ３．７ ａｍ），右室壁厚１．０ ｃｍ，室上 嵴厚０．８ ａｍ，右室流出道内径１．３ ｃｍ。 右房内可见网线样回声。（３）二、三尖瓣 不厚。二尖瓣活动呈双峰曲线，前后叶 逆向运动。（４）室间隔与左室后壁厚度 分别为１．５、１．４ ａｍ。两者呈逆向运动， 活动幅度尚可。ＥＦ：５６％。（５）室间隔上 ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６—５７２５．２０１０．１３．０６７ 作者单位：４３４０２０湖北省荆州市，华 中科技太 同济医学院附属荆州医院麻 醉科 倪婉饶莹 部可见一约０．８ ａｍ连续中断．房间隔 未见明显连续中断。（６）ＣＤＦＩ：上述室 间隔连续中断处可见收缩期涡流信号， 峰速约５．９ ｍ／ｓ，右室流出道内血流速 增快达２．８ ｍ／ｓ，主动脉下可见轻度舒 张期返流信号，返流速２．６ ｍ／ｓ，二尖瓣 口左房侧可见轻微收缩期返流信号．肺 动脉瓣下可见轻微舒张期返流信号。考 虑：室间隔缺损（嵴下型）、考虑右流出 道狭窄，高血压性心脏病改变、右房内 希阿里氏网。实验室检查电解质在正常 范围内。血糖：７．１３ ｍｍｏｌ／Ｌ（偏高）。ＣＴ 示：双肾上腺占位性病变，考虑为嗜铬 细胞瘤可能大。实验室检查：尿１７一羟 类固酮增高、尿香草杏仁酸增高。诊断： （１）先天性心脏病、室间隔缺损；（２）双 侧嗜铬细胞瘤。患者入院后主要表现 为阵发性高血压，不发作时血压稳定 在１５５／９０ ｍｍＨｇ，发作时为１７０／１１０ ｍｍＨｇ。在经过２周的扩容降压准备后 在全麻加连硬下进行了双侧嗜铬细胞 瘤手术。手术中在插管后和探查双侧 肾上腺时血压陡升，推注了立其丁，切 除双侧肾上腺后血压用肾上腺素维持 到病房。现患者已痊愈出院。 讨论本例患者为少见的复杂病 例．成人同时患有室间隔缺损和双侧嗜 铬细胞瘤，综合上述情况，选择先进行 双侧嗜铬细胞瘤的手术较为安全。但要 考虑到心脏患者行非心脏手术的风险 性．而且又是双侧嗜铬细胞瘤的手术， 因此麻醉中应慎之又慎。嗜铬细胞瘤是 ～种并不多见的肾上腺肿瘤，双侧肾上 腺巨大嗜铬细胞瘤更为罕见。内源性儿 茶酚胺分泌过多是嗜铬细胞瘤的基本 病理生理特征。多以分泌去甲肾上腺素 为主，以阵发性高血压为特点。如果此 时进行心脏直视手术，势必引起血流动 力学的剧烈波动，严重者可以危及患者 的生命。对该患者笔者先选择进行了双 侧嗜铬细胞瘤的手术．而患者的室间隔 缺损病变已有２３年，具备了一定的心 功能代偿能力．允许实施限期手术。该 例患者的麻醉处理手术前选用 肾上 腺素受体阻断药并持续扩容在２周以 上．大大减小围麻醉期间的血流动力学 的剧烈波动。一切操作都以保证血流动 力学稳定为原则，麻醉前行桡动脉穿刺 持续监测血压，使气管插管时血压变化 更直观。操作前给予适量镇静药物；麻 醉诱导平稳，麻醉后在颈内静脉置入双 腔导管．保证有足够的静脉通道监测 ＣＶＰ、泵注给药、输血补液等。选用对交 感神经一肾上腺系统无兴奋作用的Ｎ：Ｏ 和地氟醚持续吸入维持麻醉，使麻醉过 程平稳、容易控制，术后恢复快。对于麻 醉中出现的高血压危象，应用 。肾上 腺素受体阻断药——酚妥拉明１—５ ｍｇ静注或０．０１％的溶液静滴控制血 压．在补足液体的同时，也可用强效血 管扩张药硝普钠控制血压，根据血压 高低随时调整微量注射泵，控制输液、 输血量和速度。并且及时处理干扰血 流动力学稳定的各种心律失常。手术 结束前．控制患者的麻醉深度和肌松， 使自主呼吸恢复完全在较深的麻醉状 态和足够的潮气量下拔管，减轻相应 的应激反应，手术后合理使用了ＰＣＡ。 患者治疗效果满意，择期再行心脏 手术。 （收稿：２００９—１０—３０编辑：徐荣远）
