肺血管病杂志２０１０年３月第２９卷第２期 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｃａｒｄｉ０ｖａｓｃｕｌａｒ＆Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｍａｒｃｈ ２０１０．Ｖｏ１．２９．Ｎｏ．２ １４５ ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００７－５０６２．２０１０．０２．０２０ 基础研究・ 厦病毒载体在大鼠颈动脉球囊损伤模型 中的应用及观察 杨简 江洪 李万强 陈思思 陈静徐盛开 王继春 （摘要］ 目的：研究携带绿色荧光蛋白（Ｇｒｅｅｎ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ，ＧＦＰ）的慢病毒转染球囊损伤大 鼠颈动脉的效率和可行性，为利用慢病毒载体介导的基因治疗预防血管再狭窄奠定基础。方法：将携带 ＧＦＰ的慢病毒载体（ｐＧＣ—ＬＶ—ＧＦＰ载体）和慢病毒包装质粒供转染２９３Ｔ细胞，完成慢病毒颗粒包装及滴 度测定。包装产生的慢病毒Ｌｅｎｔｉ—ＧＦＰ转染至球囊损伤的大鼠颈动脉。术后２８ ｄ，损伤及病毒转染血管 段标本分别行荧光显微镜、光镜检查，评估慢病毒的转染效率及内膜增生情况，并与假手术组（Ｓｈａｍ 组）、ＰＢＳ对照组进行比较。结果：经包装产生的Ｌｅｎｔｉ—ＧＦＰ滴度为２×１０ Ｔｕ／ｍＬ；术后２８ ｄ，Ｓｈａｍ组与 ＰＢＳ组血管中膜弹力层仅见微弱的自发性绿色荧光，而Ｌｅｎｔｉ—ＧＦＰ组动脉壁全层可见较强的绿色荧光分 布；ＰＢＳ组与Ｌｅｎｔｉ—ＧＦＰ转染组大鼠损伤的颈动脉均可见明显内膜增生，内膜和中膜面积之比差异无统 计学意义。结论：Ｌｅｎｔｉ—ＧＦＰ成功转染至球囊损伤的大鼠颈动脉，并能维持目的基因稳定长期的表达，是 血管再狭窄基因治疗的理想载体。 ［关键词］慢病毒载体；颈动脉损伤；基因治疗；再狭窄；大鼠 ［中图分类号］Ｒ５４３．４ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００７－５０６２（２０１０）０２－１４５－０４ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒ ｉｎ ｒａｔ ｃａｒｏｔｉｄ ａｒｔｅｒｙ ｂａｌｌｏｏｎ ｉｎｊｕｒｙ ＹＡＮＧ Ｊｉａｎ，ＪＩＡＮＧ Ｈｏｎｇ ＬＩ Ｗａｎｑｉａｎｇ，ＣＨＥＮ Ｓｉｓｉ ＣＨＥＮ Ｊｉｎｇ，ＸＵ Ｓｈｅｎｇｋａｉ，ＷＡＮＧ Ｊｉｃｈｕｎ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＣａｒｄｉｏｌｏｇｙ，Ｃａｒ— ｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｒｅｎｍｉｎ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｆｏ Ｗｕｈａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｈａｎ ４３００６０，Ｃｈｉｎａ ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｔｏ ｄｅｌｉｖｅｒ ｇｒｅｅｎ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ（ＧＦＰ）ｉｎｔｏ ａ ｂａｌｌｏｏｎ—ｄａｍａｇｅｄ ｒａｔ ｃａｒｏｔｉｄ ａｒｔｅｒｙ，ｗｈｉｃｈ ｃａｎ ｐｒｏｖｉｄｅ ａ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｒｅｓｔｅｎｏ— ｓｉｓ ａｆｔｅｒ ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｃｏｒｏｎａｒｙ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ（ＰＣＩ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ｐＧＣ—ＬＶ—ＧＦＰ ｖｅｃｔｏｒ ｗａｓ ｃｏｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｐａｃｋ— ａｇｉｎｇ ｐｌａｓｍｉｄｓ ｉｎｔｏ ２９３Ｔ ｃｅｌｌｓ ｂｙ Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００．Ｔｈｅ ｔｉｔｅｒ ｏｆ ｖｉｒｕｓ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓ— ｓｉｏｎ ｏｆ ＧＦＰ．