．－——２９０．．—— 江苏农业科学２０１３年第４１卷第７期 周玮，徐文君，颜春荣，等．全自动固相萃取一气质联用测定酒中氨基甲酸乙酯［Ｊ］．江苏农业科学，２０１３，４ｌ（７）：２９０—２９１ 全自动固相萃取一气质联用测定酒中氨基甲酸乙酯 周玮，徐文君，颜春荣，徐春祥 （江苏省产品质量监督检验研究院食品检测中心，江苏南京２１０００７） 摘要：建立了１种用于测定酒中氨基甲酸乙酯含量的全自动固相萃取一气质联用的检测方法，并对测定方法进行 了研究。结果表明：选用ＤＢ一２２５ＭＳ（６０ Ｉｎ ｘ０．２５０ ｍｍ×０．２５ ｍ）毛细管色谱柱，在ＳＩＮ模式下选择定性离子为ｍ／ｚ ６２、ｍ／ｚ ７４、ｍ／ｚ ８９，定量离子为ｍ／ｚ ６２可以较好地对酒中的氨基甲酸乙酯进行分析。试验所得检测方法在含量ｌ０— １００ Ｌ内的线性关系良好，相关系数为０．９９９ １，加标回收率为８１．２％，重复进样６次的ＲＳＤ为０．３６％，检出限为 １ ｇ／Ｌ，因此可被应用于测定市售的几种酒类中的氨基甲酸乙酯。 关键词：酒；氨基甲酸乙酯；固相萃取；气质联用 中图分类号：ＴＳ２０７．３ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００２—１３０２（２０１３）０７—０２９０—０２ 氨基甲酸乙酯（ｅｔｈｙｌ ｃａｒｂａｍａｔｅ，ＥＣ；又称ｕｒｅｔｈａｒｌｅ）早在 １９４３年就被证实是一种致癌物质…。研究表明，对于啮齿类 动物，ＥＣ是一种多位点致癌物，可导致啮齿类动物肺癌、淋巴 １．１试验仪器 ７８９０Ａ一５９７５Ｃ气质联甩仪（美国安捷伦）；Ｐｒｅｖａｌ ＳＰＥ ３０４全自动固相萃取仪（Ｐｏｌｙｔｅｃｈ）；离心机；氮吹仪；涡旋混 匀器。 １．２试验试剂 癌、肝癌和皮肤癌等疾病，并且发现乙醇对ＥＣ的致癌性有促 进作用 。１９７１年，Ｌｏｆｒｏｔｈ和Ｇｅｊｖ￣ｌｌ在葡萄酒中发现了ＥＣ； １９７６年，Ｏｕｇｈ在酸乳酪和葡萄酒中检测到了Ｅｃ “］。此后， 在２０世纪７Ｏ一８０年代，世界各国的研究学者先后在蒸馏酒、 氨基甲酸乙酯、正己烷（色谱纯）、甲醇（色谱纯）、二氯甲 烷（色谱纯），均购自国药集团；硅藻土固相萃取柱ＥＣ２０００６， 购自天津博纳艾杰尔科技有限公司。 １．３标准曲线的绘制 白兰地、威士忌、酱油和面包等发酵饮料和食品中检测到了 ＥＣ。这些发现引起了各国政府对发酵食品中ＥＣ含量的重 视，世界卫生组织也提议规定酒类饮料中ＥＣ的限量标准。 １９８５年，加拿大卫生与预防部门（Ｈｅａｌｔｈ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ Ｂｒａｎｃｈ ｏｆ Ｃａｎａｄａ）对乙醇饮料中的ＥＣ含量制定了强制性限量标准：佐 餐葡萄酒３Ｏ ｇ／Ｌ，加强葡萄酒１００ ｇ／Ｌ，蒸馏酒１５０ ｇ／Ｌ， 烈性酒和水果白兰地４００ ｇ／Ｌ，日本清酒１００ ｇ／Ｌ。在随后 准确称取１００ ｎａｇ氨基甲酸乙酯于１００ ｍＬ容量瓶中，先 用甲醇溶解再定容，即得浓度为１．０ ｍｅ，／ｍＬ的储备液，存放 于冰箱中备用。取１．０ ｍｇ／ｍＬ储备溶液，分别用甲醇稀释成 ｌ０、２０、５０、１００ ｇ／Ｌ的使用液。以氨基甲酸乙酯含量为横坐 标、峰面积为纵坐标制作标准曲线。 １．４试验条件 的１９８８年，美国食品和药品管理局（ＵＳ ＦＤＡ）、美国葡萄酒研 究所和美国酒商协会制定了有关葡萄酒中ＥＣ含量的非强制 性标准：１９８８年以后生产的佐餐葡萄酒（乙醇度≤１４％）中 Ｅｃ含量不能超过１５ Ｌ，１９８９年以后生产的甜葡萄酒（乙 醇度≥１４％）中Ｅｃ含量不能超过６０ ｇ／Ｌ。ＦＡＯ／ＷＨＯ食品 １．４．１色谱条件色谱柱：ＤＢ一２２５ＭＳ（６０ ｎｌ×０．２５０ ｍｍ× ０．２５ ｍ）；进样口温度２３０℃，柱温程序：初温６Ｏ℃，保持 ５ ｒａｉｎ，然后以１０￣２／ｍｉｎ的速度升至２００℃。载气为高纯氦 气（９９．９９９％），恒流模式，流速为１．０ ｍＩＺｍｉｎ，不分流进样， 进样量１ 。 