第４８卷第７期 ２０１７年７月 东北农业大学学报 ４８（７）：１－９ Ｊｕｌｙ ２０１７ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｏｒｔｈｅａｓｔ Ａ ｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ 网络出版时间２０１７—７—１２ １１：１９：２７ ［ＵＲＬ］ｈｔｔｐ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｅｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／２３．１３９１．Ｓ．２０１７０７１２．１１１９．００４．ｈｔｍｌ 不同抗寒性小麦品种分蘖节低温抗氧化效应分析 李卓夫，宋永超，陈 露，王晓楠，付连双，刘 鑫 （东北农业大学农学院，哈尔滨１５００３０） 摘要：冷冻逆境中清除活性氧（ＲＯＳ）对小麦抗寒性具有重要作用。文章采用３个抗寒性不同小麦品种（东农 冬麦１号、济麦２２和中国春），通过人工冷冻和田间越冬试验，分析不同冷冻温度下分蘖节中抗氧化物及Ｈｚ０ 、 ＭＤＡ变化，结果表明，随着温度下降，分蘖节Ｈ：Ｏ 含量持续上升，抗寒性强小麦品种Ｈ：０：含量较低；在＜一１０ ｏＣ 之前ＭＤＡ含量快速上升，表现应激反应，降低至较低水平，深度冷冻时含量上升，抗寒性强品种ＭＤＡ含量低于 不抗寒品种；分蘖节中ＰＯＤ酶活性和ＧＳＨ含量在较高水平持续时间长，抗寒品种高于不抗寒品种；ＳＯＤ和ＣＡＴ 酶活性均快速上升后持续降低，ＣＡＴ酶活性品种间差异显著（Ｐ＜０．０５）；在ＡＰＸ酶活性与ＡＳＡ含量上，品种间差异 在田间试验中保持至１２月１４日。Ｈ ０：含量持续上升与ＣＡＴ和ＳＯＤ酶活性下降有关。各抗氧化物质均可防止脂质 过氧化，利于增强小麦抗寒性。小麦抗氧化物质遗传差异可作为培育强抗寒冬小麦品种选择依据。 关键词：小麦品种；抗寒性；抗氧化物质；Ｈ：０ ；持续冷冻 中图分类号：￥５１２．１ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００５—９３６９（２０１７）０７—０００１—０９ 李卓夫，宋永超。陈露，等．不同抗寒性小麦品种分蘖节低温抗氧化效应分析［Ｊ】．东北农业大学学报。２０１７，４８（７）：１－９． Ｌｉ Ｚｈｕｏ￣，Ｓｏｎｇ Ｙｏｎｇｃｈａｏ，Ｃｈｅｎ Ｌｕ，ｅｔ ａＩ．Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ａｎｔｉ—ｏｘｉｄａｎｔ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｃｒｏｗｎｓ ｉｎ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｆｒｅｅｚｉｎｇ ｔｏｌｅｒａｎｔ ｗｈｅａｔ ｃｕｌｔｉ— ｖａｒｓ ｕｎｄｅｒ ｌｏｗ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｏ￣ｈｅａｓｔ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ。２０１ ７，４８（７）：１－９．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｗｉｔｈ Ｅｎｇｌｉｓｈ ａｂｓｔｒａｃｔ） Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ａｎｔｉ－ｏｘｉｄａｎｔ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｃｒｏｗｎｓ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｆｒｅｅｚｉｎｇ ｔｏｌｅｒａｎｔ ｗｈｅａｔ ｃｕｌｔｉｖａｒｓ ｕｎｄｅｒ ｌｏｗ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ／ｕ Ｚｈｕｏｆｕ，ＳＯＮＧ Ｙｏｎｇｃｈａｏ， ＣＨＥＮ Ｌｕ，ＷＡＮＧ Ｘｉａｏｎａｎ，ＦＵ Ｌｉａｎｓｈｕａｎｇ，ＬＩＵ Ｘｉｎ（Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｎｏｒｔｈｅａｓｔ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｒｂｉｎ １ ５００３０，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＲＯＳ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ｐｌａｙｅｄ ａ ｓｉｇｎｉｉｆａｃｎｔ ｒｏｌｅ ｉｎ ｗｈｅａｔ ｆｒｅｅｚｉｎｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｕｎｄｅｒ ｆｒｅｅｚｉｎｇ ｓｔｒｅｓｓ． Ｐｒｅｖｉｏｕｓ ｓｔｕｄｉｅｓ ｆｏｃｕｓｅｄ ｍｕｃｈ ｏｎ ｔｈｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ＲＯＳ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ａｇｅｎｔｓ，ａｎｄ ｆｅｗ ｒｅｓｅａｒｃｈｅｓ ｒｅｐｏｓｅｄ ｏｎ． Ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ，ｗｅ ａｐｐｌｉｅｄ ａｒｔｉｉｆｃｉａｌ ｃｏｌｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｉｎ ｔｈｅ ｅｘｐｅｄｍｅｎｔ ａｎｄ ｎａｔｕｒａｌ ｏｖｅｒｗｉｎｔｅｄｎｇ ｔｅｒａｔｍｅｎｔ ｉｎ ｔｈｅ ｉｆｅｌｄ ｔｏ ａｓｓａｙ ｔｈｅ ｖａｄａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｎｆｉｏｘｉｄａｎｔｓ，Ｈ２０２ ａｎｄ ＭＤＡ ａｍｏｎｇ ｔｈｒｅｅ ｗｈｅａｔ Ｖａ ｒｉｅｔｉｅｓ（Ｄｏｎｇｎｏｎｇ－ ｄｏｎｇｍａｉ ｌ，Ｊｉｍａｉ２２ ａｎｄ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｓｐｎｎｇ）ｕｎｄｅｒ ｆｒｅｅｚｉｎｇ ｓｔｒｅｓｓ．Ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｄｅｃｒｅａｓｅ，ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ０ｆ Ｈ２Ｏ２ ｉｎ ｔｈｅ ｔｉｌｌｅｒｉｎｇ ｎｏｄｅ ｓｈｏｗｅｄ ａ ｓｔｅａｄｙ ｒｉｓｉｎｇ ｔｒｅｎｄ。ａｎｄ ｔｈｅ ｓｔｒｏｎｇ ｃｏｌｄ ｈａｚｉｎｅｓｓ ｃｕｌｔｉｖａｒ ｈａｄ ｌｏｗｅｒ Ｈ２０２ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｔｏ ｃｏｌｄ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｃｕｌｔｉｖａｒ．ＭＤＡ ｈａｄ ａ ｑｕｉｃｋ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｂｙ ｃｏｌｄ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｕｐｏｎ－１ ０。Ｃ， ｍａｎｉｆｅｓｔｅｄ ａｓ ａ ｓｔｒｅｓｓ ａｎｄ ｔｈｅｎ ｄｅｓｅｎｄｉｎｇ ｔｏ ａ ｌｏｗｅｒ ｌｅｖｅｌ，ａｎｄ ｓｔｒｏｎｇ ｃｏｌｄ ｈａｒｄｉｎｅｓｓ ｃｕｌｔｉｖａｒ ｓｈｏｗｅｄ ａ ｌｏｗｅｒ ｃｏｎｔｅｎｔ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｔｏ ｃｏｌｄ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｃｕｌｔｉｖａｒ ｗｈｅｎ ｔｈｅ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｃｏｎｔｉｎｕａｌｌｙ ｆｅｌ１．ＰＯＤ ｅｎｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ａｎｄ ＧＳＨ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｔｈｅ ｃｒｏｗｎ ｓｈｏｗｅｄ ａ ｈｉｇｈｅｒ ｌｅｖｅＩｉｎ ｓｔｒｏｎｇ ｃｏｌｄ ｈａｒｄｉｎｅｓｓ ｃｕｌｔｉｖａｒ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｉｎ 收稿日期：２０１７—０４—１４ 基金项目：黑龙江省博士后科研启动基金项目（ＬＢＨ—Ｑ１４ｏ２６）；东北农业大学学科团队项目 作者简介：李卓夫（１９５７一），男，教授，博士，博士生导师，研究方向为小麦遗传育种，Ｅ—ｍａｒｌ：ｚｌｆｉｃｎ＠１６３．ＣＯｎｒ 东北农业大学学报 第４８卷 ｃｏｌｄ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｃｕｌｔｉｖａｒ．Ｔｈｅ ｅｎｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ Ｓ０Ｄ ａｎｄ ＣＡＴ ｈａｄ ａ ｑｕｉｃｋ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｔｈｅｎ ａ ｄｅｃｒｅａｓｅ ｔｒｅｎｄ。 ａｎｄ ｓｈｏｗｅｄ ｏｂｖｉｏｕｓ ｄｉｆｅｒｅｎｃｅｓ ａｍｏｎｇ ｗｈｅａｔ ｖａｒｉｅｔｉｅｓ（Ｐ＜０．０５）．ＡＰＸ ｅｎｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ａｎｄ ＡＳＡ ｃｏｎｔｅｎｔ ｓｈｏｗｅｄ ａ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｆｌｕｃｔｕａｔｉｏｎ ａｍｏｎｇ ｗｈｅａｔ ｖａｒｉｅｔｉｅｓ ｕｎｔｉＩ Ｄｅｃ．１ ４ ｉｎ ｆｉｅｌｄ ｔｅｓｔ．Ｔｈｅｓｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ Ｈ２０２ ｈａｄ ａ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｅｎｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ＣＡＴ ａｎｄ ＳＯＤ．１ｎ ａｄｄｉｔｉｏｎ．ｔｈｅ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ａｖｏｉｄｉｎｇ ｌｉｐｉｄ ｐｅｒｏｘｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｈａｄ ｂｅｎｅｆｉｔ ｏｎ ｐｌａｎｔ ｃｏｌｄ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．