。・・——１：６２。＿。—— ｃ｝ｌｉｎ Ｊ Ｌａｂ Ｄｉ聊， ，２ｏ１０，Ｖ０ｌ １４，Ｎｏ．２ 文章编号：１００７—４２８７（２０１０）０２—０１６２—０３ 嘌呤核苷酸补偿对海洛因依赖大鼠 嘌呤核苷酸代谢相关酶基因表达的影响 李昆 ｔ一，何海涛 ，李鸿梅 ，刘剑凯 ，洪敏 （１．吉林大学白求恩医学院生物化学教研室，吉林长春１３００２１；２．吉林大学护理学院） 摘要：目的探讨外源性补偿嘌呤核苷酸对海洛因依赖大鼠嘌呤核苷酸代谢酶的影响。方法将５０只雄性Ｗｉｓ． ｔａｒ大鼠随机分为对照组、海洛因组、海洛因＋ＡＭＰ＋ＧＭＰ组、海洛因＋ＡＭＰ组、海洛因＋ＧＭＰ组。采用ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ的 方法检测大鼠脑皮质中腺苷脱氨酶（ＡＤＡ）、黄嘌呤氧化酶（ｘ０）、次黄嘌呤一鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（ＨＧＰＲＴ）、腺瞟呤 磷酸核糖转移酶（ＡＰＲＴ）和腺苷激酶（ＡＫ）ｍＲＮＡ的表达水平。结果海洛因组ＡＤＡ、ＸＯ的ｍＲＮＡ比对照组明显升高 （Ｐ＜０．０５），而海洛因＋ＡＭＰ＋ＧＭＰ组、海洛因＋ＡＭＰ组、海洛因＋ＧＭＰ组与海洛因组相比明显降低（Ｐ＜０．０５）。海洛 因组ＨＧＰＲＴ、ＡＰＲＴ和ＡＫ的ｍＲＮＡ比对照组明显降低（Ｐ＜０．０５），而海洛因＋ＡＭＰ＋ＧＭＰ组、海洛因＋ＡＭＰ组、海洛因 ＋ＧＭＰ组与海洛因组相比有不同程度升高，以ＨＧＰＲＴ的升高程度尤为显著（Ｐ＜０．０５）。海洛因＋ＡＭＰ＋ＧＭＰ组、海洛 因＋ＡＭＰ组、海洛因＋ＧＭＰ组的各项指标差异无显著性。结论海洛因在大鼠基因水平上促进嘌呤核苷酸的分解代 谢，降低合成代谢，而补偿嘌呤核苷酸可以抑制或拮抗海洛因的上述作用。 关键词：嘌呤核苷酸；海洛因；腺苷脱氨酶；黄嘌呤氧化酶；次黄嘌呤～鸟嘌呤磷酸核糖转移酶；腺嘌呤磷酸核糖转 移酶；腺苷激酶 中图分类号：Ｒ７４９．６ 文献标识码：Ａ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｉ￣ｕｔ＇ｈｌｅ ｎｕｄｅｏｔｉｄｅｓ ｃｏｍｐｅｎｓａｔｉｏｎ ｏｎ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｅｌｌｚｙｍｅｓ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｐｌｌｒｍｅ ｎｕｄｅｏｔｉｄｅｓ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｉｎ ｈｅｒｏｉｎ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｒａｔ １１ Ｋｕｎ，ＨＥ Ｈａｉ－ｔａｏ，１１Ｈｏｎｇ－ｍｅｉ，ｅｔ ａ１．（Ｄｅｐｔ ｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｎｏｒｍａｎ Ｂｅｔｈｕｎｅ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｆＭｅｏｄｉｃｉｎｅ， ｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ １３００２１，Ｃｈｉｎａ） Ａ Ｕｎｉｖｅｒ－ ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｅｆｅｃｔ ｏｆ ｅｘｏｇｅｎｏｕｓ ｐｕｒｉｎｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ Ｏｉｌ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｅｎｚｙｍｅｓ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｐｕｒｉｎｅ ｎｕ・ ｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｉｎ ｈｅｒｏｉｎ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｒａｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ５０ ｍａｌｅ Ｗｉｓｔａｒ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，ｈｅｒｏｉｎ ａｄｍｉｎ－ ｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ，ｈｅｒｏｉｎ ｐｌｕｓＡＭＰａｎｄＧＭＰ ｇｒｏｕｐ，ｈｅｒｏｉｎ ｐｌｕｓＡＭＰ ｇｒｏｕｐａｎｄ ｈｅｒｏｉｎ ｐｌｕｓＧＭＰ ｇｒｏｕＰ．Ｒｅａｌ・ｔｉｍｅＰＣＲｗｅｒｅ ｕｓｅｄｔｏ ｅｘ－ ・ ● ａｍｉｎｅ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ａｍｏｕｎｔ ｏｆＡＤＡ，ＧＤＡ，Ｘ０，ＡＰＲＴ，：ＨＧＰＲＴ ａｎｄ ＡＫ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｍＲＮＡ ｏｆｔｈｅ ＡＤＡ ａｎｄ ＸＯ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｂｒａｉｎ ｔｉｓｓｕｅ ｗｅｒｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ｔｈｅ ｃ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５）ａｎｄ ｔｈｅ ｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｈｅ ＡＤＡ ａｔｎｄ ｘ０ ｇｅｎｅｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｈｅｒｏｉｎ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｒｅｖｅｒｓｅｄ ｂｙ ｐｕｒｉｎｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ．Ｔｈｅ ｍＲＮＡ ｏｆｔｈｅ ＡＫ，ＡＰＲＴ ａｎｄ ＨＧＰＲＴ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｈｅ ｔｂｒａｉｎ ｔｉｓｓｕｅ ｗｅｒｅ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５）ａｎｄ ｔｈｅ ｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｈｅ ｔＡＫ，ＡＰＲＴ ａｎｄ ＨＧＰＲＴ ｇｅｎｅｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｈｅｒｏｉｎ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｅｒｖｅｒｓｅｄ ｂｙ ｐｕｒｉｎｅ ｎｕｃｌｅｏｉｔｄｅｓ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏ￣ｕｓｉｏｎ ＰｕＴｉｎｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｃｏｍｐｅｎｓａｔｉｏｎ ｃｏｕｌｄ ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ ｔｈｅ ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｏｆ ｐｕｒｉｎｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｃａｔａｂｏｌｉｓｍ ａｎｄ ｔｈｅ ｄｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐｕｒｉｎｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ，．