西北药学杂志２０１３年９月 第２８卷第５期 ４８３ ・药物分析・ 齐墩果酸５种含量测定方法的比较研究 邸金明，刘彬彬，赵婧，郭 琦 （西安交通大学药学院，西安７１００６１） ①酸碱滴定法；②可见分光光度法（Ｖｉｓ）：香草醛一冰醋酸一高氯酸溶 摘要：目的 比较５种分析方法测定齐墩果酸的含量。方法液为显色剂，在５４８ ｎｍ波长处测定；③紫外分光光度法（ＵＶ）：溶剂为甲醇，测定波长为２１５ ｎｍ；④薄层扫描测定法（ＴＬＣ）：展开 剂为氯仿一丙酮（４：１），以１００ ｇ・Ｌ－１硫酸乙醇溶液为显色剂，测定波长 ｓ为５２５ ｎｍ，参比波长ＡＲ为７００ ｎｍ；⑤高效液相色谱法 （ＨＰＬＣ）：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充荆，甲醇为流动相，检测波长为２２０ ｎｍ。结果 分别用不同的分析方法测定同一样 品，测量值彼此之间进行方差分析，Ｐ＜０．０５，即差异无统计学意义，结果基本一致。结论酸的含量，适用于齐墩果酸的质量控制。 关键词：齐墩果酸；含量测定；测定方法；比较 ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００４—２４０７．２０１３．０５．０１７ ５种分析方法均能有效地测定齐墩果 中图分类号：Ｒ９２７．２ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００４—２４０７（２０１３）０５—０４８３—０４ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｏｌｅａｎｏｌｉｃ ａｃｉｄ ＤＩ Ｊｉｎｍｉｎｇ，ＬＩＵ Ｂｉｎｂｉｎ，ＺＨＡＯ Ｊｉｎｇ，ＧＵＯ Ｑｉ （Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｘｉ ａｎ Ｊｉａｏｔｏｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ；，Ｘｉ ａｎ ７１００６１，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｃｏｍｐａｒｅ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｏｌｅａｎｏｌｉｃ ａｃｉｄ．Ｍｅｔｈｏｄｓ①Ａｃｉｄ—ｂａｓｅ ｔｉｔｒａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｍｅｔｈｏｄ； ②ｖｉｓｉｂｌｅ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ ａｎａｌｙｓｉｓ（Ｖｉｓ）：ｕｓｉｎｇ ｖａｎｉｌｌｉｎ—ｇｌａｃｉａｌ ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ－ｐｅｒｃｈｌｏｒｉｃ ａｃｉｄ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ａｓ ｔｈｅ ｃｏｌｏｒ ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ ｒｅａ— ｇｅｎｔ，ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ａｔ ｔｈｅ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｏｆ ５４８ ｎｍ；③ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ ａｎａｌｙｓｉｓ（ＵＶ）：ｕｓｉｎｇ ｍｅｔｈａｎｏｌ ａｓ ｔｈｅ ｓｏｌｖｅｎｔ ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ａｔ ｔｈｅ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｏｆ ２ １ ５ ｎｍ；④ＴＬＣ ｓｃａｎｎｉｎｇ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ：ｕｓｉｎｇ ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ－ａｃｅｔｏｎｅ（４：１）ａｓ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ ｓｏｌｖｅｎｔ。