Ｔｈｅ ｄｉｆｅｒｅｎｃｅｓ ａｍｏｎｇ ｗｈｅａｔ ｖａｎｅｔｉｅｓ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｕｓｅｄ ａｓ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ ｆｏｒ ｗｉｎｔｅｒ ｗｈｅａｔ ｂｒｅｅｄｉｎｇ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｗｈｅａｔ ｃｕｌｔｉｖａｒ；ｆｒｅｅｚｉｎｇ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｇｅｎｔｓ；Ｈ２Ｏ２：ｅｘｔｅｎｄｉｎｇ ｆｒｅｅｚｉｎｇ 冬小麦较春小麦增产潜力高、稳产性好，但 ＡＰＸ和ＣＡＴ活性，探讨冷冻逆境下不同抗寒性小 高寒地区冬小麦种植，须大幅度提高品种抗寒性。 增强品种越冬期间活性氧（ＲＯＳ）清除能力对提高小 麦品种抗寒能力具有重要作用。低温胁迫可增加 植物体内活性氧积累［１－２］。ＲＯＳ包括超氧阴离子 （Ｏ：一）、羟基自由基（０Ｈ）和过氧化氢（Ｈ：０：）等，其 中Ｈ ０ 是低温胁迫中ＲＯＳ主要成分 。低含量过氧 化氢作为信号可生长发育、启动胁迫应答； 积累量过高，对植物体内生物大分子及器官造成 氧化损伤，诱导植物细胞程序性死亡【３ 。活性氧 可造成膜脂过氧化损伤，产生丙二醛（ＭＤＡ）等代 谢产物 。 植物抗寒性依赖活性氧清除系统，包括酶类物 质［６ （如过氧化氢酶（ＣＡＴ）、超氧化物歧化酶 （ＳＯＤ）、抗坏血酸过氧化物酶（ＡＰＸ）、过氧化物酶 （ＰＯＤ）、谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ）、单脱氢抗坏 血酸还原酶（ＭＤＨＡＲ）、脱氧抗坏血酸还原酶 （ＤＨＡＲ）和谷胱甘肽还原酶（ＧＲ）等）和非酶类物质 （如抗坏血酸（ＡＳＡ）、谷光甘肽（ＧＳＨ）、维生素Ｅ和 类胡萝卜素等）。ＳＯＤ、ＣＡＴ和ＡＰＸ是重要活性氧 清除酶，低温下抑制抗氧化酶活性 。冯玉磊等研 究表明低温胁迫下冬小麦丙二醛含量增加，低返青 率品种更明显，ＳＯＤ活性、ＡＳＡ和ＧＳＨ含量与ＭＤＡ 含量呈负相关 ｏ－。拔节期遇低温小麦叶片ＳＯＤ、 ＰＯＤ和ＣＡＴ活性呈先升后降趋势 ”。封冻期抗寒冬 小麦品种中非酶类活性氧清除物质ＧＳＨ和ＡＳＡ含量 可作为冬小麦品种抗寒性评价指标ｎ 。 目前冬小麦抗氧化方面研究多集中在活性氧清 除系统或小麦其他时期活性氧清除酶活性和非酶 类物质相互间关系 。关于封冻期分蘖节活性氧 清除物质与活性氧含量间关系研究报道较少。本 研究以３个抗寒性不同小麦品种为材料，分别在人 工冷冻和田间自然越冬条件下测定小麦品种分蘖 节中ＭＤＡ、Ｈ：Ｏ 、ＧＳＨ和ＡＳＡ含量，ＳＯＤ、ＰＯＤ、 麦品种问抗氧化物质与Ｈ：Ｏ：及ＭＤＡ含量动态变化 和差异，分析抗氧化物质与Ｈ：０：、ＭＤＡ关系，研 究小麦抗氧化能力提高内在机制，为强抗寒冬小 麦品种培育提供依据。 １ 材料与方法 １．１材料及处理 试验选取３份抗寒性不同小麦品种，分别为强 抗寒冬小麦品种“东农冬麦１号”（东北农业大学小 麦育种所培育，越冬返青率高于８５％）、弱抗寒冬 小麦品种“济麦２２”（山东省农科院培育，黑龙江等 高寒地区无法种植越冬）和不抗寒春小麦品种“中 国春”（黑龙江冬季无法越冬）。采用３种冷冻试 验，即田间自然越冬、人工快速冷冻和人工持续 冷冻试验。 １．１．１ 田间低温驯化期和封冻期取材 将３个品种于２０１５年９月３ Ｅｔ播种于东北农业 大学校内试验田。采用完全随机试验设计，每品 种播种２０行，行长５ ｍ，株距２ ｃｍ，行距３０ ｃｍ。 每个取样时间点各品种取样３０株，取３次重复。３ 个品种均于２０１５年９月２２ Ｅｔ出苗，待３叶１心期每 隔１５ ｄ取样１次，取样日期分别为２０１５年１０月１５ 日、１０月３０日、１１月１４日、１１月２９日、１２月１４ 日、１２月２９日、１月１３日，共７次，对应日平均温 度分另０为１３、一２、一２．５、一１１．５、一１２、一１９ 和一２２．５℃（见图１）。将取出植株清洗泥土，吸干 水分，去除根部及叶片，留取分蘖节至基部叶部 约２ ｃｍ处组织，一２０℃保存备用，人工冷冻试验植 株同此处理。 １．１．２室内冷冻试验设计与取样 于２０１５年６月至２０１６年１月东北农业大学农学 院小麦实验室作盆栽冷冻试验。选取“东农冬麦１ 号”“济麦２２”和“中国春”饱满种子，以行距４ ｃｍ， 第７期 李卓夫等：不同抗寒性小麦品种分蘖节低温抗氧化效应分析 －３・ 株距３ ｃｍ，种植于白色塑料盆中，盆规格为６０ ｃｍ￣ ３０ ｃｍｘｌ５ ｃｍ，放置于人工气候箱中培养。光照强 度２ ０００ ｌｘ，温度和光周期为（昼）２５℃１２｝ｌ／（夜） 温度和光周期为（昼）１０℃１６ ｌｌ／（夜）４℃８ ｈ，冷驯 化３０ ｄ后移至冰箱冷冻处理。 人工冷冻分为快速冷冻（处理Ｉ，见表１）和持 续冷冻（处理Ⅱ，见表２），各设５个冷冻温度，每个 温度取３次重复。 １８℃１２ｈ。幼苗生长至３叶１心期时将盆移至低温 光照培养箱中冷驯化处理，最大光照强度２ ｌｘ， ２ｊ＿ ０００ ｇ 一 一 一 一 赠 ３０ ℃）Ｍａｘ．ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ２Ｏ １０ Ｏ ℃）Ｍｉｎ．ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ℃）Ａｖｅｒａｇｅ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ －２０ －３０ ４Ｏ —昌 寸 寸 ｅ－Ｉ 一 ｌ ＩＩｎ Ｉ ０ Ｎ １ ０ ｌ ０ Ｎ 昌 呙 ０ 日期Ｄａｔｅ 图１大田试验取样时期及气温变化 Ｆｉｇ．