添加剂联合专家委员会（ＪＥＣＦＡ）第６４次会议建议，为了保障 人类的身体健康，应尽可能降低发酵饮料和食品中的ＥＣ 含量。 １．４．２质谱条件ＥＩ源源温２３０℃；电子能量７Ｏ ｅＶ；接口 温度２８０℃；电子倍增器电压１ １２９ Ｖ；选择离子监测方式 （ＳＩＮ ｍｏｄｅ）中定性离子：ｍ／ｚ ６２、ｍ／ｚ ７４、ｍ／ｚ ８９；定量离子 ｍ／ｚ ６２；溶剂延迟：１０ ｗｉｎ。 １．５前处理方法 为了降低乙醇饮料中的ＥＣ含量，各国政府都采取了相 应措施，但我国对酒类中氨基甲酸乙酯的研究还比较滞后。 目前我国尚无酒类中ＥＣ的限量标准，检测方法的标准仅有 ＳＮ ０２８５－－１９９３《出口酒类中氨基甲酸乙酯残留量检测方 法》 ，但该方法的检出限和回收率难以满足实际检验工作 的需要。本研究旨在建立一套能快速、准确地检验出酒类产 品中ＥＣ的方法。 １材料与方法 固相萃取提取：称取２．０ ｇ酒样加于固相萃取柱上，将固 相萃取柱安置于自动固相萃取仪中。设置自动洗脱程序为： 吸附时间１０ ｗｉｎ，１０ ｍＬ正己烷（２ ｍＩＺｍｉｎ）淋洗除杂，１０ ｍＬ 二氯甲烷（２ ｍＬ／ｍｉｎ）洗脱收集。将收集的洗脱液于３Ｏ℃氮 吹浓缩至１ ｍＬ。 ２结果与讨论 收稿日期：２０１２—１２—２５ 作者简介：周玮（１９８２一），男，江苏如东人，硕士，工程师，主要研究 方向为食品安全。Ｅ—ｍａｉｌ：ｏｕｍｉｑｉａｎｇ＠１６３．ｔｏｍ。 ２．１色谱柱的选择 选用ＨＰ一５ＭＳ非极性色谱柱和ＤＢ一２２５ＭＳ极性色谱 柱。结果表明：ＨＰ一５ＭＳ的分离效果较差，在该色谱柱上的 江苏农业科学２０１３年第４１卷第７期 －－——２９１・・—— 溶剂峰和目标峰距离太近，容易产生干扰；ＤＢ一２２５ＭＳ的分 数为０．９９９ １。试验表明，在１０～１００ ｇ／Ｌ范围内，该检测方 离效果较好，灵敏度和重现性好。ＥＣ标准样品在ＤＢ一２２５ＭＳ 法线性关系良好；当称样量为２．Ｏ０ ｇ时，检出限为１ Ｉｘｇ／Ｌ。 上的表现见图１。 ３５ ０００ ３０ ０００ ２５ ０００ ＊２０ ０００ ｌ５ ０００ １００００ ５ ０００ Ｏ Ｉ Ｌ Ｌ一———Ｌ— ． １１ ｌ２ ｌ３ ｌ４ ｌ５ １６ 保留时间（ｍｉｎ） 图１ ＥＣ标样图谱 ２．２目标离子的选择 在ＳＣＡＮ模式下，ＥＣ的总离子如图２所示。丰度较高的 离子为ｍ／ｚ ３１、ｍ／ｚ４４、ｍ／ｚ ６２、ｍ／ｚ ７４、ｍ／ｚ ８９。其中ｍ／ｚ ８９ 为分子离子，ｍ／ｚ ６２是大多数非氮取代的氨基甲酸类化合物 的特征离子，ｍ／ｚ ７４也是特征性的碎片离子，但ｍ／ｚ ８９和 ｍ／ｚ７４的丰度较小，响应值弱，不宜作为定量离子。ｍ／ｚ ３１ 和ｍ／ｚ４４在ＮＩＳＴ库中也没有呈现（图３），在实际试验中发 ４ ４ ３ 越仆 ３ 现标样中的这２个碎片离子呈现一种不规律的变化，可能是 由于溶剂中引入了杂质。 ７０ ０００ ６０ ０００ ： 一 ●，’ ５００００ ＊４００００ ： ３００００ － ２０ ０００ ● ｌ００００ 。０ Ｈｆｊ ．１ 。ｌ。。 …………………… ３Ｏ ５Ｏ ７０ ９Ｏ ｌ１０ １３Ｏ ｌ５Ｏ ｌ７Ｏ １９０ 分子量 图２ ＥＣ总离子图 Ｉｕｕ 釜ｌ荽 ｝５０ ，、 、楼 ｝ ｝ ： ｊ“ Ｉ０ 一 —舂一 … 分子量 ２．３工作曲线和检出限 按上述标准曲线的绘制方法，以标样峰面积和溶剂质量 含量计算出回归方程和相关系数，并根据信噪比（Ｓ／Ｎ）＝３ 计算出检出限。线性回归方程为：，，＝９４７ｘ＋３９４，线性相关系 ２．４精密度和回收率 取浓度为１００ ＩＸｇ／Ｌ的标准工作溶液，进样１ ＩＸＬ进行仪 器分析，重复测定６次，得到峰面积ＲＳＤ为０．３６％。取酒样 并加入１ ｍＬ １００ ｇ／Ｌ标准溶液，按上述方法进行样品前处 理和测定，计算得到该方法的回收率为８１．２％。 ２．５酒样品的测定 测定了市售的２种黄酒和２种葡萄酒中的ＥＣ含量，部 分样品的测定图谱见图４。检测结果表明，２种葡萄酒中的 ＥＣ含量分别为１Ｏ．５、２１．