ａｎａｂｏｌｉｓｍ ｉｎ ｈｅｒｏｉｎ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｒａｔｓ． ．Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｐｕｒｉｎｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ；ｈｅｒｏｉｎ；ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ｄｅａｍｉｎａｓｅ；ｘａｎｌｈｉｎｅ ｏｘｉｄａｓｅ：ｈｙｐｏｘａｎｔｈｉｎｅ ｇｕａｎｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙｌ ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ； ａｄｅｎｉｎｅ ｐｈ０ｓｐｈｏｆｉｂｏｓｙｌ ｒｔａｌｌｉｆｆｅｒｄ，ｓｅ－，＂ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ 、 （Ｃｈｉｎ Ｊ ＬａｂＤ／ａｇｎ，２０１０，１４：０１６２） 已有研究表明，吗啡、海洛因等阿片类物质可引 用目前尚无报道。本研究旨在探讨补偿嘌呤核苷酸 对海洛因依赖大鼠嘌呤核苷酸代谢相关酶基因表达 的影响。 １材料与方法 起嘌呤核苷酸分解过度［ ， ，而合成代谢降低［ ， 。 可见，在长期使用阿片的过程中嘌呤核苷酸亏欠可 能是造成药物依赖的机制之一。外源性补偿核苷酸 对海洛因所致的嘌呤核苷酸代谢改变是否有改善作 １．１材料及设备正常雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠，体重１８０ ２００ ｇ，吉林大学医学实验动物中心提供（合格证 —基金项目：吉林大学重大重点项目发展启动基金资助项目 （２００６０２０３７），吉林省科技发展计划项目（２００８０４３５—２） ＊通讯作者 号ＳＣＸＫ２００６）。海洛因由吉林省公安厅提供，纯度 为９８％，用生理盐水配制后抽滤除菌。单磷酸腺苷 （ＡＭＰ）及单磷酸鸟苷（ＧＭＰ）为Ａｍｅｍｃｏ产品。Ｔｒｉｓｏｌ 中国实验诊断学２０１０年２月第１４卷第２期 一ｌ６３一 ＲＮＡ提取试剂盒（Ｇｉｂｅｏ公司）、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ ＲＴ 每１３两次腹腔注射核苷酸（ＡＭＰ与ＧＭＰ等摩尔混 Ｒｅａｇｅｎｔｓ Ｋｉｔ和ＳＹＢＲ ＰｒｉｍｅＳｅｒｉｐｔ ＲＴ－ＰＣＲ ｋｉｔ（ＴａＫａＲａ 合），每日次剂量均为７．５ ｍｇ・ｋｇ一体重。④海洛因 公司）、实时荧光定量ＰＣＲ仪（ＡＢＩ Ｐｒｉｓｍ ７０００型， ＋ＡＭＰ组：海洛因给药同第２组，并且每日两次腹 ＵＳＡ）。 腔注射ＡＭＰ，每日次剂量均为７．５ ｍｇ・ｋｇ 体重。⑤ １．２动物分组及处理５Ｏ只大鼠随机分为５组：① 海洛因＋ＧＭＰ组：海洛因给药同第２组，并且每１３ 对照组：每日两次腹腔注射生理盐水，注射体积及时 两次腹腔注射ＧＭＰ，每日次剂量均为７．５ ｍｇ・ｋｇ 体 间与海洛因组相同，第１０天处死。②海洛因组：建 重。各组大鼠于ｄ １０麻醉、处死后，迅速取大脑皮 立海洛因依赖大鼠模型，第１—９天每日两次腹腔注 质，立即放入液氮中２ ｈ，然后转入到一８６℃超低温 射海洛因，每日次剂量依次为０．５０、０．７５、１．２５、 冰箱内。 ２．００、３．００、４．２５、５．７５、５．７５、５．７５ ｎ１ｇ・ｋｇ 体重。③ １．３引设物计所有引物（见表１）均用引物设计软 海洛因＋ＡＭＰ＋ＧＭＰ组：海洛因给药同第２组，并且 件ＰｒｉｍｅｒＰｒｉｍｅｒ ５．０设计，由南京金斯特公司合成。 Ｔａｂｌｅ １ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｕｓｅｄ ａｓ ｐｒｉｍｅｒｓ １．