１ Ｆｉｅｌｄ ｔｅｓｔ ｓａｍｐｌｉｎｇ ｐｅｒｉｏｄ ａｎｄ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｃｈａｎｇｅ ｍ＿Ｉ●＿【０， 一０ 表１处理Ｉ样品编号及处理 Ｔａｂｌｅ １ Ｔｅｓｔ Ｉ ｓａｍｐｌｅ ｎｕｍｂｅｒ ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ 编号 Ｎｕｍｂｅｒ ＣＫ 对应取样时期 Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ｓａｍｐｌｉｎｇ ｐｅｒｉｏｄ 三叶一心期，无低温处理ＣＫ 低温驯化３０ｄ 低温驯化３０ｄ后，一１Ｏ℃２ ｈ 低温驯化３０ｄ后，一１０℃２ ｈ，一１２℃２ｈ ４℃ Ａ Ｂ Ｃ Ｄ 低温驯化３０ｄ后，一１０ ｏＣ ２ ｈ，一１２℃２ｈ，一１４℃２ｈ 低温驯化３０ ｄ后，一１Ｏ℃２ｈ，一１２℃２ ｈ，一１４℃２ ｈ，一１６℃２ｈ Ｅ 低温 ｆｆ化３Ｏｄ后，一１０℃２ ｈ，一１２℃２ ｈ，一１４℃２ ｈ，一１６℃２ｈ，一１８℃２ｈ ・４・ 东北农业大学学报 第４８卷 １．２生理指标测定 丙二醛（ＭＩ）Ａ）Ｎ定参照文献［１３】中硫代巴比妥 酸方法：三氯乙酸（ＴＣＡ）研磨匀浆，４ ｃＩ＝８ ０００ ｇ离 心１０ ａｒｉｎ，吸取２ ｍＬ提取液上清，３次重复。加入 ２ ｍＬ ０．６％硫代巴比妥酸溶液，对照加２ ｍＬ １０％ ＴＣＡ，摇匀后于沸水中煮１５ ａｒｉｎ，迅速置冰上终止 反应，４℃离心，取上清液测定４５０ ｎｍ波长下吸光 度值。 过氧化氢（Ｈ：０ ）含量测定参考文献［１４】方法： 取０．５ ｇ冬小麦分蘖节，加入６ ｍＬ ５％（ｗ／ｖ）三氯乙 酸匀浆研磨，４ ，１０ ０００ ｒ・ａｒｉｎ 离心１０ ａｒｉｎ，取 １ ｍＬ上清酶提取液，加入０．１ ｍＬ ２０％四氯化钛浓 盐酸溶液和０．２ ｍＬ浓氨水，混合后１８ ０００ ｒ・ａｒｉｎ 离 心１０ ａｒｉｎ，１ ｔｏｏｌ・Ｌ 浓硫酸溶解沉淀后测定４１０ ｎｍ 处吸光值，３次重复； 过氧化物酶（ＰＯＤ）活性测定参考文献［１５］方法： 取０．５ ｇ冬小麦分蘖节，加入３ ｍＬ磷酸缓冲溶液（ＰＢｓ） 匀浆研磨，２ ｍＬ ＰＢＳ混匀。４℃，１０ ０００ ｒ・ａｒｉｎ 离 心２０ ａｒｉｎ，取上清液为ＳＯＤ粗酶提取液，３次重 复。取４支透明试管，２支作为对照，测定组依次 加入１．５ ｍＬ ＰＢＳ、０＿３ ｍＬ甲硫氨酸、０．３ ｍＬ氮蓝四 唑、０．３ ｍＬ磷酸氢二钠、０．３ ｍＬ核黄素、０．０５ ｍＬ ＳＯＤ粗酶提取液以及Ｏ．２５ ｍＬ蒸馏水，反应总体系 ３ ｍＬ，对照组采用ＰＢＳ溶液代替ＳＯＤ粗酶提取 液，另外１支仅加缓冲液，用于调零。混匀后，调 零试管置于暗处，另外３支试管置于４ ０００ ｉｘ光照， ２５％下反应３０ ａｒｉｎ。反应结束后，黑布遮住各试管 终止反应，黑暗处以ＣＫ管调零，分别测定５６０ ｎｍ 处吸光值。 超氧化物歧化酶活性（ｓｏＩ））Ｎ定参考文献［１５］ 方法：取０．２５ ｇ分蘖节材料于研钵中，加２ ｍＬ ＰＢＳ 研磨成匀浆，４ ０００ ｒ・ａｒｉｎ 离心１５ ａｒｉｎ，移上清至 ２５ ｍＬ容量瓶中，多次清洗残渣重复上述操作， ＰＢＳ溶液定容，３次重复。加人反应混合液３ ｍＬ和 １ ｍＬ ＰＢＳ作为对照，加入混合液３ ｍＬ和酶液１ ｍＬ 为测定组。立即计时，测定４７０ ｎｍ下吸光值，每 分钟读数１次。 过氧化氢酶（ＣＡＴ）活性测定参考文献［１５】方 法：取Ｏ．５ ｇ样品，加入２．５ ｍＬ ＰＢＳ（ｐＨ＝７．８）匀浆 研磨，再加入２．５ ｍＬ ＰＢＳ混匀，４℃，１５ ０００ ｒ・ａｒｉｎ 离心１５ ａｒｉｎ，取上清液备用，３次重复。加入３％ Ｈ：Ｏ：１ ｍＬ和Ｈ ０ １．９５ ｍＬ，再加入０．０５ ｍＬ酶提取 液启动反应。测定２４０ ｎｍ处吸光值的降低速度， 测定１次・ａｒｉｎ～，共４次，以每分钟吸光值减少０．０１ 定义为１个酶活力单位。 抗坏血酸过氧化物酶（ＡＰｘ）活 ０定采用文黼１６］ 方法：取０．２５ ｇ样品液氮充分研磨，加入５ ｍＬ预冷 ＰＢＳ研磨匀浆，４ｃＣ，２０ ０００ ｒ・ａｒｉｎ 离心１５ ａｒｉｎ取上 清，一２０℃下保存备用，重复３次。酶反应体系中 包含５０ ｍｍｏｌ・Ｌ『 ＰＢＳ（ｐＨ ７．０），０．１ ｍｍｏ］・Ｌ 的 ＥＤＴＡ—Ｎａ：，０．３ ｍｍｏ］・Ｌ～ＡＳＡ。每３ ｍＬ反应液加 入０．１ ｍＬ粗酶提取液，最后加入Ｈ：０：（２０ ＩｘＬ ９０ ｍｍｏｌ・ＩＪ－ ）启动反应。１０ ｓ开始测定吸光值，每１０ ｓ 读数１次，测定１０ ｓ～６０ ｓ吸光值。 抗坏血酸（ＡＳＡ）含量测定参考文献［１７］方法： 取０．３ ｇ分蘖节在５ ｍＬ预冷６％ＴＣＡ溶液中研磨匀 浆，２℃，１５ ６００ ｒ・ｒａｉｎ 离心１０ ａｒｉｎ，取上清液备 用，３次重复。取１ ｍＬ上清酶液，加入１．０ ｍＬ ５％ ＴＣＡ １．０ ｍＬ乙醇，０．５ ｍＬ ０．４％磷酸一乙醇，１．０ ｍＬ ０．５％ＢＰ一乙醇，０．５ ｍＬ ０．０３％三氯化铁三氯化铁一 乙醇，总体积５ ｍＬ。混匀后于３０℃水浴９０ ｒａｉｎ， 测定５２５ ｎｍ处吸光值。根据标准曲线计算样品中 ＡＳＡ含量。 ＧＳＨ测定参考文献［１８］方法：取０＿３ ｇ冬小麦分 蘖节于５ ｍＬ预冷７％磺基水杨酸溶液研磨匀浆，３ 次重复，４℃，１２ ０００ ｒ・ａｒｉｎ 离心１０ ａｒｉｎ。在０．１ ｍＬ 上清酶提取液中加入２．０ｍＬ０．２ ｏｔｏｌ・Ｌ 的ＰＢＳ（含 ＥＤＴＡ，ｐＨ ７．