小麦蛋白质含量测定方法比较

山东农业科学　Ｓｈａｎｄｏｎｇ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　２００６年　第３期　小麦蛋白质含量测定方法比较　李冬梅　。，田纪春¨，翟红梅　，张永祥　（１．山东省作物生物学重点实验室／山东农业大学小麦品质育种室，山东泰安２７１０１８￣　２．德州农校，山东德州２５００１４）　摘要：用凯氏法、不破坏籽粒的ＤＡ７２００法和８６２０近红外法测定蛋白质含量，比较三种蛋白质含量测　定方法的相关性大小，得出可以用ＤＡ７２００近红外法对育种材料进行比较准确的早期预测。快速准确而又不　破坏实验材料。　关键词：８６２０近红外法；ＤＡ７２００近红外法；凯氏法；蛋白质含量；测定　中图分类号：￥５１２；０６５２　文献标识号：Ａ　文章编号：１００１－４９４２（２００６）０３－００８３－０２　小麦品质差异在很大程度上影响其经济价　１．２．１全粉磨制用３１００型全麦粉试验磨。　值，其中蛋白质含量是衡量其加工品质的重要指　１．２．２　凯氏法　用半自动凯氏定氮仪测定全粉　标，测定其含量通常用凯氏定氮法，这种方法具　蛋白质，凯氏定氮法测定的蛋白质含量为氮量乘　有很高的准确度和精密度，但费时费工，其主要实　以５．７（小麦的换算系数）。　验用品强酸强碱也污染环境。近年来研制出的近　１．２．３　８６２０近红外法　用Ｐｅｒｔｅｎ公司８６２０近　红外光谱分析技术已广泛应用于谷物籽粒的品质　红外仪测定全粉蛋白质。　分析和育种材料的筛选工作，早期近红外仪为了　１．２．４　ＤＡ７２００近红外法　用Ｐｅｒｔｅｎ公司　提高测试的准确性，多用谷物的粉样，本研究中所　ＤＡ７２ｏ０近红外仪测定籽粒蛋白质。　用的８６２０近红外法就是其中的一种。随着技术　１．３数据处理　的发展，最近Ｐｅｒｔｅｎ公司制造的ＤＡ７２００近红外　用ＳＰＳＳＩ３．０软件。　仪能在各种自然物理状态下快速大量测定样品成　分含量而不破坏籽粒，省略了凯氏定氮法所必需　２结果与分析　的繁琐的化学前处理，也简化了８６２０近红外仪法　２．１　三种方法的籽粒蛋白质含量测定　的种子粉碎过程。本实验用凯氏法、ＤＡ７２００近　由表１可以看出，凯氏法测定的全粉蛋白质　红外法、８６２０近红外法测定蛋白质含量，以比较　平均含量为１３．３　９，５，标准差１．２６８０，最大值　它们的测量准确性，确定一种更准确有效而快速　１８．９　９，６，最小值１１．２　９，６｝ＤＡ７２００近红外法测定的　的方法，减少工作量，方便品质育种中早代大量分　籽粒蛋白质平均含量为１５．２　９／５，最大值１８．５　９，５，　离变异材料的选择。　最小值１２．９％，标准差１．１２０８９；８６２０近红外法　１材料与方法　测定的全粉蛋白质平均含量为１２．９　９，６，标准差　１．０４０７１，最大值１６．２　，最小值１０．５％。其中　１．１试验材料　全国各地及美国引进品种共６Ｏ个材料，每个　ＣＩＩ　７９凯氏法测定的蛋白质含量为１８．９　９，６，与其　他５９份材料的差别太大，需重新测定。ＤＡ７２００　材料称取１　０００　ｇ和１００　ｇ磨制全粉，磨粉前用四　分法取部分样品用ＤＡ７２００近红法测定籽粒的蛋　测定的平均值比凯氏法和８６２０近红外法均值大，　白质含量。　原因可能与ＤＡ７２００近红外法测定的是其完整的　１．２测定方法　籽粒。据研究颗粒大小影响其吸光度大小。　收稿日期：２００６—０３—２４　作者简介：李冬梅（１９６９一），女，在职硕士研究生。＊通讯作者　８３　维普资讯 http://www.cqvip.com

表１　三种方法的籽粒蛋白质含量测定结果　红外法的相关系数Ｒ＝０．９１４一，极显著相关。　ＤＡ７２００近红外法可以不破坏籽粒而直接快速地　测定籽粒蛋白质的含量，所以如果对籽粒蛋白质　含量进行早期选择的话，完全可以参考ＤＡ７２００　近红外法蛋白质含量测定结果，测过的籽粒还可　以继续播种，需要的样品量甚至可以少到一粒，非　常方便和快速。　表２　三种方法全粉蛋白质含量测定　的相关性分析　３　结论　三种籽粒蛋白质含量测定方法都具显著相关　性，完全可以用ＤＡ７２００近红外法对样品籽粒蛋　白质进行早期预测，而且用过的籽粒不影响播种，　是一种准确快速而有效的方法。可用于大批量种　质资源的蛋白质含量测定，可对育种中Ｆ。代大量　分离变异株进行有效的早期测定预评。　参考文献：　２．２三种方法全粉蛋白质含量测定的相关性分　［１３　任红波．利用近红外投射光谱技术测定小麦品质性状的研　析　究［Ｊ］．麦类作物学报，２００３，２３（３）。卜４．　