１００ ｇ・Ｌ一 ｅｔｈａｎｏｌ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｓｕｌｆｕｒｉｃ ａｃｉｄ ａｓ ｔｈｅ ｃｏｌｏｒ ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ ｒｅａｇｅｎｔ，５２５ ｎｍ ａｓ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ａｎｄ ７００ ｎｌＴｌ ａｓ ｔｈｅ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ；⑤ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰＬＣ）：ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ｏｎ ａ Ｃｌ８ ｃｏｌ— ｕｍｎ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｍｅｔｈａｎｏｌ ａｓ ｔｈｅ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ．Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ２２０ ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ａｎａｌｙｓｉｓ ｍｅｔｈｏｄｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｖａｌｕｅｓ ｏｆ ｆｉｖｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ ｗｅｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ ａｎｄ ｅｖａｌｕａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｖａｒｉａｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｆｉｖｅ ｍｅｔｈｏｄｓ ｃａｎ ｄｅｔｅｃｔ ｏｌｅａｎｏｌｉｃ ａｃｉｄ ｃｏｎｔｅｎｔ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ ａｎｄ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｏｌｅａｎｏｌｉｃ ａｃｉｄ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｏｌｅａｎｏｌｉｃ ａｃｉｄ；ｃｏｎｔｅｎｔ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ；ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ；ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ 齐墩果酸（ｏｌｅａｎｏｌｉｃ ａｃｉｄ，ＯＡ）为一种天然产物 司）；ＡＮＡＳＴＡＲ色谱工作站（中国奥泰科技有限公 化学成分，属于 香树脂醇型五环三萜类化合物，广 泛存在于自然界多种植物中。据不完全统计，齐墩果 酸存在于约６Ｏ个科１９０种植物中Ｉ】］，以游离或结合 成苷的形式存在。研究表明，齐墩果酸毒性很低，具 有抗病毒、抗炎、增强免疫和抑制免疫（免疫双向调节 作用）、抑制血小板凝集、降血脂、降糖、保肝、护肾、抗 艾滋病毒等多种生物活性［２］。目前卫生部颁标准中， 齐墩果酸的含量测定方法为酸碱滴定法ｌ＿３］。同时，各 文献报道的含量测定方法还有高效液相色谱法ｌ＿４ ］、 薄层色谱法 ＿６ｌ、紫外分光光度法 等。笔者分别用 司）；ＣＳ一９３０薄层色谱扫描仪（日本ＳＨＩＭＡＤＺＵ公 司）；紫外分光光度计（ＳＰ一２１０２ＵＶ型，上海光谱仪器 有限公司）；ＡＵＹ２２０电子分析天平（日本ＳＨＩＭＡＤ— ＺＵ公司）；ＫＱ３２００ＤＢＢ型数控超声波清洗器（昆山 禾创超声仪器有限公司）；ＲＣＨ一６４２Ａ４５电吹风（上 海万里风厂）；１０１－２ＡＢ电热恒温鼓风干燥箱（天津市 泰斯特仪器有限公司）；微量进样器（宁波市镇海玻璃 仪器厂）；Ｐ一０１层析缸（上海信谊仪器厂）。 １．２试药 齐墩果酸对照品（中国药品生物制品检 酸碱滴定法（标准法）、可见分光光度法（Ｖｉｓ）、紫外分 光光度法（ＵＶ）、薄层色谱法（ＴＬＣ）和高效液相色谱 法（ＨＰＬＣ）对齐墩果酸含量进行考察，同时对测定结 果进行了比较。 １仪器与试药 １．１仪器ＬＣ一１０Ａ高效液相色谱仪（日本岛津公 定所，供含量测定用，１１０７０９—２００５０５）；齐墩果酸原料 药（陕西森弗生物技术有限公司，批号ＱＤＧＳｏ９０４１７， ＱＤＧＳＯ９０４１８）；冰醋酸、高氯酸、硫酸、乙醇、甲醇、氢 氧化钾等均为分析纯；硅胶Ｇ（青岛海洋化工有限公 司）。 ２ 方法 ２．１ 可见分光光度法 ２．１．１测定波长的选择 取齐墩果酸对照品适量， 基金项目：国家级大学生创新性实验计划项目（Ｎｏ． ０９１０６９８４８）；西安交通大学本科生开放实验项目 作者简介：邸金明，男，２００８级本科生 通信作者：郭琦，女，副教授 精密称定，用甲醇溶解，制成一定质量浓度的齐墩果 酸标准溶液；精密移取齐墩果酸标准溶液０．６０ ｍＬ 于具塞试管中，挥干甲醇，加入５０ ｇ・Ｌ 的香草醛一冰 ｈｔｔｐ：／／ＸＢＹＺ．ｃｂｐｔ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ ４８４ 西北药学杂志２０１３年９月 第２８卷第５期 醋酸溶液０．２０ ｍＬ、高氯酸０．８０ ｍＬ，摇匀，置于７Ｏ。Ｃ水 浴中１５ ｍｉｎ，冷至室温，加入冰醋酸４．Ｏ０ ｍＬ，摇匀。以 比波长 ＝７００ ｍ；点样前将硅胶Ｇ薄层板于１０５℃活 化１ ｈ。 不加齐墩果酸标准溶液与上述同法操作制备的溶液为 空白，在紫外分光光度计上，于４００￣８００ ｎｍ波长范围内 扫描。结果表明，齐墩果酸在５４８ ｎｌＴｌ波长处有最大吸 收，因此选定５４８ ｎｍ为测定波长。 ２．１．２线性范围考察分别吸取齐墩果酸标准溶液 （１２１．９ ｍｇ・Ｌ ）０．２０，０．４０，０．６０，０．８０和１．００ ２．３．２薄层展开方法用微量进样器点样品于薄层 板上，点样基线距底边２．０ ａｍ，点样间距离为１．５ ｃｍ， 将硅胶Ｇ薄板置于薄层色谱层析缸中，饱和３０ ｒａｉｎ后 进行上行展开，至其溶剂前沿距点样线１０ ｃｍ左右，取 出薄板，晾干，对薄层板均匀喷洒显色剂并加热直至斑 点显色清晰，立即在薄层板上覆盖同样大小的洁净玻 璃板，用医用胶带固定，进行薄层扫描。 ２．３．３测定波长的选择 同一薄层板上分别点齐墩 果酸对照品溶液和样品溶液，依法展开，显色（见图１）。 分别对上述斑点在３７０～７００ ｎｍ波长范围内进行扫 描，齐墩果酸对照品和样品吸收光谱图一致。结果显 示，齐墩果酸在５２５ ｎｍ波长处有最大吸收；在７００ ｎｍ 处吸收峰低且平缓。故选择５２５ Ｄ．ｍ为测定波长， ７００ ｎｍ为参比波长。 ｍＬ，置于具塞试管中，按２．１．１方法处理，同时做空 白实验，在５４８ ｎｍ波长处测定吸光度值。以齐墩果 酸的质量浓度（Ｃ，ｍｇ・Ｌ ）为横坐标、吸光度值（Ａ） 为纵坐标，进行线性回归，回归方程：Ａ一０．０３９ ８Ｃ＋ ０．００６ １，ｒ一０．９９９ ０。结果表明，齐墩果酸质量浓度 在４．８７６￣２４．３８ ｍｇ・Ｌ 范围内与吸光度值呈现良 好的线性关系。 ２．１．３含量测定取本品适量，精密称定，用甲醇溶 解，制成质量浓度约为１００ ｍｇ・Ｌ 的溶液，摇匀。 精密移取该溶液一定量，置于具塞试管中，按２．１．２ 项下处理；同时做空白实验，在５４８ ｎｍ波长处测定 吸光度值，计算即得。 ２．２ 紫外分光光度法 ２．２．１ 测定波长的选择 精密称取齐墩果酸对照品 适量，加甲醇溶解，制成质量浓度为２．０３２ ｇ・Ｌ 的 齐墩果酸储备液；精密吸取齐墩果酸储备液０．５０ ｍＬ，置于１Ｏ ｍＬ量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀， 制成质量浓度为１０１．６ ｍｇ・Ｌ 的溶液，以甲醇为空 白，于２００～４００ ｎｍ波长范围内扫描。结果表明，齐 墩果酸在２０７ ｎｍ波长处有最大吸收，但因甲醇在此 波长也有吸收，为了消除溶剂对测定的影响，故选 ２１５ ｎｍ为检测波长。 图１ 齐墩果酸薄层色谱图 １，３，６．齐墩果酸原料药；２，４．齐墩果酸对照品；５．空白溶剂 Ｆｉｇ．１ ＴＬＣ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ ｏｆ ｔｈｅ ｏｌｅａｎｏｌｉｃ ａｃｉｄ １，３，６．