４ ＲＮＡ抽提根据Ｔｒｉｓｏｌ ＲＮＡ提取试剂盒的操 ２结果 作步骤提取大脑皮质总ＲＮＡ，核酸测定仪测Ａ２６０／ 实时定量荧光ＰＣＲ检测显示，海洛因组ＡＤＡ、 Ａ２８０，要求在１．８—２．０之间。逆转录反应获得的 黄嘌呤氧化酶（ｘｏ）的ｍＲＮＡ比对照组明显升高，分 ｃＤＮＡ一２０℃保存。 别为对照组的３．３倍和２．７倍（Ｐ＜０．０５），而海洛因 １．５ ＳＹＢＲ荧光实时定量ＰＣＲ参照说明书设定 ＋ＡＭＰ＋ＧＭＰ组、海洛因＋ＡＭＰ组、海洛因＋ＧＭＰ ＰＣＲ程序；熔解曲线程序：９５℃１ ｍｉｎ，６５℃１５ Ｓ， 组与海洛因组相比明显降低（Ｐ＜０．０５）。海洛因组 ６５℃１０ Ｓ，从６５℃缓慢升温至９５℃，每升高０．５℃检 次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（ＨＧＰＲＴ）、腺嘌呤 测一次荧光信号值。反应结束仪器自动生成ｃｔ 磷酸核糖转移酶（ＡＰＲＴ）和腺苷激酶（ＡＫ）的ｍＲＮＡ （ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ ｃｙｃｌｅｓ）值及熔解曲线图。每个样本设３个 比对照组明显降低，分别为对照组的１８％，４３％和 重复管，同时设无模板阴性对照。 ３３％（Ｐ＜０．０５），而海洛因＋ＡＭＰ＋ＧＭＰ组、海洛因 １．６统计学分析各靶基因ｍＲＮＡ相对表达量采 ＋ＡＭＰ组、海洛因＋ＧＭＰ组与海洛因组相比有不同 用ｐｆａｆｆｌｃ５Ｊ法进行分析，将同一样本中目的基因的Ｃｔ 程度升高，以ＨＧＰＲＴ的升高程度尤为显著（Ｐ＜ 值与内参基因的ｃｔ值相减，所得出的ＡＣｔ为目的基 ０．０５）。海洛因＋ＡＭＰ＋ＧＭＰ组、海洛因＋ＡＭＰ组、 因相对于内参基因的表达强度，即ＡＣｔ＝目的基因 海洛因＋ＧＭＰ组的各项指标差异无显著性，见图１。 ｃｔ．内参基因ｃｔ。再使用２一△△ｎ方法将目的基因的表 ３讨论 达差异通过处理样本相对于未处理样本的倍数来表 本实验采用ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｉ荧光实时定量ＲＴ－ 示，一△△Ｃｔ＝一（ＡＣｔ实验组一ＡＣｔ对照组）。２一△△ｎ ＰＣＲ法检测ＡＤＡ，ＸＯ，ＡＫ，ＡＰＲＴ，ＨＧＰＲＴ ｍＲＮＡ的表 ＞１，目的基因表达上调，反之下调。数据用ｘ±ｓ 达，以探讨外源性补偿嘌呤核苷酸对海洛因所致的 表示，各组均数之间比较采用ＳＰＳＳ１１．０统计软件进 嘌呤核苷酸分解代谢增强、合成代谢减弱是否有改 行ｔ检验。 善作用。该方法在应用过程中需结合熔解曲线分析 ・—－——１６４・－—— Ｃｌａｉｎ Ｊ Ｌｏｂ Ｄｉａ鼬，Ｆｅｂ，２０１０，Ｖｏｌ １４，Ｎｏ．２ 墨４ ３ 蓬。 ●。 ． １ ２ ３ ＡＤＡ １ ¨ ４ ５ 一 一 薰 １ ２ ３ ４ ５ ＡＰＲＴ ～ １：Ｃｏｎｔｒｏｌ；２：Ｈｅｒｏｉｎ；３：Ｈｅｒｏｉｎ＋Ａ ＋ＧＮＰ；４：Ｈｅｒｏｉｎ＋ＡＭＰ；５：Ｈｅｒｏｉｎ＋ＧＮＰ； Ｒｅｌａｔｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｍＲＮＡ ａｒｅ ｎｏｎｎａｌｉ￣ｄ ａｇａｉｎｓｔ￣－ａｅｔｉｎ． 图１大鼠脑组织中ＡＰＡ、ＸＯ、ＡＫ、ＡＰＲＴ．ＨＧＰＲＴ相对表达水平 来确定ＰｅＲ产物的特异性＿６ Ｊ。本实验通过熔解曲 该作用可被同时补偿嘌呤核苷酸抑制。 线分析，确定ＰＣＲ反应特异性好，反应过程中荧光 海洛因＋ＡＭＰ组、海洛因＋ＧＭＰ组与海洛因＋ 信号可反映扩增产物含量的实时变化。结果分析采 ＡＭＰ＋ＧＭＰ组相比，各目的基因ｍＲＮＡ表达量均无 用相对定量Ｐｆａｆｆｌ法，首先通过构建目的基因与内参 显著性差异，这与体内嘌呤核苷酸的相互转变有关。 基因Ｂ．ａｃｔｉｎ的标准曲线对五种基因扩增效率进行 单纯补充ＡＭＰ或ＧＭＰ与同时补充ＡＭＰ和ＧＭＰ相 检测，在此基础上，用Ｊ３．ａｅｔｉｎ对各组ＲＮＡ作均一化 比，对海洛因依赖大鼠各目的基因ｍＲＮＡ表达量的 处理，计算各实验组相对于空白对照组的各目的基 影响无明显差异。 因ｍｔｌＮＡ表达的差异倍数。 综上所述，海洛因给药可以使大脑皮质ＡＤＡ及 腺嘌呤核苷脱氨酶（ＡＤＡ）和黄嘌呤氧化酶 ＸＯ ｍＲＮＡ表达增强，ＨＧＰＲＴ、ＡＰＲＴ和ＡＫ ｍＲＮＡ表 （ｘＯ）是瞟呤核苷酸分解代谢的关键酶，ＡＤＡ催化腺 达降低，提示海洛因在基因水平上促进嘌呤核苷酸 嘌呤核苷酸转化为次黄嘌呤核苷酸，进而分解成次 分解代谢，降低合成代谢，而补偿嘌呤核苷酸可抑制 黄嘌呤：；ｘ０催化次黄嘌呤转化为黄嘌呤，再催化黄 上述作用。嘌呤核苷酸因其所表现出来的对海洛因 嘌呤分解为尿酸 因此，ＡＤＡ和ＸＯ的活性可衡量 的拮抗作用有望成为治疗海洛因依赖的工具。 嘌呤核苷酸分解代谢状况。本实验中海洛因组脑皮 参考文献： 质中ＡＤＡ和ＸＯ ｍＲＮＡ水平显著高于对照组，海洛 ［１］Ｃｈａｎｇ ＬＩＵ，Ｊｉａｎ—ｋａｉ ＬＩＵ，Ｍｕ－ｊｉｅ ＫＡＮ，ｅｔ ａ１．Ｍｏｒｐｈｉｎｅ ｅｎｈｓｎｅｅｓ ｐｕｌｓｅ 因＋ＡＭＰ＋ＧＭＰ组ＡＤＡ和ＸＯ ｍＲＮＡ水平虽明显高 ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｃａｔａｂｏｌｉｓｍ ｉｎ ｖｉｖｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｔｍ［Ｊ］．Ａｅｔａ Ｐｈ￣ｌｏｇｉｃａ Ｓｉｒｔｉ＝ 于对照组，但比海洛因组有大幅度的降低，说明海洛 ｃａ，２００７，２８（８）：１１０５． ［２￣Ｙｕ－ｄａｎ Ｙａｎｇ，Ｊｉ－ｚｈｏｕ Ｚｈａｎｇ，Ｃｏｎｇ Ｓｕｎ，ｅｔ ａ１．Ｈｅｒｏｉｎ ａｆｆｅｃｔｓ ｐｕｒｉｎｅ ｎｕ－ 因促进皮质ＡＤＡ和ＸＯ ｍＲＮＡ的表达，而同时补偿 ｃｌｅｏｆｉｄｅｓ ｃａｔａｂｏ］ｉｓｍ ｉｎ ｒａｔｓ ｉｎ ｖｉｖ０［Ｊ］．Ｌｉｆｅ Ｓｅｉｅｎｃｅ８２０ｏ６，７８：１４１３． 嘌呤核苷酸可抑制海洛因的作用。 、 ［３］ｔｉｕ ＪＫ，Ｈｏｎｇ Ｍ，Ｚｈａｏ ＸＤ．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｍｏｒｐｈｉｎｅ ｏｎ ｅｘｐｒｅｓ￣ｏｎ ０ｆ ｇｅｎｅ ｏｆ 次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（ＨＧＰＲＴ）、腺 ｅｎｚｙｍｅｓ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｐｕｒｉｎｅ ｎｕｅｌｅｏｔｉｄｅ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｉｎ ｃ６ ｇｌｉ￣［Ｊ］．Ｃｈｉ，￣ｓｅ 嘌呤磷酸核糖转移酶（ＡＰＲＴ）和腺苷激酶（ＡＫ）是 Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ－Ｐｅｋｉｎｇ，２００３，８３（１ｙ，４６． 补救合成途径的关键酶。本实验中海洛因组脑皮质 Ｅ４ＪＨ￣，洪敏，刘畅，等．吗啡在基因水平对脑嘌呤核苷酸代 谢的影响［Ｊ＿．中国药物依赖性杂志，２００５，１４（３）：１８７． ＨＧＰＲＴ，ＡＰＲＴ，ＡＫ的ｍＲＮＡ的含量均比对照组明显 ［５］Ｈｌ棚ＭＷ．Ａ ｎｅｗ ｍａｔｈｅｍａｔｉｃａｌ ｍｏｄｅ］ｆｏｒ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｑｕａｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｉｎ ｒｅａｌ－ 降低，而海洛因＋ＡＭＰ＋ＧＭＰ组、海洛因＋ＡＭＰ组、 ｔｉｍｅ ＲＴ－Ｐｅ￣［Ｊ］．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ，２００１，２９（９）：ｅ４５． 海洛因＋ＧＭＰ组 ＨＧＰＲＴ，ＡＰＲＴ，ＡＫ的ｍｔｌＮＡ的含 ［６］何淑芳，杨林，黄维娟．应用ＳＹＢＲ荧光实时定量ｔｌＴ２ＰＣＲ法检测 量比海洛因组明显升高，与对照组水平相近，说明海 ＴＣＦ－ｐｌ诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞中ＰＡ Ｉ－１ ｍＲＮＡ表达［Ｊ］．中国 洛因抑制脑皮质ＨＧＰＲＴ，ＡＰＲＴ ＡＫ ｍＲＮＡ的表达， 药理学通报，２００９，２５（１）：６４． （收稿日期￣２００９—０４—１７）