Ｔｈｅ ｃａｒｏｔｉｄ ａｒｔｅｒｉｅｓ ｏｆ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｉｎｊｕｒｅｄ ｂｙ ｂａｌｌｏｏｎ ｃａｔｈｅｔｅｒ ａｎｄ ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｂｙ ｉｎｃｕｂａｔｅｄ ｗｉｔｈ １００ ｌ Ｌｅｎｔｉ—ＧＦＰ ｏｒ ＰＢＳ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｆｏｒ ３０ ｍｉｎｕｔｅｓ．Ｔｈｅ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｅｕｔｈａｎｉｚｅｄ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｅｅ ａｎｄ ｍｏｒｐｈｏｍｅｔｒｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｔ ２８ ｄａｙ ａｆｔｅｒ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ ｔｉｔｅｒ ｏｆ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ ｌｅｎｔｉｖｉｕｒｓ ｗａｓ ２×１０ ＴＵ／ｍ１．Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ Ｓｈａｍ ａｎｄ ＰＢＳ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐｓ，ｔｈｅ ｓｔｒｏｎｇ ｇｒｅｅｎ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｗａｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ａｌｌ ｌａｙｅｒｓ ｏｆ Ｌｅｎｔｉ—ＧＦＰ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｃａｒｏｔｉｄ ａｒｔｅｒｉｅｓ．Ｍｅａｎｗｈｉｌｅ，ｏｂｖｉｏｕｓ ｎｅｏｉｎｔｉｍａｌ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｗａｓ ａｌｓｏ ｆｏｕｎｄ ｉｎ ｔｈｅ Ｌｅｎｔｉ—ＧＦＰ ａｎｄ ＰＢＳ ｇｒｏｕｐｓ；Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｎｏ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｌｅｎｔｉ—ＧＦＰ ｃａｎ ｓｔｅａｄ— ｉｌｙ ｉｎｆｅｃｔ ｂａｌｌｏｏｎ—ｉｎｊｕｒｅｄ ｃａｒｏｔｉｄ ａｒｔｅｒｉｅｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｅｆｉｆｃｉｅｎｃｙ ｉｓ ｃｏｎｓｉｄｅｒａｂｌｅ ｈｉｇｈ，ｗｈｉｃｈ ｍａｋｅｓ ｔｈｅ ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ ｂｅｃｏｍｅ ａ ｐｒｏｍｉｓｉｎｇ ｖｅｃｔｏｒ ｆｏｒ ｆｕｔｕｒｅ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｎ ｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓ ａｆｔｅｒ ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｃｏｒｏｎａｒｙ ｉｎｔｅｒｖｅｎ— ｔｉｏｎ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］Ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒ；Ｃａｒｏｔｉｄ ｉｎｊｕｒｙ；Ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ；Ｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓ；Ｒａｔｓ 经皮冠状动脉介入治疗（ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｃｏｒｏｎａｒｙ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ，ＰＣＩ）术后血管内膜增生导致的再狭窄， 基金项目：国家自然科学基金（３０７７０８４９） 作者单位：４３００６０武汉武汉大学人民医院心内科一武汉大学心血 严重限制了其远期疗效，成为该项技术推广与发展 管病研究所（杨简江洪陈思思陈静徐盛开王继春），泌尿 的重要制约因素＿１ 。