ｏｌｅａｎｏｌｉｃ ａｃｉｄ ｓａｍｐｌｅ；２，４．ｏｌｅａｎｏｌｉｃ ａｃｉｄ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｕｂ— ｓｔａｎｃｅ；５．ｂｌａｎｋ ｓｏｌｖｅｎｔ ２．３．４线性范围考察精密称取齐墩果酸对照品适 ２．２．２ 线性范围考察 精密量取齐墩果酸储备液 ０．２０，０．３５，０．５０，０．６５和０．８０ ｍＬ，分别置于１Ｏ ｍＬ 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度为 ４Ｏ．６４，７１．１２，１０１．６，１３２．１和１６２．６ ｍｇ・Ｌ 的标 量，加适量甲醇后超声３０ ｒａｉｎ，加甲醇制成每１ ｍＬ 含齐墩果酸１ ｍｇ的对照品溶液。用微量进样器精 密吸取该对照品溶液１．０，３．０，５．０，８．０和１０．０“Ｌ， 分别点于同一块硅胶Ｇ薄层板上，按上述色谱条件 展开，取出，晾干，显色。进行薄层扫描测定，以点样 量Ｘ（ ｇ）为横坐标、测得的齐墩果酸峰面积的积分 值ｙ为纵坐标，进行线性回归，求得回归方程：Ｙ一 ２８３．４８Ｘ４－８８９．８９，ｒ一０．９９９ ８。结果表明，齐墩果 酸在１．０～１０．０ ｐ．ｇ之间，峰面积的积分值与点样量 呈良好的线性关系。 ２．３．５含量测定取本品适量，精密称定，用甲醇溶 解，制成齐墩果酸质量浓度约为１ ｇ・Ｌ 的样品溶 液，摇匀；精密吸取该样品溶液６ Ｌ、齐墩果酸对照 品溶液４和８ Ｌ，分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，依 法展开，显色，扫描测定峰面积，用外标两点法计算 即得。 准系列溶液。以甲醇为空白，于２１５ ｎｍ波长处测定 吸光度值Ａ。以质量浓度Ｃ（ｍｇ・Ｌ ）对Ａ进行线 性回归，得回归方程为：Ａ一０．００４ ９Ｃ４－０．００４ １，ｒ一 ０．９９９ ２。结果表明，齐墩果酸质量浓度在４Ｏ．６４～ １６２．６ ｍｇ・Ｌ 范围内，吸光度值与相应的质量浓度 呈良好的线性关系。 ２．２．３含量测定取本品适量，精密称定，用甲醇溶 解，制成质量浓度约为１００ ｍｇ・Ｌ 的溶液，摇匀，在 ２１５ ｎｍ波长处测定吸光度值，计算即得。 ２．３薄层色谱法 ２．３．１色谱条件展开剂为氯仿一丙酮（４：１）；显色剂 为１００ ｇ・Ｌ 硫酸乙醇溶液；测定波长 一５２５ ｎｍ，参 ｈｔｔｐ：／／ＸＢＹＺ．ｃｂｐｔ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ 西北药学杂志２０１３年９月 第２８卷第５期 ４８５ ２．４高效液相色谱法 至刻度，摇匀，制成质量浓度分别为１０．０，５０．０，１００．０， ２．４．１ 色谱条件 液相色谱泵ＬＣ－１０ＡＴ，检测器 １５０．０和２００．０ ｍｇ・Ｌ 的齐墩果酸标准系列溶液。 ＳＰＤ－１０Ａ（ＳＨＩＭＡＤＺＵ），工作站ＬＣ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ，甲醇 以４ ０００ ｒ・ｒａｉｎ 离心１０ ｍｉｎ，按所选的色谱条件各进 为流动相，流速０．８ ｍＬ・ｍｉｎ～，色谱柱为ＯＤＳ柱 样１０ Ｌ，以峰面积ｙ为纵坐标，齐墩果酸质量浓度Ｃ （４．６ ｍｉｌｌ×１５０ ｍｍ，５ ｕｒｎ），检测波长２２０ ｎｍ，进样 （ｍｇ・Ｌ ）为横坐标，进行回归计算，得回归方程：ｙ 量１０ Ｌ，齐墩果酸的保留时间约为３．６ ｍｉｎ（图２）， 一１ ３５６．９Ｃ一１ ６７４．９，ｒ一０．９９９ ９。结果表明，齐墩果 数据处理为外标法峰面积定量。 酸质量浓度在１０．０￣２００．０ ｍｇ・Ｌ 范围内与峰面积 线性关系良好。 ２．４．３含量测定取本品约１２．５ ｒｎｇ，精密称定，置 于２５ ｍＬ量瓶中，用适量甲醇振摇（或超声）使之溶 解，用甲醇定容至刻度，摇匀；精密量取１ ｒｎＬ，置于５ ｍＬ量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶 ０ ２ ５ ５ ０ ７ ５ ０ ２ ５ ５ ０ ７ ５ ｔ／ａｒｉｎ ｔ／ａｒｉｎ 液。另取齐墩果酸对照品适量，精密称定，同法制成 Ａ Ｂ 图２溶剂（Ａ）和齐墩果酸对照品（Ｂ）的ＨＰＬＣ色谱图 每１ ｍＬ中约含齐墩果酸１００ ｇ的溶液，作为对照品 １．齐墩果酸 溶液。分别量取供试品溶液和对照品溶液１Ｏ Ｌ，注 Ｆｉｇ．