４ Ｉｘｇ／ｋｇ，２种黄酒中的ＥＣ含量分别 为１０．４、３３．０ ｓ／ｋｇ。 ： ： 氨基甲酸Ｚ 酯 Ｌ ｌ ｌＯ Ｉ１ ｌ２ ｌ３ ｌ４ ｌ５ １６ 保留时间（ｍｉｎ） 图４酒样中的ＥＣ测定图谱 ３结论 本试验建立了酒中氨基甲酸乙酯的提取和测定方法。采 用全自动固相萃取仪，提高了方法的精密度，降低了由于试验 人员操作引入的误差。本研究采用了ＤＢ一２２５ＭＳ色谱柱，使 酒中微量的氨基甲酸乙酯得到了良好的分离。本试验方法易 于掌控、定量准确、重复性好。可以作为商检行业标准方法的 替代方法使用。 参考文献： ［１］Ｚｉｍｍｅｒｌｉ Ｂ，Ｓｅｈｌａｔｔｅｒ Ｊ．Ｅｔｈｙｌ ｅａｒｂａｍａｔｅ：ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ，ＯＣ— ｅｕｒｒｅｎｃｅ，ｆｏｒｍａｔｉｏｎ，ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｉｒｓｋ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｍｕｔａ－ ｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ／Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，１９９１，２５９（３／４）：３２５—３５０． ［２］Ｍｉｌｌｅｒ Ｙ Ｅ，Ｄｗｙｅｒ—Ｎｉｅｌｄ Ｌ Ｄ，Ｋｅ ｈ Ｒ Ｌ，ｅｔ １ａ．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｈｉｓｈ ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ｏｆ ｌｕｎｇ ｔｕｍｏｒｓ ｉｎ Ｃ５７ＢＬ／６ ｍｉｃｅ ｗｉｈｔ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｅｔｈｙ｜ｅａｒｂａ— ｍａｔｅ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔｅｒｓ，２００３，１９８（２）：１３９—１４４． ［３］Ｏｕｓｈ Ｃ Ｓ．Ｅｔｈｙｌｃａｒｂａｍａｔｅ ｉｎ ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｂｅｖｅｒａｇｅｓ ａｎｄ ｆｏｏｄｓ．ＩＩ． Ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｔｈｙｌｃａｒｂａｍａｔｅ ｆｒｏｍ ｄｉｅｔｈｙｌ ｄｉｅａｒｂｏｎａｔｅ ａｄｄｉｔｉｏｎ ｔｏ ｗｉｎｅ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａ ｃｕｌｔｕｒａｌ ａｎｄ Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９７６，２４ （２）：３２８—３３１． ［４］Ｏｕｇｈ Ｃ Ｓ．Ｅｔｈｙｌ ｃａｒｂａｍａｔｅ ｉｎ ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｂｅｖｅｒａｇｅｓ ａｎｄ ｆｏｏｄｓ．Ｉ． Ｎａｔｕｒａｌｌｙ ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ ｅｔｈｙｌｃａｒｂａｍａｔｅ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｒｕａｌ ａｎｄ Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９７６，２４（２）：３２３—３２８． ［５］ＳＮ ０２８５－－１９９３ 出口酒类中氨基甲酸乙酯残留量检验方法 『Ｓ１． ２ ２ ｌ