大鼠颈动脉球囊损伤模型已 外科（李万强） 被公认为研究血管损伤后再狭窄的首选动物模型， 通讯作者 为深入研究其病理生理机制提供了良好的工具 ４。。 １４６ ２０１０年３月第２９卷第２期Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ＆Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｍａｒｃｈ ２０１０，Ｖｏ１．２９，Ｎｏ．２ 近年来，随着生物技术的发展，基因治疗有望成为治 疗心血管疾病的有效手段 。其中，保持稳定高效 的基因转染最为关键。慢病毒载体不仅能整合入宿 主细胞基因组，持久稳定表达外源基因，而且具有转 移基因片段容量大、免疫反应小等优点 。目前 关于慢病毒载体用于血管再狭窄的研究还鲜有报 道，因此本研究旨在通过将携带绿色荧光蛋白 （ｇｒｅｅｎ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ，ＧＦＰ）的慢病毒载体转染 颈外动脉切口逆行插入颈总动脉，直至距颈外动脉 分叉处２．５ ｃｍ，向球囊内注人生理盐水充盈球囊， 将球囊旋转并来回抽动，重复操作３次，以剥脱内 膜。退出球囊，将１００ ｔｘＬ ＰＢＳ或Ｌｅｎｔｉ－ＧＦＰ稀释液 （１ Ｘ １０ ＴＵ／ｍＬ）缓慢注人损伤动脉节段（约２ ｃｍ）， 局部作用３０ ｍｉｎ，结扎颈外动脉，松开血管夹，恢复 颈总至颈内动脉血流。缝合颈部切口，肌注青霉素 ２０万ｕ以预防感染。Ｓｈａｍ组除不插入球囊导管 至球囊损伤的大鼠颈动脉，观察其转染的可行性及 相关条件，为后期利用慢病毒载体进行基因治疗提 供实验依据。 材料与方法 材料健康雄性标准膳食（ＳＤ）大鼠２４只，体 质量３５０～４００ ｇ，购自华中科技大学同济医学院动 物实验中心；１．５ ｍｍ ｘ ２０．０ ｍｉｌｌ球囊导管（Ｃｏｒｄｉｓ 公司）；显微手术器械（上海医疗器械有限公司手术 器械厂）；低分子肝素钠注射液（齐鲁制药有限公 司）；携带ＧＦＰ慢病毒载体系统（ｐＧＣ—ＬＶ—ＧＦＰ载 体、ｐＨｅｌｐｅｒ １．０载体和ｐＨｅｌｐｅｒ ２．０载体三质粒组 成）购自Ｇｅｎｅｃｈｅｍ公司；Ｏｐｔｉ—ＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ公司）；ｌｉ— ｐｏｆｅｃｔａ－ｍｉｎｅ ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司）；２９３Ｔ细胞株 （中科院上海细胞所）。 慢病毒包装及滴度测定 携带ＧＦＰ的ｐＧＣ． ＬＶ—ＧＦＰ载体２Ｏ Ｉｘｇ，ｐＨｅｌｐｅｒ １．０载体１５ ｇ，ｐＨｅｌｐ— ｅｒ２．０载体１０ 与相应体积的Ｏｐｔｉ．ＭＥＭ混合均 匀，调整总体积为２．５ ｍＬ，按Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司Ｌｉｐｏ— ｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２ ０００使用说明共转染至７０％～８０％融合 的２９３Ｔ细胞培养液中，混匀，于３７℃，５％ＣＯ 细胞 培养箱中培养。８ ｈ后倒去含有转染混和物的培养 基，更换完全培养基，继续培养４８ ｈ，收集富含慢病 毒颗粒的细胞上清液，对其高滴度的慢病毒浓缩液， 采用逐孔稀释滴度测定法，在２９３Ｔ细胞中测定并标 定病毒滴度，单位为ＴＵ／ｍＬ。 大鼠颈动脉球囊损伤模型及慢病毒转染 ＳＤ 大鼠随机分为假手术组（Ｓｈａｍ组，ｎ＝６）、ＰＢＳ对照 组（ＰＢＳ组，ｎ：９）、慢病毒转染组（Ｌｅｎｔｉ—ＧＦＰ组，ｎ ＝９）。大鼠腹腔注射３％戊巴比妥钠（３０ ｍｓ，／ｋｇ）麻 醉，取颈部正中切口，切开皮肤、筋膜，暴露左颈总动 脉、颈外动静脉及颈内动脉。为避免急性血栓形成， 球囊损伤前３ ｍｉｎ经颈外静脉给予１００ Ｕ／ｋｇ低分子 肝素钠抗凝。用显微血管夹夹闭左颈总动脉近心端 和颈外、颈内动脉远心端，临时阻断血流。在颈外动 脉血管夹近心侧剪一斜形切口，将１．５Ｆ球囊导管从 外，其余操作同手术组。 慢病毒在损伤动脉壁转染效率的测定球囊损 伤及慢病毒转染２８ ｄ后处死各组动物２只，游离出 转染慢病毒血管节段，行鸟氨酸转氨甲酰酶（ＯＴＣ） 包埋、冰冻切片，切片厚度５“ｍ。置于荧光显微镜 下观察ＧＦＰ表达情况，评价慢病毒在损伤动脉壁的 转染情况。 病理形态学观察标本经４％多聚甲醛固定、 脱水及石蜡包埋，切成厚４ ｍ切片。苏木精一伊红 染色（ＨＥ）染色，观察血管横切面新生内膜增生情 况。每份标本非连续切片５张，采用Ｉｍａｇｅ—Ｐｒｏ Ｐｌｕｓ ５．０专业图像分析软件测定血管内膜和中膜面积， 并计算内膜和中膜面积比（ｉｎｔｉｍａｆｍｅｄｉａ，Ｉ／Ｍ），测 量采用单盲法。 统计学分析 采用ＳＰＳＳ１３．