２）溶液，０．３ ｍＬ ０．２ ｍｍｏ］・ＩＪ＿ ＮＡＤＰＨ， ０．３ ｍＬ １Ｕ谷胱甘肽还原酶，０．３ ｍＬ １ ｍｍｏ］・Ｌ ＤＴＮＢ 溶液，置于２７℃水浴３０ ａｒｉｎ后测定４１２ ｎｍ处吸光 值。根据标准曲线计算样品ＧＳＨ含量。 １．３数据分析 采用Ｅｘｃｅｌ ２００７和ＤＰＳ ７．０５软件作数据处理， Ｏｆｆｉｃｅ ＰｏｗｅｒＰｒｉｎｔ ２００７和Ｅｘｃｅ］２００７完成图片和表 格绘制。 ２结果与分析 ２．１低温下过氧化氢含量动态变化 本研究检测低温试验中各处理不同小麦品种分 蘖节中Ｈ：０：含量，结果见图２，三个低温处理试验 中各品种Ｈ：０ 含量间差异显著（Ｐ＜Ｏ．０５），随着冷 冻温度下降各品种Ｈ：Ｏ 含量持续升高，但升高幅 度不同，表现为品种抗寒性越强，Ｈ ０ 含量越低。 快速冷冻和持续冷冻试验中，三个品种Ｈ ０：含量 第７期 李卓夫等：不同抗寒性小麦品种分蘖节低温抗氧化效应分析 变化幅度为０．６５—５．７６ ｍ０１・ ＦＷ，大田试验中变 和３．７５倍。 化幅度为２．５６～１２．３３ ｐ．ｍｏｌ・ ＦＷ；深度冷冻与冷 结果表明，在低温冷冻条件下，冬小麦分蘖节 冻前Ｈ ０：含量比较发现，中国春和济麦２２远高 中Ｈ Ｏ：含量虽持续升高，但不同抗寒性品种间在 于东农冬麦１号，快速冷冻处理下中国春、济麦 过氧化氢积累量和增加幅度上差异显著（Ｐ＜０．０５）， ２２和东农冬麦１号分别增加７．７８、８．０９和５．４６倍； 表现为抗寒性越强品种，Ｈ：０ 积累量越少；而与 持续冷冻处理下三品种分别增加７．Ｏ９、７．７４和 非冷冻处理相比，深度冷冻时抗寒性越强品种， ４。８３倍；大田试验中，三品种分别增加４．８２、４．１４ Ｈ：０ 增加幅度越小。 垦ｇ ’董 垦ｇ ｌ 差ｌ 誉呈 罐呈 ０ ＣＫ ４ Ａ Ｂ Ｃ Ｄ Ｅ 处理温度（℃） 处理温度（℃） Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ 平均温度（℃） Ａｖｅｒａｇｅ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ 图２不同品种间Ｈ２Ｏ 含量变化 Ｆｉｇ．２ Ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ Ｈ２０２ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｖａｒｉｅｔｉｅｓ ２．２低温下丙二醛含量动态变化 冷冻温度继续下降，不同抗寒性品种间丙二醛含 丙二醛（ＭＤＡ）是膜脂过氧化产物，反映植物 量差异逐渐加大，品种间显著差异出现在１月１３ 逆境胁迫后机体受活性氧损害程度，本研究采用 日，日平均气温降至一２２．５℃时。在深度冷冻情况 丙二醛作为冷冻条件下植株受伤害程度指标，结 下，抗寒品种丙二醛含量低。在快速冷冻和持续 果见图３。图３中与大田试验结果不同，快速冷冻 冷冻处理下，东农冬麦１号丙二醛含量在低值水平 和持续冷冻处理下，三个品种ＭＤＡ含量变化范围 上缓慢上升，中国春在高值水平上缓慢上升，而 为１０￣３５ ｐ．ｍｏｌ・ｇ－ ，而在大田试验中，丙二醛含量 济麦２２则由低值到高值快速上升。丙二醛含量反 变化范围为３～３３ ｐ￣ｍｏｌ・ｇ－ 。在田间封冻初期各品 映低温胁迫下品种间膜脂损伤程度和修复程度差 种丙二醛含量较低，而在一１Ｏ℃下，各品种丙二醛 异，结果表明抗寒品种膜受损伤程度低，损伤后 含量均快速升高，为小麦对较低温应激反应；随 修复较快。 东北农业大学学报 第４８卷 臣 呈 、一， 茔 呈 一 燃 爱 苫 窖 菩 宝 高０ ∞Ｉ１ ０旨０ 口 ＣＫ ４ Ａ Ｂ Ｃ Ｄ Ｅ 处理温度（℃） Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ 处理温度（℃） Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ 臣 呈 、一 言 平均温度（ ） Ａｖｅｒａｇｅ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ 图３不同品种间的丙二醛含量变化 Ｆｉｇ ３ Ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ＭＤＡ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｖａｒｉｅｔｉｅｓ ２．３低温大田试验中抗氧化物质含量变化与Ｈ２ｏ：、 ＭＤＡ关系 活性先升后降；ＳＯＤ活性不断下降；ＧＳＨ含量上 越冬性品种高于中国春；ＡＳＡ含量和ＡＰＸ酶活性 上，东农冬麦１号变化幅度大，封冻中期高于不抗 寒品种，ＡＰＸ酶活性动态变化与ＡＳＡ变化相似。 由图２、３结果可知，不论快速冷冻还是持续 冷冻试验，过氧化氢含量变化与田间试验趋势一 致，而丙二醛含量变化存在差异。田间试验结果 可更准确反映品种差异，本研究分别检测田问不 ＰＯＤ酶活性及ＧＳＨ含量在抗寒品种中持续较高， ＡＰＸ酶活性及ＡＳＡ含量在封冻中期保持较高水平。 同时期各品种分蘖节抗氧化物质（ＰＯＤ、ＡＰＸ、 ＳＯＤ、ＣＡＴ、ＡＳＡ和ＧＳＨ）含量，结果见图４。 综上可知，ＳＯＤ活性随着冷冻温度下降而降低， 由于ＳＯＤ在歧化２－产生Ｈ：Ｏ：反应中发挥作用，ＳＯＤ 图４ｈ中ＭＤＡ含量说明膜脂过氧化程度和植物 对逆境条件反应程度，抗氧化酶活性和非酶类抗 氧化物质含量变化与ＭＤＡ关系可反映抗氧化物质 活性降低使该途径中Ｈ Ｏ：下降，而实际检测Ｈ Ｏ： 含量持续升高，说明在冷冻条件下，存在其他Ｈ Ｏ： 产生途径。