脑出血患者外周血TLR4、TNF-α、IFN-γ水平与预后的关系

·论著·

脑出血患者外周血TLR4、TNF-α、IFN-γ水平与预后的关系

贾丽娟，李，鱼丽萍

咸阳市第一人民医院神经内科，陕西咸阳712000

【摘要】目的

探究脑出血患者外周血中Toll样受体4(TLR4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)水

回顾性分析2016年2月至2018年2月间咸阳市第一人民医院收治的113例脑出血患者的

平与预后的关系。方法

临床资料，患者出院后随访3个月，根据患者的生存情况分为生存组82例、死亡组31例，比较两组患者入院及出院时的外周血TLR4、TNF-α、IFN-γ水平，并采用Logistics回归分析其与患者预后的关系。结果两组患者入院时的TLR4、TNF-α、IFN-γ水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)；两组患者出院时的TLR4、TNF-α、IFN-γ水平与入院时比较，差异均具有统计学意义(P<0.05)，其中死亡组患者出院时的TLR4、TNF-α、IFN-γ水平分别为(27.43±14.53)μg/L、(19.80±2.)ng/L、(366.33±18.77)pg/mL，明显高于生存组患者的(13.61±5.83)μg/L、(11.37±3.85)ng/L、(185.65±14.82)pg/mL，差异均具有统计学意义(P<0.05)；以患者出院时的TLR4、TNF-α、IFN-γ水平作为自变量，以患者预后情况(死亡及生存)为因变量，经Logistics回归分析结果显示，TLR4、TNF-α、IFN-γ水平为脑出血患者预后的危险因素(P<0.05)。结论

脑出血患者外周血TLR4、TNF-α、IFN-γ水平均与其预后有关，且TLR4、TNF-α、IFN-γ水

平为危险因素，故临床中可将脑出血患者的TLR4、TNF-α、IFN-γ水平变化作为评估患者预后的预测指标。

【关键词】脑出血；Toll样受体4；肿瘤坏死因子-α；γ干扰素；预后【中图分类号】R743.34

【文献标识码】A

【文章编号】1003—6350（2019）20—2601—03

RelationshipbetweenthelevelsofTLR4,TNF-αandIFN-γinperipheralbloodandprognosisinpatientswithcerebralhemorrhage.JIALi-juan,LIWen-qiang,YULi-ping.InternalMedicine-Neurology,theFirstPeople'sHospitalofXianyangCity,Xianyang712000,Shaanxi,CHINA

【Abstract】Objective

ToexploretherelationshipbetweenToll-likereceptor4(TLR4),tumornecrosisfac-Theclini-tor-alpha(TNF-α),interferongamma(IFN-γ)andprognosisinpatientswithcerebralhemorrhage.Methods

caldataof113patientswithcerebralhemorrhageadmittedtotheFirstPeople'sHospitalofXianyangCityfromFebruary2016toFebruary2018wereretrospectivelyanalyzed.Thepatientswerefollowedupfor3monthsafterdischarge,andtheyweredividedintosurvivalgroup(82cases)anddeathgroup(31cases).TheperipheralbloodTLR4,TNF-α,andIFN-γlevelsofthetwogroupswerecomparedatadmissionanddischarge.Meanwhile,logisticregressionwasusedtoanalyzetherelationshipbetweenprognosisandprognosis.Results

Therewerenosignificantdifferencesinthelevels

ofTLR4,TNF-α,andIFN-γbetweenthetwogroupsatadmission(P>0.05).ThelevelsofTLR4,TNF-α,andIFN-γatthetimeofdischargeinthetwogroupsshowedstatisticallysignificantdifferenceswiththelevelsatadmission(P<0.05).TheTLR4,TNF-α,andIFN-γlevelsinthedeathgroupwere(27.43±14.53)μg/L,(19.80±2.)ng/L,and(366.33±18.77)pg/mL,respectively,whichweresignificantlyhigherthan(13.61±5.83)μg/L,(11.37±3.85)ng/L,and(185.65±14.82)pg/mLinthesurvivalgroup(P<0.05).TakingTLR4,TNF-α,IFN-γlevelsatdischargeasindependentvariablesandpatients'prognosis(deathandsurvival)asdependentvariable,logisticregressionanalysisshowedthatTLR4,TNF-α,andIFN-γlevelsweretheindependentriskfactorsforprognosisinpatientswithcerebralhemorrhage(P<0.05).Conclusion

ThelevelsofTLR4,TNF-α,IFN-γinperipheralbloodofpatientswithcerebralhemorrhagearerelatedto

theirprognosis,andtheyaretheindependentriskfactors.Therefore,thechangesofTLR4,TNF-α,andIFN-γlevelsinpatientswithcerebralhemorrhagecanbeusedaspredictiveindicatorsofprognosis.