０软件包进行统计 分析，计量资料以均数±标准差表示，数据比较用单 因素方差分析及ｑ检验，以Ｐ＜０，０５为差异有统计 学意义。 结 果 １．慢病毒载体的包装及滴度测定慢病毒包装 质粒和携带ＧＦＰ的ｐＧＣ—ＬＶ．ＧＦＰ载体（图１）供转染 ２９３Ｔ细胞，细胞生长状态良好，提示慢病毒包装成 功。收集合成的慢病毒液感染２９３Ｔ细胞，根据公 式：表达ＧＦＰ的细胞数×稀释倍数＝慢病毒滴度， 测定滴度为２×１０ ＴＵ／ｍＬ。 图１ ｐＧＣ・ＬＶ—ＧＦＰ载体图谱 １５６ ２０１０年３月第２９卷第２期Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ＆Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｍａｒｃｈ ２０１０，Ｖｏ１．２９ Ｎｏ．２ ｒｅｏｐｅｒａｔｉｖｅ ｃａｒｄｉｏｔｈｏｒａｃｉｃ ｓｕｒｇｅｒｙ．Ａｎｎ Ｔｈｏｒａｃ Ｓｕｒｇ， ２００８，８５：１２３９—１２４５． ｗｊｔｈ ｃｏｒｏｎａｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ ｎｏｒｍａｌ ｂｌｏｏｄ ｐｒｅｓｓｕｒｅ：ｔｈｅ ＣＡＭＥＬＯＴ ｓｔｕｄｙ：ａ ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｔｒｉ１．ＪＡＭＡ，ａ ２００４，２９２：２２１７—２２２５． ［２４］ Ｕｖａ ＭＳ，Ｍａｔｉａｓ Ｆ，Ｍｅｓｑｕｉｔａ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｓｉｘｔｅｅｎ—ｓｌｉｃｅ ｍｕｌｔｉｄｅｔｅｃｔｏｒ ｃｏｍｐｕｔｅｄ ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ ｆｏｒ ｐａｔｅｎｃｙ ｅ— ［２９］Ｎｉｓｓｅｎ ＳＥ，Ｎｉｅｈｏｌｌｓ ＳＪ，Ｗｏｌｓｋｉ Ｋ，ｅｔ １ａ．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｐｉｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ ｖｓ ｇｌｉｍｅｐｉｒｉｄｅ ｏｎ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ：ｔｈｅ ｖａｌｕａｔｉｏｎ ａｆｔｅｒ ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｒｔｅｒｙ ｂｙｐａｓｓ ｓｕｒｇｅｒｙ．Ｊ Ｃａｒｄ Ｓｕｒｇ，２００８，２３：１７－２２． ＨＳ，Ｇｉｌｌ ＪＡ，Ｂａｋｓｈｉ ＳＳ．Ｃａｎ ｗｅ ｐｅｒｆｏｒｍ ｃｏｒｏｎａｒｙ ［２５］ Ｂｅｄｉａｒｔｅｒｙ ｂｙｐａｓｓ ｇｒａｆｔｉｎｇ ｏｎ ｔｈｅ ｂａｓｉｓ ｏｆ ｃｏｍｐｕｔｅｄ ｔｏｍｏ— ｇｒａｐｈｉｃ ａｎｇｉｏｇｒａｐｈｙ ａｌｏｎｅ？Ａ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｗｉｔｈ ｃｏＤｖｅｎ— ＰＥＲＩＳＣＯＰＥ ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｔｒｉ１．ＪＡＭＡ．２ｏ０８，ａ ２９９・１５６ｌ一１５７３． ［３０］刘群，赵冬，王薇．冠心病二级预防实施研究进展． ｔｉｏｎａｌ ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｎｇｉｏｇｒａｐｈｙ．Ｅｕｒ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｔｈｏｒａｃ Ｓｕｒｇ， 心肺血管病杂志，２００７，２６：１９０—１９２． ２００８，３３：６３３－６３８． ［３１］Ｓｈａｈ ＳＪ，Ｗａｔｅｒｓ ＤＤ，Ｂａｒｔｅｒ Ｐ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ ｌｉｐｉｄ— ［２６］ Ｔｏｎｉｎｏ ＰＡ，ｄｅ Ｂｒｕｙｎｅ Ｂ，Ｐｉｊｌｓ ＮＨ，ｅｔ ａ１．Ｆｒａｃｔｉｏｎａｌ ｌｏｗｅｒｉｎｇ ｗｉｔｈ ａｔｏｒｖａｓｔａｔｉｎ ｆｏｒ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｉｎ ｐａ・ ｌｆｏｗ ｒｅｓｅｒｖｅ ｖｅｒｓｕｓ ａｎｇｉｏｇｒａｐｈｙ ｆｏｒ ｇｕｉｄｉｎｇ ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｔｉｅｎｔｓ ａｆｔｅｒ ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｒｔｅｒｙ ｂｙｐａｓｓ ｓｕｒｇｅｒｙ．