２ ＨＰＬＣ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ ｏｆ ｓｏｌｖｅｎｔ（Ａ）ａｎｄ ｔｈｅ ｏｌｅａｎｏｌｉｃ 入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算峰面积即 ａｃｉｄ ｓｔａｎｄａｒｄ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ（Ｂ） 得。 １．ｏｌｅａｎｏｌｉｃ ａｃｉｄ ３结果与讨论 ２．４．２ 线性范围考察 精密称取齐墩果酸对照品 ①不同方法测定结果见表１。 １２．５０ ｍｇ，置于２５ ｍＬ量瓶中，用甲醇溶解并稀释至 ②精密度实验用适当质量浓度的标准系列溶 刻度，摇匀，即得质量浓度为０．５ ｇ・Ｌ 的齐墩果酸 液作测试溶液，Ｖｉｓ和ＵＶ法用吸光度、ＴＬＣ法用斑 标准储备液。分别吸取该标准储备液０．１０，０．５０， 点面积的积分值、ＨＰＬＣ法用峰面积的积分值为指 １．Ｏ０，１．５Ｏ和２．Ｏ０ ｍＬ，置于５ ｍＬ量瓶中，加甲醇稀释 标，进行精密度考察，结果见表２。 表１ 不同方法测定齐墩果酸含量的结果 Ｔａｂ．１ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｆｒｏｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ａｓｓａｙ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｏｌｅａｎｏｌｉｃ ａｃｉｄ ｃｏｎｔｅｎｔ ③加样回收率实验 取已知含量的齐墩果酸原 为，这５种分析方法测定齐墩果酸含量的平均值之间 料药（Ｎｏ．ＱＤＧＳ０９０４１７）适量，精密称定，分别按高、 无显著性差异，５种分析方法均可用于齐墩果酸含量 中、低质量浓度精密加入齐墩果酸对照品溶液一定 的测定。 量，按其方法含量测定项下操作，依法测定，计算回收 ⑤采用５种分析方法对齐墩果酸原料药进行了 率，结果见表２。 测定，结果齐墩果酸在甲醇溶剂中的最大吸收波长为 表２精密度和回收率测定结果 ２０７ ｎｒｎ，溶剂吸收有干扰，故选用２１５ ｎｍ作ＵＶ测 Ｔａｂ．２ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｃｏｖｅｒｙ 定的波长，２２０ ｎｍ作ＨＰＬＣ测定波长，较好地解决 了这一问题。ＴＬＣ法实验中曾用过的展开剂有氯 仿一甲醇（２０：１）、苯一丙酮（１：１）、环己烷一氯仿一乙酸 乙酯一甲醇（２Ｏ：５：４：２）、甲苯一乙酸乙酯一冰醋酸 （８：２’０．１）、氯仿一丙酮（４：１）和环己烷一丙酮一乙酸 乙酯一甲酸（５：２：１：０．５），经实验筛选，在５ ｇ・Ｌ ＣＭＣ－Ｎａ的硅胶Ｇ薄层板上，以氯仿一丙酮（４：１）作 ④统计分析 将部颁标准法、可见分光光度法、 为实验所用展开剂分离效果最佳，齐墩果酸斑点呈紫 紫外分光光度法、薄层色谱法和高效液相色谱法测得 红色，Ｒｆ值适中。同时也发现，薄板显色后放置易变 的结果，采用ＳＰＳＳ ｌ１．０统计软件进行分析，结果Ｆ 色，使测定的斑点面积值衰减，后经采用显色后立即 比的值为０．３６３，Ｓｉｇ．一ｏ．８３２￣０．０５，由此可以认 用洁净玻璃板盖住、密封后再测定的方法，减少了测 ｈｔｔｐ：／／ＸＢＹＺ．ｃｂｐｔ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ ４８６ 西北药学杂志２０１３年９月 第２８卷第５期 定误差。 ［３］ 国家药典委员会．卫生部药品标准：第三册［Ｍ］．１９９４： ｌ７． 实验结果表明，可见分光光度法、紫外分光光度 法、薄层色谱法和高效液相色谱法测定结果与部颁标 准法均无显著差异，均可用于齐墩果酸的含量测定， ［４］石心红，郭江宁，翟静华．ＨＰＬＣ法测定女贞子中齐墩 果酸、熊果酸的含量ＥＪ］．海峡药学，２００５，１７（４）：４１～４３． 在实际工作中应根据具体情况进行选择。 参考文献： ［１］严华，王宝栗．对《中国药典》中收载齐墩果酸、熊果酸 ［５］都述虎，饶金华，耿武松．薄层扫描法测定木瓜中齐墩 果酸的含量［Ｊ］．中草药，２００３，３４（１）：３５—３７． ［６］王忠壮，陈琰，宋洪杰，等．太白梅木中齐墩果酸的含量 药品质量标准的商榷［Ｊ］．中国药品标准，２００９，１０（２）： ８３—８５． 测定［Ｊ］．第二军医大学学报，２０００，２１（５）：４７３—４７５． ［７］邓世星，孙志勇，周卿，等．紫外光谱法测定齐墩果酸含 量［Ｊ］．