冷冻程度对于Ｈ Ｏ 清除酶（ＰＯＤ和ＣＡＴ） 活ｆ生具有强烈抑制作用，其活性降低必然影响Ｈ：Ｏ 清除效果。ＰＯＤ和ＣＡＴ涪ｌ生在ｌ１月２９日（一ｌ１．５℃） 对膜系统保护及损伤后修复作用。与图４ｈ相比， 图４ａ中，品种抗寒性越强，ＰＯＤ酶活性越高，丙 二醛含量越低。冷冻温度越低，品种间差异越显 著，说明过氧化物酶对防止膜脂过氧化具有重要 作用。 之前保持较高水平，但不足以完全清除Ｈ：Ｏ：。在 冷冻温度为一１２—２３℃区间，随着温度降低，ＰＯＤ 和ＣＡＴ活性持续降低，不利于Ｈ Ｏ 清除。ＧＳＨ和 ＡＳＡ含量及ＡＰＸ活性变化与过氧化氢关系不明显， 由图４可知，随着冷冻温度降低，各品种ＣＡＴ 第７期 李卓夫等：不同抗寒性小麦品种分蘖节低温抗氧化效应分析 一 《ｌⅢ． 占Ｉ＾ 。《－－ｎ一Ｉｌｖ 媳 《ｕ ｕ ・７－一 盘ｏ１＿ ｌｕ∞昌。Ｉ）越 Ｉ ＝∽０Ｉ∞ 。 但不同品种间差异上，ＡＰＸ活陛及ＡＳＡ和ＧＳＨ含量 与ＭＤＡ含量在１２月１４日（一１２℃）后关系密切，品种 农冬麦１号尤为明显；中国春品种ＡＰＸ活性低， ８ ６ ４ ２ Ｏ ＡＳＡ和ＧＳＨ含量越低，ＭＤＡ含量越高，说明ＡＰＸ、 ＡＰＸ活性强，ＡＳＡ及ＧＳＨ含量高，ＭＤＡ￣ｉ＇Ｊ低，东 ＡＳＡ和ＧＳＨ对膜脂抗氧化具有重要作用。 蜀 耋 蓑重 凸 ０ 一２ —２．５—１ １．５ －１２ －１９ －２２．５ 一２ —２．５—１１．５ —１２ —１９ －２２．５ 平均温度（℃） 平均温度（ｏｃ） Ａｖｅｒａｇｅ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ Ａｖｅｒａｇｅ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ 一 ．ｎ一掣烬口０∽ 一 ＿ｕ—ｇ． ．《∽ ＿Ｉ。罨ｇ一 烬 ｎ【王《 一 越 《∞ 皇 ０《口０∽ ３ ３ ２ ２ １ １ 占【＾Ｉｌｑ《ｘｄｑ ∞∞如∞如∞ Ｏ 一２ —２．５—１ １．５ －１２ —１９ —２２．５ 平均温度（℃） 平均温度（℃） Ａｖｅｒａｇｅ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ Ａｖｅｒａｇｅ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ 一２ —２．５—１ １．５ —１２ —１９ —２２．５ 平均温度（ｏｃ） 平均温度（℃） Ａｖｅｒａｇｅ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ Ａｖｅｒａｇｅ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ 平均温度（ｏｃ） 平均温度（℃） Ａｖｅｒａｇｅ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ Ａｖｅｒａｇｅ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ 图４田间试验中抗寒指标变化 Ｆｉｇ．４ Ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｃｏｌｄ—－ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎｄｅｘ ｉｎ ｉｆｅｌｄ ｔｅｓｔ 东北农业大学学报 第４８卷 ３讨论与结论 封冻期冬小麦分蘖节产生ＲＯＳ主要部位为线粒 体和过氧化氢酶体，Ｈ：Ｏ：存在时间远长于Ｏ２－【ｌ９】。因 此，冷驯化条件下可检测Ｈ：Ｏ：大量积累［２０１。但同类 研究中多以ＭＤＡ等作为抗寒指标。随着冷冻温度 持续下降，不同抗寒性小麦品种在Ｈ：Ｏ 含量变化 上均表现持续上升趋势，随着冷冻程度加剧品种 间Ｈ：Ｏ 含量差异幅度增加。与预期不同，不同越 冬性品种在Ｈ Ｏ：含量上，并未表现冷冻后随活性 氧清除物质增加而下降趋势。与郑建树研究结果 一致，佛手幼苗从２５～４５℃随温度升高Ｈ：Ｏ：含量持 续上升［３１。说明在极端温度下植物可大量积累 Ｈ Ｏ 。Ｈ：Ｏ：是多途径产生活性氧类别，ＳＯＤ歧化 Ｏ 一反应、质膜ＮＡＤＰＨ氧化酶催化反应和过氧化物 体脂肪酸Ｂ一氧化反应均产生大量Ｈ ０ ２【２１】。低温条件 下ＳＯＤ在歧化０２－产生Ｈ：Ｏ 反应中发挥作用，但冷 冻温度引起ＳＯＤ活性降低并未使Ｈ：０。总含量下降。 ＰＯＤ和ＣＡＴ是清除Ｈ：Ｏ 主要酶，但本研究中 酶活性均受深度冷冻强烈抑制，不利于Ｈ Ｏ：清 除。不同抗寒性小麦品种间，ＰＯＤ和ＣＡＴ活性高 品种，Ｈ：Ｏ：含量较低，说明通过遗传改良，提高 ＰＯＤ和ＣＡＴ活性有利于降低Ｈ Ｏ：含量，提高冬小 麦抗寒性。ＣＡＴ对Ｈ：０：亲和力较低，仅在Ｈ ０：含 量较高时作用明显口 。温度过低ＣＡＴ活性受到抑 制，即使Ｈ：０：浓度较高，ＣＡＴ也难以发挥清除 Ｈ：Ｏ：作用。Ｈ ０：含量过程复杂，抗氧化酶类及 物质均有不同程度贡献，分析探讨相互间关系可 为抗寒育种提供重要依据及抗逆思路。 丙二醛（ＭＤＡ）是膜脂过氧化重要产物，在遭 遇低温损害时，抗寒性强品种ＭＤＡ含量较低，抗 寒性弱品种ＭＤＡ含量较高口 。冯玉磊等对冬小麦 返青期分蘖节中ＳＯＤ活性，ＭＤＡ、ＡＳＡ和ＧＳＨ含 量变化研究结果表明，冬小麦叶鞘中ＭＤＡ含量在 降温后增加，其含量与返青率呈正相关ｕ 。本研究 中不同冷冻处理下ＭＤＡ含量变化与Ｈ：Ｏ：不同，表 现为轻度冷冻温度下ＭＤＡ含量快速提高，品种间 无差异。与齐代华等对长叶竹柏低温下ＭＤＡ变化 研究结果一致，属于低温应激反应，深度冷冻 时，ＭＤＡ含量大幅降低后逐渐上升，品种抗寒性 越强其含量越低［２４１。ＰＯＤ活性和ＧＳＨ、ＭＤＡ含量 变化关系密切，表现为ＰＯＤ活性越强，ＧＳＨ含量 越高，ＭＤＡ含量越低。提高品种ＰＯＤ活性和ＧＳＨ 含量，减轻活性氧对膜脂损伤，有利于增强小麦 抗寒能力。深度冷冻条件下ＭＤＡ含量也可作为选 育强抗寒小麦品种重要依据。 正常情况下ＳＯＤ活性越高，植物抗氧化能力越 强。随着逆境持续时间延长或程度加剧，ＳＯＤ活性 表现多种动态特征，如一直下降、先降后升或者 保持不变［２５－２６］。干旱逆境下水稻ＳＯＤ、ＰＯＤ和ＡＰＸ 活性随干旱持续时间延长而上升 。而本研究中， 在低温胁迫下，ＳＯＤ、ＣＡＴ和ＡＰＸ酶活性呈先升后 降或持续下降趋势，这与冬小麦及其冷冻温度有 关，黑龙江地区冬季地表温度达一２０℃以下。温度 降至一１０℃以下后抗氧化酶活性下降，与马光等对 观赏羽衣甘蓝抗寒研究结果类似，一１０℃为观赏羽 衣甘蓝ＳＯＤ活性调节临界值口 。 结合本试验中各抗氧化物质与Ｈ ０ 及ＭＤＡ关 系发现，综合运用遗传改良相关技术，包括分子 生物学研究成果及基因工程技术，增强植株低温 下抗氧化酶活性和非酶类物质高水平持续能力是 提高冬小麦耐寒性有效途径。本研究揭示封冻期 冬小麦分蘖节活性氧变化特征及抗氧化物质协同 变化对清除活性氧、减轻活性氧对膜脂过氧化损 伤作用。后续仍需检测更多相关生理指标，结合 冬小麦封冻期转录组测序数据，从转录组水平上 印证抗氧化物质关系，进一步挖掘潜在抗氧化功 能基因，全面解析其ＲＯＳ清除机制，为冬小麦耐 寒性育种提供依据。 【参考文献】 ［１】于晶，，苍晶，等．冬小麦抗寒性的研究进展ＩＪ】．东北农业 大学学报，２００８，３９（１ １）：１２３—１２７． ［２】王伟伟，付晶，于亮，等．冬小麦抗寒性研究现状及展望呲河 北农业科学，２０１３，ｌ７（３）：９－１２，１７． ｆ ３］郑建树．极端温度对佛手光合生理，抗氧化酶系及ＲＯＳ的影 响【Ｄ】．金华：浙江师范大学，２０１ １． ｆ ４］张洁．ＲＯＳ诱导的氧化胁迫与细胞凋亡对百子莲愈伤组织超 低温保存细胞涪ｆ生的影响机制【ＤＩ－Ｉ：：海：上海交通大学，２０１５． 【５】孙蕊．寒地冬小麦抗氧化指标低温响应及ＧＳＴ基因的差异表 达分析【Ｄ］．哈尔滨：东北农业大学，２０１５． ｆ ６］罗银玲，宋松泉，兰芹英．酶促和非酶促抗氧化系统在玉米胚脱 第７期 李卓夫等：不同抗寒性小麦品种分蘖节低温抗氧化效应分析 ・９・ 水耐性获得中的作用叨．云南植物研究，２００９，３ １（３）：２５３—２５９． ｆ ７】Ｔｈａｋｕｒ Ｐ，Ｎａｙｙａｒ Ｈ．Ｆａｃｉｎｇ ｔｈｅ ｃｏｌｄ ｓｔｒｅｓｓ ｂｙ ｐｌａｎｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃｈａｎｇ— ｉｎｇ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ：ｓｅｎｓｉｎｇ，ｓｉｇｎａｌｉｎｇ，ａｎｄ ｄｅｆｅｎｄｉｎｇ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ［Ｍ】．Ｐｌａｎｔ Ａｃｃｌｉｍａｔｉｏｎ ｔｏ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｓｔｒｅｓｓ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，２０１３． 【８】班兆军，关军锋，李莉，等．非生物胁迫下植物体内活性氧产生 和抗氧化机制的研究概述【Ｊ】．中国果菜，２０１２（５）：４０－４７． ｆ ９】Ｌｉ Ｘ，Ｊｉａｎｇ Ｈ，Ｌｉｕ Ｆ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈｉｌｌｉｎｇ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｉｎ ｗｈｅａｔ ｄｕｒｉｎｇ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｂｙ ｐｒｅ－ｓｏａｋｉｎｇ ｓｅｅｄ ｗｉｔｈ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｎａｄ ｇｉｂｂｅｒｅｌｌｉｎ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ Ｇｒｏｗｔｈ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，２０１３，７１（１）：３１－４０． 【ｌ ０］ 冯玉磊，王晓槐付连观等．寒地冬小麦返青期抗氧化特性［Ｊ］． 麦类作物学报，２０１２，３２（３）：５４７—５５０． 【１１】李春燕，徐雯，刘立伟，等．低温条件下拔节期小麦叶片内源激 素含量和抗氧化酶活性的变化［Ｊ】．应用生态学报，２０１５，２６（７）： ２Ｏ１５—２０２２． 【１２］孙蕊，林奇，王晓楠，等．低温下寒地冬小麦抗氧化生理指标的 ㈣ 比较分析［Ｊ１．中国农学通报，２０１５，３１（１２）：１－５． 【ｌ３】李合生．植物生理生化实验原理和技术［Ｍ］．北京：高等教育出 版社．２０００． 【１４】邹琦．植物生理学试验指导［Ｍ】．北京：中国农业出版社，２０００． 【１５】陈建勋，王晓峰．植物生理学实验指导［Ｍ］．广州：华南理工大 学出版社，２０１５． （１６Ｊ沈文飚，黄丽琴，徐朗莱．植物抗坏血酸过氧化物酶［Ｊ１．生命的 化学（中国生物化学会通讯），１９９７，１７（５）：２４—２６． 【１７】Ｋａｍｐｆｅｎｋｅｌ Ｋ，Ｖａｎｍｏｎｔａｇｕ Ｍ，Ｉｎｚｅ Ｄ．Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｔｅｒｍｉｎａ－ ｔｉｏｎ ｏｆ ａｓｃｏｒｂａｔｅ ａｎｄ ｄｅｈｙｄｒｏａｓｃｏｒｂａｔｅ ｆｒｏｍ ｐｌａｎｔ ｔｉｓｓｕｅ］Ｊ］．Ａｎａ— ｌｙｔｉｃａｌ ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９５，２２５（１）：１６５—１６７． 【ｌ８】Ｍａ Ｆ，Ｃｈｅｎｇ Ｌ．Ｔｈｅ ｓｕｎ－ｅｘｐｏｓｅｄ ｐｅｅｌ ｏｆ ａｐｐｌｅ ｆｒｕｉｔ ｈａｓ ｈｉｇｈｅｒ ｘａｎｔｈｏｐｈｙＵ ｃｙｃｌｅ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｔｈｅｒｍａｌ ｄｉｓｓｉｐａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎｔｉｏｘｉ— ｄａｎｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ａｓｃｏｒｂａｔｅ－ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ ｐａｔｈｗａｙ ｔｈａｎ ｔｈｅ ｓｈａｄｅｄ ｐｅｅｌ ｆＪ】．Ｐｌｎａｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００３，１６５（４）：８１９—８２７． Ｓｏｕｆｉ Ｓ，Ｈａｍｅｄ Ｋ Ｂ，Ａｒｂａｏｕｉ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｈ２０２ ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｎ ｔｈｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｏｆ ｔｗｏ ｓｅａｓｈｏｒｅ ｐａｓｐａｌｕｍ（Ｐａｓｐａｌｕｍ ｖａｇｉｎａｔｕｍ Ｓｗ．）ｃｕｈｉｖａｒｓ（ｓ￣ａｍ ａｎｄ Ｓｅａｓｐｒａｙ）ｔｏ ｃｏｌｄ ｓｔｒｅｓｓ］Ｊ］．Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１６，３Ｏ（２）：１０３－１０９． Ｄａｉ Ｈｕａｎｇ Ｙ，Ｚｈｏｕ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｃｏｌｄ ａｃｃｌｉｍａｔｉｏｎ ｏｎ ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｅｎｚｙｍｅｓ ａｎｄ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ ｉｎ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ａｎｄ ｔｏｌｅｒ－ ａｎｔ ｂａｒｌｅｙ ｃｕｌｔｉｖａｒｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｌｏｇｉａ Ｐｌａｎｔａｒｕｍ，２００９，５３（２】：２５７－２６２． Ｇｉｌｌ Ｓ Ｓ，Ｔｕｔｅｊａ Ｎ．Ｒｅａｃｔｉｖｅ ｏｘｙｇｅｎ ｓｐｅｃｉｅｓ ａｎｄ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｍａｃｈｉｎｅｒｙ ｉｎ ａｂｉｏｔｉｃ ｓｔｒｅｓｓ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｉｎ ｃｒｏｐ ｐｌａｎｔｓ］Ｊ］．Ｐｌａｎｔ ｐｈｙｓ— ｉｏｌｏｇｙ ｎａｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１０，４８（１２）：９０９—９３０． Ｇｒａｈａｍ Ｄ，Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ Ｂ Ｄ．Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｏｆ ｐｌａｎｔｓ ｔｏ ｌｏｗ，ｎｏｎｆｒｅｅｚｉｎｇ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ：Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，ａｎｄ ａｃｃｌｉｍａｔｉｏｎ］Ｊ］．Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｐｌｎａｔ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，１９８２，３３（１）：３４７－３７２． 晁美丽．东农冬麦１号抗寒性鉴定及ＣＢＦ２基因克隆和表达分 析［Ｄ］．哈尔滨：东北农业大学，２０１２． 齐代华，李旭光，王力，等．模拟低温胁迫对活性氧代谢保护酶 系统的影响一以长叶竹柏（Ｐｏｄｏｃａｒｐｕｓｆｌｅｕｒｙｉ Ｈｉｃｋｅ１）幼苗为 例 ］．西南农业大学学报，２００３，２５（５）：３８５—３８８，３９９． 周瑞莲，．水分胁迫下豌豆保护酶活力变化及脯氨酸积累 在其抗旱中的作用［Ｊ】．草业学报，１９９７，６（４）：３９—４３． 杨暹，关佩聪．干旱胁迫与菜心叶片活性氧代谢的研究［Ｊ】．华 南农业大学学报，１９９８，ｌ９（２）：８１—８５． 赵宏伟，王新鹏，于美芳，等．分蘖期干旱胁迫及复水对水稻抗 氧化系统及脯氨酸影响［Ｊ】．东北农业大学学报，２０１６，４７（２）： １－７． 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