Ｊ Ａｍ Ｃｏｉｌ ｃｏｒｏｎａｒｙ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ，２００９，３６０： Ｃａｒｄｉｏ１．２００８，５ｌ：１９３８一ｌ９４３． ２１３－２２４． ［３２］Ｊａｂｅｒ ＷＡ，Ｌｅｎｎｏｎ ＲＪ，Ｍａｔｈｅｗ Ｖ，ｅｔ １ａ．Ａｐｐｌｉｃａｉｔｏｎ ｏｆ ［２７］ Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ－Ｇｒａｎｉｌｌｏ ＧＡ，Ａｇｏｓｔｏｎｉ Ｐ，Ｇａｒｃｉａ—Ｇａｒｃｉａ ＨＭ， ｅｖｉｄｅｎｃｅ．ｂａｓｅｄ ｍｅｄｉｃａｌ ｔｈｅｒａｐｙ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｉｍ— ｅｔ ａ１．Ｍｅｔａ—ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔｕｄｉｅｓ ａｓｓｅｓｓｉｎｇ ｔｅｍｐｏｒａｌ ｐｒｏｖｅｄ ｏｕｔｃｏｍｅｓ ａｆｔｅｒ ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｃｏｒｏｎａｒｙ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｃｏｒｏｎａｒｙ ｐｌａｑｕｅ ｖｏｌｕｍｅ ｕｓｉｎｇ ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ ａｎｄ ｉｓ ａ ｖａｌｉｄ ｑｕａｌｉｔｙ ｉｎｄｉｃａｔｏｒ．Ｊ Ａｍ Ｃｏｉｌ Ｃａｒｄｉｏ１． ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ．Ａｍ Ｊ ＣａｒｄｉｏＩ，２００７，９９：５－１０． ２００５，４６：１４７３—１４７８． ［２８］ Ｎｉｓｓｅｎ ＳＥ，Ｔｕｚｃｕ ＥＭ，Ｌｉｂｂｙ Ｐ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｎｔｉｈｙ— （２００９—１ｌ一０５收稿；２００９—１１—１８修回） ｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ ａｇｅｎｔｓ ｏｎ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｅｖｅｎｔｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ （上接第１４７页） ｃｅｌｌｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｐｒｉｍａｒｙ ｎｏｎ—ｄｉｖｉｄｉｎｇ ｃｅｌｌｓ．Ｍｉｃｒｏｂｅｓ Ｉｎ・ ［２］Ｋｉｅｒｎａｎ ＴＪ，Ｋｉｅｒｎａｎ ＧＤ，Ｙａｎ ＢＤ．Ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｔｒｅｙｒ ｆｅｃｔ，２００４，６：７６—８５． ｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓ：ａ ｐａｒａｄｉｇｍ ｏｆ ｃｕｒｒｅｎｔ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ． ［８］ 黄琼，余振球．丙丁酚防治经皮冠状动脉介入治疗 Ｍｉｎｅｒｖａ Ｃａｒｄｉｏａｎｇｉｏｌ，２００９，５７：７７—９４． 术后再狭窄的研究进展．心肺血管病杂志，２００９， ［３］ Ｗａｔａｎａｂｅ Ｔ，Ｍｉｙａｈａｒａ Ｙ，Ａｋｉｓｈｉｔａ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ２８：３７５—３７７． ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｌｏｗ—ｄｏｓｅ ｅｓｔｏｒｇｅｎ ｏｎ ｎｅｏｉｎｔｉｍａｌ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｆｔｅｒ ［９］Ｊｏｎｅｒ Ｍ，Ｆｉｎｎ ＡＶ，Ｆａｒｂ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｄｒｕｇ－ｅ— ｂａｌｌｏｏｎ ｉｎｊｕｒｙ ｏｆ ｒａｔ ｃａｒｏｔｉｄ ａｒｔｅｒｙ．Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ， ｌｕｔｉｎｇ ｓｔｅｎｔｓ ｉｎ ｈｕｍａｎｓ：ｄｅｌａｙｅｄ ｈｅａｌｉｎｇ ａｎｄ ｌａｔｅ ｔｈｒｏｍ－ ２００４，５０２：２６５－２７０． ｂｏｒｉｃ ｒｉｓｋ．