遵义医学院学报，２００３，２６（６）：５５６—５５７． （收稿日期：２０１３－０３－１０） ［２］王德仁．齐墩果酸研究新进展ＥＪ］．天津药学，２００３，１５ （３）：５６—５８． ＲＰ－ＨＰＬＣ法同时测定金钱草和广金钱草中绿原酸、槲皮素和山柰酚的含量 张雯丽 ，孙冬晓。，董立华 （１．解放军第２５１医院药剂科，张家口０７５０００；２．河北医科大学药学院药物分析教研室，石家庄０５００１７） 摘要：目的 建立同时测定金钱草和广金钱草中绿原酸、槲皮素和山柰酚含量的Ｒｐ－ＨＰＬＣ方法。方法 色谱柱为Ｄｉｋｍａ Ｄｉａ— ｍｏｎｓｉ［ Ｃ１Ｂ柱（２５０ ｍｍ×４．６ ｍｍ，５“ｍ）；流动相为甲醇一４ ｍＬ・Ｌ 甲酸，梯度洗脱；流速为１．０ ｍＬ・ｍｉｎ～；检测波长３６０ ｎｍ。 结果绿原酸、槲皮素和山柰酚的线性范围分别为４２．Ｏ８～８４．１６ ｎｇ（ｒ＝０．９９９ ８），１９．１３～３８２．６８ ｎｇ（ｒ一０．９９９ ５）和１６．９６～ ３３９．２０ ｎｇ（ｒ一０．９９９ ５），平均加样回收率分别为９９．９１ ，９７．９２ 和９９．３１ ，方法精密度ＲＳＤ分别为１．６ ，１．４ 和１．６ （ 一６）。结论该方法快速、简便、准确度高、重复性好、专属性强，可用于金钱草和广金钱草的质量控制。 关键词：反相高效液相色谱法；金钱草；广金钱草；绿原酸；槲皮素；山柰酚 ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００４—２４０７．２０１３．０５．０１８ 中图分类号：Ｒ２８４ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００４—２４０７（２０１３）０５—０４８６—０３ Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ ａｃｉｄ，ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ ａｎｄ ｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ ｉｎ Ｈｅｒｂａ ｌｙｓｉｍａｃｈｉａｅ ａｎｄ ｄｅｓｍｏｄｉｕｍ ｓｔｙｒａｃｉｆｏｌｉｕｍ ｂｙ ＲＰ－ＨＰＬＣ ＺＨＡＮＧ Ｗｅｎｌｉ ，ＳＵＮ Ｄｏｎｇｘｉａｏ２，ＤＯＮＧ Ｌｉ ｈｕａ２（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｎｏ．２５１ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ ＰＬＡ，ＺｈａｎＮｉａｋｏｕ ０７５０００，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｐａｒｍａｃｙ，Ｈｅｂｅｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｉｊｉａｚｈｕａｎｇ ０５００１７，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｉｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ ａｃｉｄ，ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ ａｎｄ ｋａｅｍｐｆｅｒｏｌｉｎ Ｈｅｒｂａ Ｚｙｓｉｍａｃｈｉａｅ ａｎｄ ｄｅｓｍｏｄｉ— ｕｍ ｓｔｙｒａｃｉｆｏｌｉｕｍ，ａｎ ＲＰ～ＨＰＬＣ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｏｎ ａ Ｃ】８（２５０ ｍｍ×４．６ ｍｍ， ５￡上ｍ）ｃｏｌｕｍｎ ｗｉｔｈ ａ ｇｒａｄｉｅｎｔ ｅｌｕｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ ｏｆ ｍｅｔｈａｎｏｌ ａｎｄ ４ ｍＬ・Ｌ ｆｏｒｍｉｃ ａｃｉｄ ａｔ ｔｈｅ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｏｆ １．０ ｍＬ・ｍｉｎ－。．Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅ ｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ｓｅｔ ａｔ ３６０ ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｌｉｎｅａｒ ｒａｎｇｅｓ ｏｆ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ ａｃｉｄ．ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ ａｎｄ ｋａｅｍｐｆｅｒ— ｏｌ ｗｅｒｅ ４２．０８－８４．１６ ｎｇ（ｒ一０．９９９ ８），１９．１３—３８２．６８ ｎｇ（ｒ一０．９９９ ５）ａｎｄ １６．９６—３３９．２０ ｎｇ（ｒ—Ｏ．９９９ ５），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ａｖ— ｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ ｗｅｒｅ ９９．９１ ，９７．９２ ａｎｄ ９９．３１ ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ｄｅｖｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｗｅｒｅ １．６％，１．４ ａｎｄ １．６ （ 一６），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｒａｐｉｄ，ｓｉｍｐｌｅ，ａｎｄ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ａｃｃｕｒａｃｙ，ｇｏｏｄ ｒｅ— ｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙ，ｓｔｒｏｎｇ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ，ａｎｄ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｈｅｒｂａ ｌｙｓｉｍａｃｈｉａｅ ａｎｄ Ｄｅｓｍｏｄｉｕｍ ｓｔｙｒａｃｉｆｏｌｉｕｍ ｑｕａｌｉｔｙ ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ＲＰ—ＨＰＬＣ；Ｈｅｒｂａ ｌｙｓｉｍａｃｈｉａｅ；Ｄｅｓｍｏｄｉｕｍ ｓｔｙｒａｃｉｆｏｌｉｕｍ；ｅｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ ａｃｉｄ；ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ；ｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ 金钱草为报春花科植物过路黄Ｌｙｓｉｍａｃｈｉａ 的药材收载，临床上虽可区别应用，但市场上经常混 淆，文献中主要从药材来源、植物形态、性状鉴别、药 理作用来区分两者ｌ４］。为了规范用药，更好地发挥各 ｃｈｒｉｓｔｉｎａｅ Ｈａｎｃｅ的新鲜或干燥全草，主产于江苏、广 东、四川、广西。此外，浙江、湖南、福建等地亦产；广 金钱草为豆科植物广金钱（Ｄｅｓｍｏｄｉｕｍ ｓｔｙｒａｃｉｆｏｌｉ一 “ｍ Ｒａｃｉｆ Ｏｌｉｕｍ（Ｏｓｂ．）Ｍｅｒｒ）的干燥地上部分，主 自的疗效，能够区分并且很好地控制其质量，本文采 用反相高效液相色谱法（ＲＰ—ＨＰＬＣ）对金钱草和广金 钱草中的绿原酸、槲皮素、山柰酚的含量同时进行了 测定，为控制金钱草与广金钱草的质量提供依据。 １仪器与试药 产于广西。金钱草＿ｌ 含有酚性成分、黄酮类、苷类、鞣 质、挥发油、氨基酸、胆碱、甾醇、氯化钾、内酯类等成 分；广金钱草［２ 主要含有黄酮、生物碱、酚类、鞣质、多 糖等成分，还含有挥发性成分、皂苷、有机酸等。据文 １．１仪器Ａｇｌｉｅｎｔ １２００ ｓｅｒｉｅｓ高效液相色谱仪，工 献报道 ，金钱草、广金钱草都具排石的功效，但还是 各有侧重点：金钱草多用于胆结石，广金钱草多用于 膀胱结石。在２０１０年版《中国药典》一部中作为不同 作站为Ｈｐｃｈｅｍ；ＢＰ２１１Ｄ型分析天平（北京赛多利斯 仪器有限公司）；ＴＤＬ一５台式离心机（北京雷勃尔离 心机有限公司）；ＫＱ一１００Ａ型超声波提取器（昆山市 ｈｔｔｐ：／／ＸＢＹＺ．ｃｂｐｔ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ
