第３５卷 第５期 ２０１０年１０月 贵 阳 医 学 院 学报 ＶＯＩ．３５ ＮＯ．５ ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＧＵＩＹＡＮＧ ＭＥＤＩＣＡＬ ＣＯＬＬＥＧＥ ２０１０．１０ 王树脂固相法人工合成生长抑素 刘 华 ，刘 红 ，张 勇 （１．贵阳医学院生物化学与分子生物学教研室，贵州贵阳５５０００４；２．贵阳医学院理化中心，贵州贵阳５５０００４；３．贵阳医学院寄生虫 学教研室，贵州贵阳５５０００４） ［摘 要］目的：人工合成生长抑素。方法：以侧链保护的氨基酸为原料，用王树脂作为反应载体，在阎相合 成反应器中手工合成ｌ４个氨基酸的多肽生长抑素，并探讨影响合成的因素。结果：王树脂固相法合成生长抑 素的纯度高达７０％以上。结论：标准化的合成流程对生成抑素的人工合成有一定价值。 ［关键词］树脂类，合成；生长抑素；肽合成 ［中图分类号］Ｒ３４—３３ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１０００－２７０７（２０１０）０５－０４８１－０２ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎ ｗｉｔｈ Ｒｅｓｉｎ Ｗａｎｇ Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｍｅｔｈｏｄ ＬＩＵ Ｈｕａ ，ＬＩＵ Ｈｏｎｇ ，ＺＨＡＮＧ Ｙｏｎｇ （ ．Ｄｅｐａｒｔｅｒｍｅｎｔ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｇｕｉｙａｎｇ ５５０００４，Ｇｕｉｚｈｏｕ，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｐｈｙｓｉｃａｌ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｇｕｉｙａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｇｕｉｙａｎｇ ５５０００４，Ｇｕ＆ｈｏｕ，Ｃｈｉｎａ； ３．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｆｏ Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｇｕｉｙａｎｇ ５５０００４，Ｇｕ￣ｈｏｕ，Ｃｈｉｎａ） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅ ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎ ａｒｔｉｉｆｃｉａｌｌｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎ ｗａｓ ｓｙｎｔｈｅ— ｓｉｚｅｄ ｉｎ ｓｅｌｆ－ｍａｄｅ ｓｏｌｉｄ ｐｈａｓｅ ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｖｅｓｓｅｌ，ｕｔｉｌｉｚｉｎｇ ｌａｔｅｒａｌ ｃｈａｉｎ ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ａｓ ｒａｗ ｍａｔｅｒｉａｌｓ，ｕｓｉｎｇ ｒｅｓｉｎ ｗａｎｇ ａｓ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｖｅｈｉｃｌｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ ｐｕｒｉｔｙ ｏｆ ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎ ｗａｓ ｂｅｙｏｎｄ ７０％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ：Ｔｈｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ｉｓ ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｃａｎ ｂｅ ｅａｓｉｌｙ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ．Ｔｈｉｓ ｓｏｌｉｄ ｐｈａｓｅ ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ａｌｓｏ ｕｓｅｆｕｌ ｔｏ ｏｔｈｅｒ ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎ；ｒｅｓｉｎｓ，ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ；ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ 生长抑素（Ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎ）有两种主要活性形 基、脱侧链保护基团，最终获得生长抑素粗品，并自 式，即生长抑素．１４和生长抑素一２８，分别由１４和２８ 行设计了适合手工操作的玻璃反应器，使所有合成 个氨基酸残基组成。人工合成的生长抑素－１４为 过程的反应均在一个反应器中连续进行。 还原型线状结构，生物活性与环状结构的天然生长 抑素相同，是很有价值的原料用药。目前，国内已 １材料和方法 经有以三苯甲基树脂、４一甲基三苯甲基树脂或４一 甲氧基三苯甲基树脂为起始原料固相合成生长抑 １．１试剂 素的专利，但从国外固相多肽合成技术实践上看， 合成此肽段ＮＨ２－Ａｌａ—Ｇｌｙ—Ｃｙｓ－Ｌｙｓ－Ａｓｎ—Ｐｈｅ— 羟基树脂一王树脂的应用率达到３０％～５０％，成 Ｐｈｅ．Ｔｒｐ—Ｌｙｓ—Ｔｈｒ．Ｐｈｅ—Ｔｈ卜Ｓｅｒ．Ｃｙｓ—ＣＯＯＨ所需要的 为使用较广泛的一种载体。王树脂在肽的固相合 全部Ｆｍｏｃ保护氨基酸购自四川三高生化股份有 成中具有条件温和，副反应少和产率高等优点， 限公司，纯度＞９８％；ＨＢＴＵ（苯并一四甲基一六 因此被广泛应用于活性多肽的合成…。另外，王 氟磷酸盐）、Ｎ．羟基苯并（ＨＯＢＴ）购自四川三 树脂还有机械强度好，便于振荡搅拌；在常用溶剂 高生化股份有限公司，纯度＞９９％；哌啶（Ｐｙｐｅｒｉ— ＤＣＭ和ＤＭＦ中有良好溶胀性，耐酸耐碱；内部有 ｄｉｎｅ）购自上海吉尔生化，纯度＞９９％；Ｎ，Ｎ一二异丙 较大网格空间，有利于多肽延长 。本文以连接 基乙胺（ＤＩＥＡ）购自上海吉尔生化，纯度＞９９％；三 在王树脂的保护半胱氨酸为起始氨基酸，按固相合 氟乙酸（ＴＦＡ）购自上海吉尔生化，纯度＞９９％；二 成的方法连接保护氨基酸，依次脱去Ｆｍｏｃ保护 甲基甲酰胺（ＤＭＦ）、二氯甲烷（ＤＣＭ）、甲醇 ４８１ 贵阳医学院学报 ３５卷 （ＭｅＯＨ）、二乙醚（Ｄｉｅｔｈｙｌ Ｅｔｈｅｒ）、醋酸（Ａｃｅｔｉｃ Ａｃｉｄ）、苯酚（Ｐｈｅｎｏ１）、乙二硫醇（ＥＤＴ）及乙腈 （Ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ）等均为市售化学纯或分析纯。 １．２仪器 ＤＭＦ清洗３次，乙醇和ＤＣＭ清洗３次，按照１０：０．５ ：０．２５：０．５比例加入ＴＦＡ、乙醚、硫基乙醇及水，加苯 酚０．７５ ｇ配成混合切割液ｌ６ Ｊ，磁力搅拌２ ｈ，把多肽 链从树脂上切割下来，溶液呈现亮红色或黄色，用旋 转蒸发仪蒸干ＴＦＡ，再用乙醚沉淀多肽；洗涤３次， 固相合成反应器（内径１５ ｍｍ，长度１５０ ｍｍ， 反应器下端收口处有玻砂，下端是活塞）、三角瓶、 加入冰醋酸溶解，过滤并冷冻干燥，称重。 １．３．８高效液相色谱检测纯度 其分子量，鉴定结构。 小试管、水平摇床、台式离心机、油泵、旋转蒸发仪、 冷冻干燥系统（丹麦ＨｅＴｏ）及高效液相色谱仪 ＬＣ－ＭＳ确定 （Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ ｓｅｒｉｅｓ）。 １．３方法 根据本次实验合成量和生长抑素肽段的分子 量，计算并称量好所需各保护氨基酸的重量及其它 所需要的反应物的重量。生长抑素序列羧基端的 第一个保护性氨基酸是半胱氨酸（Ｃｙｓ），购买原料 时已经和王树脂连接，即Ｆｍｏｃ—Ｃｙｓ（ｔｒｔ）一Ｗａｎｇ，其 他保护性氨基酸则不需要和王树脂连接。 １．３．１ 预处理 用ＤＣＭ清洗并膨胀Ｆｍｏｃ—Ｃｙｓ （ｔｒｔ）一Ｗａｎｇ，ＤＭＦ洗涤除去杂质。用印三酮检测剂 检查Ｆｍｏｃ．Ｃｙｓ（ｔｒｔ）．Ｗａｎｇ的质量，以确保树脂没 有游离的氨基酸。 １．３．２脱保护 沿管壁小心加入２０％Ｐｉｐｅｒｉ— ｄｉｎｅ的ＤＭＦ溶液 ，缓慢摇匀５ ｒａｉｎ；再加入过量 ２０％Ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ的ＤＭＦ溶液冲洗管壁，用玻棒把颗 粒物赶到管底，置放在摇床上进行脱保护反应２０ ～３０ ｍｉｎ，脱保护率在９９％以上 。 １．３．３印三酮检测用ＤＭＦ冲洗３～４次，洗掉 Ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ；冲洗时，加入少量ＤＭＦ覆盖过固体物， 旋转活塞时只有ＤＭＦ和Ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ可以通过玻砂 孔隙中漏掉，剩余的固体混悬物即是脱了保护的 Ｃｙｓ（ｔｒｔ）．Ｗａｎｇ。取少量反应物作检验，有明显蓝 紫色为正常，说明氨基酸的氨基端已经脱保护。 １．３．４ 缩合 往反应器中加入第二个保护氨 基酸，以及缩合剂ＨＯＢＴ、ＨＢＴＵ和碱性试剂ＤＩＥＡ， 玻棒搅动混匀，放置在摇床上反应６０ ｒａｉｎ。 １．３．５印三酮检测用ＤＭＦ洗涤３～４次，洗涤 时ＤＭＦ溶液和溶解在ＤＭＦ中的未反应的过量氨 基酸从玻砂孔隙中漏掉，而反应产物因连接在树脂 上不能通过玻砂。取少量反应产物作检验，无色为 正常，说明氨基酸的氨基端已经完全反应。 １．３．６脱保护反应按照１．３．２～１．３．５项下重复 进行脱保护反应，印三酮检测是否脱保护、加人待反 应氨基酸和缩合剂进行缩合反应、印三酮检测是否 反应完全，直至完成整条肽链的合成。 １．３．７从树脂切割 称重上述反应粗产品，用 ４８２ ２ 结果 本次实验中，生长抑素合成量为０．１ ｍｍｏｌ／Ｌ， 根据生长抑素肽段的分子量１ ６３７．８８ ｇ／ｍｏｌ，计算 出理论制备量为１６４ ｍｇ。反应物加量模式和合成 结果如下：（１）所有反应物按理论量１：１加入，实际 制备量为５５．７ ｍｇ；（２）所有反应物按２倍于理论量 加入，实际制备量为８８．２ ｍｇ；（３）所有反应物按３倍 于理论量加人，实际制备量为９７．９ ｍｇ；（４）前５个氨 基酸和缩合剂按１．５倍理论量加入，第６到第１０个 氨基酸和缩合剂按２倍于理论量加入，最后４个氨 基酸和缩合剂按２倍于理论量加入，实际制备量为 ９１．８ ｍｇ。所有合成样品由苏州国镝医药科技有限 公司高效液相色谱检测纯度和ＬＣ－ＭＳ鉴定结构，确 定合成样品为生长抑素，粗品的纯度均在７０％以 上。结果（４）中合成样品的ＨＰＬＣ图谱见图１。 图１ 生长抑素粗品的ＨＰＬＣ色谱 Ｆｉｇ．１ ＨＰＬＣ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ ｏｆ ｃｒｕｄｅ ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎ ｓａｍｐｌｅ ３ 讨论 ３．１反应物的加入量对收率的影响 多肽链的合成是通不断加长肽链的反应过程， 影响产物得率的最主要因素是随着多肽链的延伸 而产生的空间位阻。实验证明，按结果中（４）的加 量模式进行反应能得到相对满意的制备量，并且可 以节省原料。 （下转第４８６页） 贵阳医学院学报 ３５卷 ｄｉｏｌｏｇｙ ｈｉｐ ｉｎｄｅｘ［Ｊ］．Ｊ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ，２０００（１２）：２８６６． ｐｏｒｔａｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｔｅｒｏｔｏｐｉｃ ｂｏｎｅ ａｎｄ ｏｆ ｔｈｅ ［２］袁国华，郭军华，施桂英，等．强直性脊柱炎髋关节病变 的危险因数［Ｊ］．中华风湿病杂志，１９９８（４）：１９２． ［３］Ｌｅｈｔｉｍａｋｉ ＭＹ，Ｌｅｈｔｏ ＭＵ，Ｋａｕｔｉａｉｎｅｎ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｃｈａｒｕｌｅｙ ｔｏｔａｌ ｈｉｐ ａｒｔｈｒｏｐｌａｓｔｙ ｉｎ ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ ｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ：Ｓｕｒｖｉｖｏｒ— ｄｕｒａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｉｆｘａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅｍｅｎｔｅｄ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ［Ｊ］，Ｊ Ｂｏｎｅ Ｊｏｉｎｔ Ｓｕｒｇ（Ａｍ），１９９０（７２）：８３４—８３９． ［９］Ｔａｔａｒｉ Ｈ，Ａｌｉｃｉ Ｅ，Ｈａｖｉｔｃｉｏｇｌｕ Ｈ．