【Keywords】Cerebralhemorrhage;Toll-likereceptor4(TLR4);Tumornecrosisfactor-alpha(TNF-α);Interfer-ongamma(IFN-γ);Prognosis

脑出血(cerebralhemorrhage)是一类非创伤性颅内

血管破裂出血导致的脑血管疾病，其发病率为脑卒中的20%~30%，急性死亡率为30%~40%[1]。其发病机制主要为脑血管病变，即长期吸烟、老化的血管、高血压、高血糖、高血脂等引起的脑血管病变[2]。脑出血患者常因情绪刺激、用力过猛导致急性发作，其早期死

通讯作者：李，E-mail：xibeibei0614@163.com

亡率极高，存活者也多存在不同程度的语言、认知、运

动障碍等后遗症[3]。故早期了解患者的病情对患者的预后具有重大意义。Toll样受体4(TLR4)是一类膜蛋白，其在诱导机体产生炎性反应中起重要作用；肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是一类炎性因子，其可作为炎性反应的重要评估指标；γ干扰素(IFN-γ)是唯一的Ⅱ型

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海南医学2019年10月第30卷第20期

HainanMedJ,Oct.2019,Vol.30,No.20干扰素，其具有抗病毒、抗肿瘤和免疫的作用[4]。近年来研究证明，炎性因子在脑出血患者病程以及预后中均扮演着重要角色[5]。基于此，本研究对我院近年来收治的脑出血患者外周血的TLR4、TNF-α、1.4统计学方法应用SPSS22.0软件进行数据

统计分析，计数资料组间比较采用χ2检验，计量资料符合正态分布，以均数±标准差(-x±s)表示，组间比较采用样本t检验，组内前后比较采用配对样本t检验，IFN-γ水平进行检测，并分析其与患者预后的关系，现将结果报道如下：

1资料与方法

1.1一般资料回顾性分析2016年2月至2018年2月间咸阳市第一人民医院收治的113例脑出血患者的临床资料，患者出院后随访3个月，根据患者的生存情况分为生存组82例和死亡组31例。生存组患者中男性42例，女性40例；年龄37~74岁，平均(56.17±2.38)岁；发病至入院时间0.5~6h，入院时格拉斯哥昏迷评分(GCS)平均(8.45±3.49)分。死亡组患者中男性16例，女性15例；年龄36~75岁，平均(55.±2.43)岁；发病至入院时间1~6.5h，入院时GCS评分平均(8.67±3.14)分。所有患者入院后均已行手术急救，其中微创血肿清除术67例，脑室外引流术23例，同时行两种手术23例。两组患者的性别、年龄、发病至入院时间、入院时GCS评分等一般资料比较差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。纳入标准：根据《中华医学会

第四届全国脑血管病学术会议》[6]

及颅脑CT扫描确诊为脑出血；无手术禁忌。排除标准：合并心、肝、肾疾病；合并代谢性疾病；合并感染性疾病；外伤性脑出血；脑癌。

1.2检测方法所有患者入院时、出院时分别抽取外周静脉血，检测血清中TLR4、TNF-α、IFN-γ水平。(1)TLR4：抽取5mL外周静脉血，置入乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管中，3000r/min，离心15min，分离血清，-20℃冷藏待检。向所得血清样本中加入5mL藻红蛋白(PE)标记的抗人TLR4，摇匀，常温避光静置20min，再加入500mL红细胞裂解液，离心5min去红色上清液，加入1mL磷酸盐缓冲液(PBS)，悬沉，离心弃上清液，最后加入500mLPBS，重新悬沉。流式细胞仪检测血清中TLR4水平。(2)TNF-α：抽取3mL外周静脉血，加入EDTA-K2抗凝试管中，并在4℃下，1500r/min，离心处理20min，得血清，-70℃保存待检；采取ELISA法检测血清中TNF-α水平，试剂盒由武汉博士德公司提供。(3)IFN-γ：抽取3mL外周静脉血，肝素抗凝，加入人淋巴细胞分离液(达科为生物工程公司提供)，离心处理，得单个核细胞，再加入RPMI10(含10%胎牛血清)(均由美国Gibco公司提供)稀释成1×106mL，接种至6孔培养板，采取ELISA法检测血清中IFN-γ水平，试剂盒由美国R&D公司提供。

1.3观察指标所有患者随访至出院后3个月，以患者死亡为终止。比较生存组和死亡组患者入院及出院时的外周血TLR4、TNF-α、IFN-γ水平。

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采用Logistics回归分析脑出血患者预后的相关因素，以P<0.05为差异具有统计学意义。

2结果

2.1两组患者不同时间的外周血TLR4、TNF-α、IFN-γ水平比较两组患者入院时的TLR4、TNF-α、IFN-γ水平比较差异无统计学意义(P>0.05)；两组患者出院时的TLR4、TNF-α、IFN-γ水平与入院时比较差异均具有统计学意义(P<0.05)，死亡组患者出院时的TLR4、TNF-α、IFN-γ水平均较生存组患者高，组间比较差异均具有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1两组患者不同时间的外周血TLR4、TNF-α、IFN-γ水平比较(-x±s)组别例数时间TLR4(μg/L)TNF-α(ng/L)IFN-γ(pg/mL)生存组

82

入院时19.21±7.97a16.51±2.55a180.26±15.76a出院时13.61±5.83b11.37±3.85b185.65±14.82bt值5.13510.0792.256P值

<0.01<0.01<0.05死亡组

31

入院时19.43±7.9315.95±2.87179.90±15.44出院时27.43±14.5319.80±2.

366.33±18.77t值2.6915.49742.708P值

<0.01

<0.01

<0.01

注：入院时，两组患者比较，aP>0.05；出院时，两组患者比较，bP<0.05。

2.2两组患者TLR4、TNF-α、IFN-γ水平与预后的关系以患者出院时的TLR4、TNF-α、IFN-γ水平作为自变量，以患者预后情况(死亡及生存)为因变量，纳入Logistics回归分析模型。结果表明，TLR4、TNF-α、IFN-γ水平为脑出血患者预后的危险因素(P<0.05)，见表2。

表2Logistics回归分析结果

影响因素BS.E.

Wald

自由度显著性Exp(B)95%EXP(B)

下限上限

TLR40.0830.0414.05810.0440.9200.8490.998TNF-α0.9190.21817.71

0.0002.5071.6353.843IFN-γ

0.0200.0078.044

1

0.005

1.020

1.0061.035

3讨论

脑出血是发病率极高的心脑血管疾病，患者常表现出神经功能的继发性损伤，自身免疫及炎性反应会加重脑神经损伤[7]。脑出血患者的恢复情况受神经及血管功能的影响，且伴随明显病理变化，因此患者的神经、血管功能损伤状态的变化有助于判断病情，且可作为患者预后的评估标准[8-9]。

TLR4是最早发现的Toll样受体，其主要在星形胶质、小胶质细胞中表达，小胶质细胞是参与炎性反应的主要效应因子。研究表明，TLR4与神经功能损伤及脑出血量有关，其诱导的炎性因子在脑出血病程中

·HainanMedJ,Oct.2019,Vol.30,No.20其重要作用，故可将其视为脑出血患者预后的评价指标之一[10]。谢敏等[11]研究中提到，在脑出血小鼠模型中，去除TLR4基因的小鼠脑组织水肿程度较正常小鼠大幅降低，神经功能损伤程度也更轻，炎性因子如TNF-α、IFN-γ水平均与其预后有关，且TLR4、TNF-α、IFN-γ水平均为危险因素，故临床中可将脑出血患者的TLR4、TNF-α、IFN-γ水平变化作为评估患者预后的指标。

NF-KB、IL-6等也低表达。由此可知，外周血中的TLR4是致使脑出血患者继发性神经损伤的关键，故TLR4的信号通路为临床治疗脑出血提供新的靶点。

TNF-α作为重要的免疫应答和炎性反应调节因子，其在脑出血中的作用机制为：(1)刺激血管内皮细胞、中性粒细胞，分泌黏附分子，使炎性细胞转移至脑神经组织中，并诱导中性粒细胞产生过量的弹性蛋白酶及活性氧，直接损伤神经及血管内皮细胞，促使脑组织进一步水肿，并加剧神经细胞的凋亡；(2)致使血管活性物质分泌紊乱，并释放多种细胞因子，如血管性假血友病因子、凝血因子Ⅷ、血小板激活因子等，造成凝血功能障碍，引起继发性出血及血栓，加剧脑出血程度；(3)促进释放一氧化氮(NO)及兴奋性氨基酸(EAA)等神经毒物质[12]。

有研究显示，Th1/Th2类T淋巴细胞亚群参与脑出血炎性反应的，其中Th1类细胞的效应因子如TNF-α、IL-2、IFN-γ等，主要调节细胞免疫过程，而Th2类细胞的效应因子如IL-4、IL-5、IL-6等主要调节体液免疫过程，正常机体内Th1/Th2类T淋巴细胞亚群比例会随不同的机体状态相应改变，以确保机体维持免疫动态平衡。肖勇等[13]研究中发现脑出血患者外周血中的IFN-γ水平明显高于正常人水平，提示IFN-γ分泌水平参与了脑出血患者的神经损伤过程。

本研究结果显示，出院时，死亡组患者的TLR4、TNF-α、IFN-γ水平均高于生存组患者水平，且Logistics回归分析结果也显示，TLR4、TNF-α、IFN-γ水平均为脑出血患者预后的危险因素，提示脑出血患者的TLR4、TNF-α、IFN-γ水平可作为预测患者长期预后效果的指标。

综上所述，脑出血患者外周血TLR4、TNF-α、

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(收稿日期：2019-04-25)

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