由表２看出，凯氏法与８６２０近红外法测定结　［２３　任红波．近红外仪快速测定小麦蛋白及硬度［１３．黑龙江农　果的相关系数Ｒ＝０．６４６一，达极显著水平；与　业科学、２００３，３。１７—１８．　ＤＡ７２００近红外法测定的相关系数Ｒ一０．６２５一，　［３］　魏益民，康立宁，欧阳韶晖，等．小麦品种蛋白质品质性状　也极显著相关。而８６２０近红外法与ＤＡ７２００近　稳定性研究［Ｊ］．西北植物学报，２００２，２２（１）。９０—９６．　（上接第７８页）　ｄｕｒｉｎｇ　ｓｉｎｇｌｅ　ｌＶＦ　ｏｆ　ｂｏｖｉｎｅ　ｏｏｃｙｔｅｓ　ｆｒｏｍ　ｄｉｓｓｅｃｔｅｄ　ｆｏｌｌｌｄｅｓ　Ｉ　外受精研究进展及其在家畜育种中的应用［Ｊ］．黄牛杂志，　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｅｓｔｒｏｕｓ　ｃｙｃｌｅ　ｓｔａｇｅ，ｆｏｌｌｉｃｌｅ　ｓｉｚｅ　ａｎｄ　１９９８，２４（４）。５８－６１．　ａｔｒｓｉａ［Ｊ］．Ｍｏ１．Ｒｅｐｏｒｔ　Ｄｅｖ．，１９９９，５３ｌ４５１—４５８．　［６］Ｆｉｇｕｄｒｅｄｏ　Ｊ　Ｒ，ｅｔ　８１．ＥｘｔｒａｃｅＵｕｈｒ　ｍａｔｒｉｘ　ｐｒｏｔｄｎｓ　ａｎｄ　ｂａｓｅｍｅｎｔ　［１１］秦鹏春．哺乳动物胚胎学［Ｍ］．北京。科学出版社，２００１，　ｍｅｍｂｒａｎｅ，ｔｈｅｉｒ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｂｏｖｉｎｅ　ｏｖａｒｉｅｓ　ａｎｄ　ｓｉｇｎｉｉｆ—　４４８—４４９．　ｃａｎｔ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ　ｏｆ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｐｒｅａｎｔｒａｌ　ｆｏｌｌｉｃｌｅｓ［Ｊ］．　［１２］Ｎａｇａｉ　Ｔ．Ｔｈｅ　ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ　Ｔｈｅｒｉｏｇｅｎｏｌｏｇｙ，１９９６，４５Ｉ８８９—８９５．　ｆｏｒ　ｂｏｖｉｎｅ　ａｎｄ　ｐｏｒｃｉｎｅ　ｏｏｃｙｔｅｓＦＪ１．Ｔｈｅｒｉｏｇｅｎｏｌｏｇｙ，２００１，　［７］徐照学，朱小玲，：Ｅ－－耀，等．山羊卵泡卵母细胞体外受精及　５５　Ｉ　１２９１－１３０１．　受精卵的体外发育［Ｊ］．中国兽医学报，１９９８，１８（５）。５０６—　［１３］Ｌｉｕ　Ｒ　Ｈ，Ｌｉ　Ｙ　Ｈ，Ｊｉａｏ　Ｌ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ　ａｎｄｉｎｔｒａ—　５０９．　ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｆａｃｔｏｒｓ　ａｆｆｅｃｔｉｎｇ　ｎｕｃｌｅａｒ　ａｎｄ　ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ　ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ　［８］陈晓宇，刘　东，李青旺，等．猪卵巢卵母细胞的收集和体　ｏｆ　ｐｏｒｃｉｎｅ　ｏｏｃｙｔｅｓ　ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓｉｚｅｓ　ｏｆ　ｆｏｌｌｉｄｅｓ　外成熟培养［Ｊ］．上海农业学报，２００３，１９（２）。７５．７８．　［Ｊ］．Ｚｙｇｏｔｅ，２００２，１０　Ｉ　２５３—２６０．　［９］柏家林，关红梅．牛卵母细胞体外成熟和体外受精技术的研　［１４］Ｐｔａｋ　Ｇ，Ｌｏｉ　Ｐ，Ｄａｔｔｅｎａ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｏｆｆｓｐｒｉｎｇ　ｆｒｏｍ　ｏｎｅ－ｍｏｎｔｈ－　究进展［Ｊ］．国外畜牧科技，１９９８，４。２７—３１．　ｏｌｄ　ｌａｍｂｓ　Ｉ　ｓｔｕｄｉｅｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ　ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｐｒｅｐｕ－　［１Ｏ］Ｈａｇｅｍａｎｎ　Ｌ　Ｊ，Ｂｅａｕｍｏｎｔ　Ｓ　Ｅ，Ｂｅｒｇ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｂｅｒｔａｌ　ｏｏｃｙｔｅｓ￣１］．Ｂｉｏ１．Ｒｅｐｒｏｄ．，１９９９，６１　Ｉ１５６８—１５７４．　８４