Ｆｏｒｔｙ—ｔｗｏ ｙｅａｒ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｗｉｔｈ ｂｉｌａｔｅｒａｌ Ｊｕｄｅｔ ｈｉｐ ｐｒｏｓｔｈｅｓｅｓ［Ｊ］．Ａｒｃｈ Ｏｒｔｈｏｐ Ｔｒａｕ— ｍａ Ｓｕｒｇ，２００１（１２１）：１１２—１１３． ｓｈｉｐ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ７６ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｆｏｒ ８—２８ｙｅａｒ［Ｊ］． Ａｃｔａ０ｎｈｏｐＳｃａｎｄ，２００１（７２）：２３３—２３６． ［１０］ＨｏｅｋｓｔｒａⅢ，Ｖｅｔｈ ＲＰ，Ｎｉｅｌｓｅｎ ＨＫ，ｅｔ ａ１．Ｂｉｌａｔｅｒａｌ ｔｏｔｌａ ｈｉｐ ａｎｄ ｋｅｅｎ ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ ｉｎ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｐａｔｉｅｎｔ ［４］喻忠，王黎明，宋华荣，等．严重髋关节屈曲强直畸形的 全髋关节置换术［Ｊ］．中国矫形外科杂志，２００６（１４）： ８１７—８２０． ［Ｊ］．Ａｒｃｈ Ｏｒｔｈｏｐ Ｔｒａｕｍａ Ｓｕｒｇ，１９８９（１０８）：２９１—２９５． ［１ １］Ｎｉｌｓｓｏｎ ＯＳ，Ｐｅｒｓｓｏｎ ＰＥ．Ｈｅｔｅｒｏｔｏｐｔｉｃ ｂｏｎｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｆｔｅｒ ｊｏｉｎｔ ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ，１９９９（１１）： １２７一ｌ３１． ［５］高志国，于建华，徐世 ，等．强直性脊柱炎全髋关节置 换术的常见问题及其处理［Ｊ］．中华骨科杂志，２０００ （２０）：７２８—７３１． ［１ ２］Ｂｈａｎ Ｓ，Ｍａｌｈｏｔｒａ Ｒ．Ｂｉｐｏｌａｒ ｈｉｐ ａｒｔｈｒｏｐｌａｓｔｙ ｉｎ ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ ｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓＩ Ｊ］．Ａｒｃｈ Ｏｒｔｈｏｐ Ｔｒａｕｍａ Ｓｕｒｇ，１９９６（１ １５）： ９４—９９． ［６］卢世璧，王继芳，朱盛修，等．髋关节强直人工关节置置 换术［Ｊ］．中华外科杂志，１９８５（２３）：６２８—６３０． ［７］Ｋｉｌｇｕｓ ＤＪ，Ｎａｍｂａ ＲＳ，Ｇｏｒｅｋ ＪＥ，ｅｔ ａ１．Ｔｏｔａｌ ｈｉｐ ｒｅｐｌａｃｅ— ｍｅｆｌｔ ｆｏｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｈｏ ｈａｖｅ ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ ｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ．Ｔｈｅ ｉｍ— ｐｏｒｔａｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｔｅｒｏｔｏｐｉｃ ｂｏｎｅ ａｎｄ ｏｆ ｔｈｅ ［１３］Ｂｒｉｎｋｅｒ ＭＲ，Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ＡＣ，Ｋｕｌｌ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｉｍａｒｙ ｎｏｎｃｅ－ ｍｅｎｔｅｄ ｔｏｔａｌ ｈｉｐ ａｒｔｈｒｏｐｌａｓｔｙ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ ｓｐｏｎｄｙｌｉｌｉｓ Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ ｒａｄｉｏｇｒａｐｈｉｃ ｒｅｓｕｌｔｓ ａｔ ａｎ ａｖｅｒａｇｅ ｄｕｒａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｉｆｘａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅｍｅｎｔｅｄ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｊ Ｂｏｎｅ Ｊｏｉｎｔ Ｓｕｒｇ（Ａｍ），１９９０（７２）：８３４—８３９． ｏｆｌｌｏｗ—ｕｐ ｐｅｒｉｏｄ ６ ｙｅａｒｓ［Ｊ］．Ｊ Ａｒｔｈｒｏｐｌａｓｔｙ，１９９６ （１１）：８０２—８１２． ［８］Ｋｉｌｇｕｓ ＤＪ，Ｎａｍｂａ ＲＳ，Ｇｏｒｅ ＪＥ，ｅｔ ａ１．Ｔｏｔａｌ ｈｉｐ ｒｅｐｌａｃｅ ｍｅｎｔ ｆｏｒ ｐａｔｉｅｎｔ ｗｈｏ ｈａｖｅ ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ ｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ：ｔｈｅ ｉｍ— （２０１０—０６一ｌＯ收稿，２０１０—０７—１４修回） （上接第４８２页） ３．２反应的连续性对反应的影响 色，无法确定体系是否完全脱保护，如果这时继续 进行缩合反应，就有可能产生两条以上的肽链。由 由于采用了自行设计新型反应器，整个合成过 程都是在连续不问断过程中进行，不用转移容器， 于肽链在高效液相色谱图谱上很难区分，出峰时间 差别很小，给后面的纯化带来很大的难度。经过反 反应条件好控制，简单易行，并且容易放大，可提高 长肽链的多肽合成的效率。 ３．３ 乙醚沉淀条件对多肽合成的影响 在进行多肽从树脂切割下来的步骤中需要加 入ＴＦＡ和巯基乙醇溶解多肽，即把多肽链从树脂 复实验，认为水合印三酮的质量是最关键的因素； 另外，乙醇的纯度对检测剂影响也很大，建议采用 医用酒精以确保指示剂的准确度。 上切割下来，并用旋转蒸发仪蒸干体系，一方面是 抽掉巯基乙醇的刺鼻气味，更重要的是尽量蒸干 ＴＦＡ，以便用乙醚能顺利沉淀多肽。ＴＦＡ的蒸干与 否直接影响乙醚的沉淀效果。 ３．４印三酮检测的准确度对反应的影响 ４参考文献 ［１］Ｗ．Ｃ．Ｃｈａｎ，Ｐ．Ｄ．Ｗｈｉｔｅ．Ｆｍｏｃ ｓｏｌｉｄ ｐｈａｓｅ ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ［Ｊ］．Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，ｅ，２０００：１３，２７，５ｔ一５３． 印三酮法检测是在每一步脱保护反应和加入 氨基酸缩合反应时必须使用的检测方法，在指示反 ［２］Ｍｉｃｈａｅｌ Ｗ Ｐｅｎｎｉｎｇｔｏｎ，Ｂｅｎ Ｍ Ｄｕｎｎ．Ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ［Ｊ］．Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．：Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，ｅ，１９９４： ２４，６５，６７．６３７． 应正确进行过程中起着至关重要的作用。配制方 法是将水合印三酮溶解在乙醇中，浓度为７６％（重 ［３］Ｒｏｎａｌｄ Ｅ Ｒｅｉｄ．Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｒｕｇ Ａｎａｌｙｓｉｓ［Ｊ］． Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｍ．Ｄｅｋｋｅｒ，Ｃ，２０００：３０９—３２９． 量比），棕色滴瓶容纳，避免污染，并保存于冰箱。 在实验过程中发现，脱保护作用后，用分析纯配制 的检测剂检测结果并非是其特征蓝紫色，而是紫红 （２０１０—０６—０３收稿，２０１０～０７—０９修回） ４８６