Ｊ Ａｍ Ｃｏｌｌ Ｃａｒｄｉｏｌ，２００６，４８：１９３－２０２． ［４］Ｍｕｒｔｈｙ ＳＮ，Ｓｕｋｈａｎｏｖ Ｓ，ＭｃＧｅｅ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｓｕｌｉｎ ［１Ｏ］颜红兵，刘景山，张坚，等．直接冠状动脉介入治疗 ａｒｇｉｎｅ ｒｅｄｕｃｅｓ ｃａｒｏｔｉｄ ｉｎｔｉｍａｌ ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ ａｆｔｅｒ ｂａｌｌｏｏｎ 支架内血栓形成的发生率、危险因素及预后．中国介 ｃａｔｈｅｔｅｒ ｉｎｊｕｒｙ ｉｎ Ｚｕｃｋｅｒ ｆａｔｔｙ ｒａｔｓ ｐｏｓｓｉｂｌｙ ｂｙ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ 入心脏病学杂志，２００４，１２：１３５—１３８． ｉｎ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ．Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ，２００９，３３０：１—８． ［１１］Ｔｕｌｉｓ ＤＡ，Ｍｎｊｏｙａｎ ＺＨ，Ｓｃｈｉｅｓｓｅｒ ＲＬ，ｅｔ ａ１．Ａｄｅｎｏｖｉ－ ［５］Ｇａｆｎｅｙ ＭＭ，Ｈｙｎｅｓ ＳＯ，Ｂａｒｒｙ Ｆ，ｅｔ ａ１．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｒａｔ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｏｆ ｆｏｒｔｉｌｉｎ ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ ｎｅｏｉｎｔｉｍａ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ：ｃｕｒｒｅｎｔ ｓｔａｔｕｓ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｐｏｔｅｎｔｉａ１． ｔｈｒｏｕｇｈ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ ｐｒｏ－ Ｂｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｅｏｌ，２００７，１５２：１７５—１８８． ｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ． Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００３，１０７： ［６］Ｃｏｓｔｅｌｌｏ Ｅ，Ｍｕｎｏｚ Ｍ，Ｂｕｅｔｔｉ Ｅ，ｅｔ ａ１．Ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｉｎ． ９８—１０５． ｔｏ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ａｎｄ ｕｎｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｂｙ ＨＩＶ・・１－－ ［１２］Ｓｕｍｉｍｏｔｏ Ｈ，Ｙａｍａｇａｔａ Ｓ，Ｓｈｉｍｉｚｕ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｇｅｎｅ ｔｈｅｒ． ｄｅｒｉｖｅｄ ｉｅｎｔｉｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒｓ． Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ，２０００．７： ａｐｙ ｆｏｒ ｈｕｍａｎ ｓｍａｌｌ—ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｂｙ ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ５９６－６ｏ４． ｏｆ Ｓｋｐ一２ ｗｉｔｈ ｖｉｒａｌｌｙ ｍｅｄｉａｔｅｄ ＲＮＡ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ．Ｇｅｎｅ ［７］Ｎｉｓｈｉｔｓｕｊｉ ＨｆＩｋｅｄａ Ｔ，Ｍｉｙｏｓｈｉ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｔｈｅｒ，２００５，１２：９５—１００． ｓｍａｌｌ ｈａｉｒｐｉｎ ＲＮＡ ｂｙ ｌｅｎｆｉｖｉｍｓ－ｂａｓｅｄ ｖｅｃｔｏｒ ｃｏｎｆｅｒｓ ｅｆ－ （２００９—１２—２４收稿；２００９—１２—３０修回） ｉｆｃｉｅｎｔ ａｎｄ ｓｔａｂｌｅ ｇｅｎｅ－－ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＨＩＶ・－１ ｏｎ ｈｕｍａｎ
