ＩＣＳ ０７．１００Ｃ ５３中华人民共和国国家标准ＧＢ １５１９３．９－２００３代替ＧＢ １５１９３． ９－１９９４显性致死试验Ｄｏｍｉｎａｎｔ ｌｅｔｈａｌ ｔｅｓｔ２００３－０９－２４发布２００４－０５－０１实施中华人民共和国卫生部＊六中国国家标准化管理委员会‘’．１ＧＢ １５１９３．９－２００３Ｂｌｉ言本标准全文强制。本标准代替ＧＢ １５１９３． ９－１９９４《显性致死试验》。本标准与ＧＢ １５１９３．９－１９９４相比主要修改如下：—在“范围”中增加了受试物的具体内容：食品生产、加工、保藏、运输和销售过程中所涉及的可能对健康造成危害的化学、生物和物理因素，检验对象包括食品添加剂（含营养强化剂）、食品新 资源及其成分、新资源食品、辐照食品、食品容器与包装材料、 食品工具、设备、洗涤剂、消毒剂、农药残留、 兽药残留、食品工业用微生物等；—在“实验动物”中：将“成年小鼠（体重３０ ｇ以上）或大鼠（体重２００ ｇ以上）”改为“成年小鼠（性成熟，体重３０ ｇ以上）或大鼠（性成熟，体重２００ ｇ以上）”，“动物数量”雄性动物每组不少于１０一１５只，雌性动物每组不少于２０只一３０只，改为雄性动物每组不少于１５只，雌性动物每组不 少于３０只受孕鼠； —一将“分组”下的两项内容“组数”和“动物数量”合并改为“剂量及分组”，高剂量组的设计方法增加一条“急性毒性试验给予受试物最大给予剂量（最大使用浓度和最大灌胃容量）测不到ＬＤＳ ｏ时， 则以１０ ｇ／ｋｇ体重、人的可能摄人量的１００倍、或受试物最大耐受量为最高剂量”；—增加“结果判定”内容。自本标准实施之日起，ＧＢ １５１９３． ９－１９９４同时废止。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准起草单位：同济医科大学、上海医科大学。本标准主要起草人：朱清华、柳启沛。本标准于１９９４年首次发布，本次为第一次修订。ＧＢ １５１９３．９－２００３显性致死试验范围 本标准规定了显性致死试验的基本技术要求。本标准适用于评价食品生产、加工、保藏、运输和销售过程中所涉及的可能对健康造成危害的化学、 生物和物理因素的致突变作用和对人体可能产生的危害（检测染色体结构和数量的损伤，但不能检测基因突变和毒性作用），检验对象包括食品添加剂（含营养强化剂）、食品新资源及其成分、新资源食品、辐照食品、食品容器与包装材料、食品工具、设备、洗涤剂、消毒剂、农药残留、兽药残留、食品工业用微生物等。２原理 致突变物可引起哺乳动物生殖细胞染色体畸变，以致不能与异性生殖细胞结合或导致受精卵在着床前死亡，或导致胚胎早期死亡。３试验动物 选用健康动物，符合试验规格，且有合格证号。经生殖能力预试，受孕率应在７０％以上者。雄性成年小鼠（性成熟，体重３０ ｇ以上）或大鼠（性成熟，体重２００ ｇ以上），预先接触受试物，再进行交配。交配用的成年雌鼠，不接触受试物。雌性鼠为雄性鼠的５－６倍量。每组雄鼠一般不少于１５只，雄鼠与雌鼠交配，使每组产生至少３０只受孕雌鼠。剂，及分组 试验至少设３个受试物剂量组。高剂量组应引起动物生育力轻度下降。各组受试物剂量可在１／１０＾－１／３ ＬＤＳ。之间。急性毒性试验给予受试物最大剂量（最大使用浓度和最大灌胃容量）求不出ＬＤＳ。时，则以１０ ｇ／ｋｇ体重、人的可能摄入量的１００倍、或受试物最大给予剂量为最高剂量，再下设２个剂量组，另设溶剂对照组和阳性对照组。阳性对照物可用环磷酞胺（４０ ｍｇ／ｋｇ体重）。雌性动物每组不少于３０只受孕鼠。一般应同时做阳性和溶剂对照组。操作步骤５．１给予受试物５．１．１给予途径：应采用灌胃法，或用喂饲法。５．１．２给予受试物的方法：灌胃法一般一日一次，或一日两次，连续６天或３个月。５．２交配 给予雄鼠受试物后，按雌雄鼠２：１比例同笼交配６天后，取出雌鼠另行饲养。雄鼠则于１天后，再以同样数量的另一批雌鼠同笼交配，如此共进行５批一６批。５．３胚胎检查 以雌雄鼠同笼日算起第１５天一１７天，采用颈椎脱臼法处死雌鼠后，立即剖腹取出子宫，仔细检查、计数，分别记录每一雌鼠的活胎数、早期死亡胚胎数与晚期死亡胚胎数。５．４胚胎鉴别 活胎：完整成形，色鲜红，有自然运动，机械刺激后有运动反应。早期死亡胚胎： 胚胎形体较小，外形不完整，胎盘较小或不明显。最早期死亡胚胎会在子宫内膜上ＧＢ １５１９３．９－２００３隆起如一小瘤。如已完全被吸收，仅在子宫内膜上留一隆起暗褐色点状物。晚期死亡胚胎：成形，色泽暗淡，无自然运动，机械刺激后无运动反应。 ６数据处理受孕率（％）＝孕鼠数Ｘ１００交配雌鼠数（１）（２）（３）（４）总着床数＝活胎数＋早期胚胎死亡数＋晚期胚胎死亡数总着床数平均着床数＝受孕雌鼠数１００早晚期胚胎死亡率（ｏａｆ＝早（晚）期胚胎死亡数Ｘ 总着床数 早期胚胎死亡数（５） 平均早期胚胎死亡数受孕雌鼠数检验、单因素方差分析或秩和检验法，进行统计分 按试验组与对照组动物的上述指标分别用Ｘ２析，以评定受试物的致突变性。７结果判定 根据以上计算出的受孕率、总着床数、早期和晚期胚胎死亡率予以评价。试验组与对照组相比，受孕率或总着床数明显低于对照组；早期或晚期胚胎死亡率明显高于对照组，有明显的剂量反应关系并有统计学意义时，即可确认为阳性结果。若统计学上差异有显著性，但无剂量反应关系时，则须进行重复试验，结果能重复者可确定为阳性。